一种中药提取废渣中活性物质含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种中药提取废渣中活性物质含量的检测方法，活性物质为绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、灰毡毛忍冬皂苷甲和灰毡毛忍冬皂苷乙，采用超高压液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种中药提取废渣中活性物质含量的检测方法


[0001]本专利技术涉及检测方法，具体涉及一种中药提取废渣中活性物质含量的检测方法。

技术介绍

[0002]脉络宁作为一款中药复方静脉注射剂，由石斛、玄参、牛膝、金银花、山银花等原料制成，具有清热养阴、活血化瘀的功效，在预防和治疗缺血性中风急性期、脉管炎、动脉硬化、心绞痛、血液循环障碍等心血管等相关疾病上发挥了积极的作用，具有疗效高、见效快、价格低廉、安全性高等优点。
[0003]脉络宁注射剂的酯提废渣经分析，含有活性化学物质绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、灰毡毛忍冬皂苷甲和灰毡毛忍冬皂苷乙。绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸C都是酚酸类化合物，为众多药材和中成药抗菌解毒、消炎利胆的主要有效成分，有研究表明绿原酸减轻饮食诱导的炎症以及心血管、肝脏和代谢的变化；异绿原酸A可以使AMP活化激酶和乙酰辅酶A羧化增加的磷酸化，以及脂肪酸合酶蛋白水平的显着降低，减少3T3
‑
L1脂肪细胞中的脂肪酸合成代谢；异绿原酸C通过在体外抑制核因子κB和MAPK途径的活化，并减少卡拉胶诱导的体内水肿来发挥抗炎作用。灰毡毛忍冬皂苷甲和灰毡毛忍冬皂苷乙均为皂苷类化合物，其中灰毡毛忍冬皂苷甲具有抗炎功效，被证实可以保护受到药物或毒物损伤的肝脏细胞；灰毡毛忍冬皂苷乙可以增强细胞内的氧化应激和活性氧水平，进而导致细胞凋亡，可以实现对大肠癌等肿瘤细胞的抑制作用，这些化合物的生理活功能以及医疗与经济价值获得了关注。
[0004]目前文献和专利中对上述5种活性物质主要采用HPLCr/>‑
ELSD(高效液相
‑
蒸发光散射)或UPLC(超高效液相色谱)等方法进行测定，上述检测方法主要的针对对象为化学组分数量较少的单一中药材，在脉络宁注射剂的酯提废渣中，因药物为复方中药，所用药材数目较多，且药物在提取的过程中经过了多步工艺处理，有组分的化学结构发生变化，因此在废渣中化学组分数量多，用普通的高效液相色谱法难以进行分离。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：为了解决现有技术存在的技术问题，本专利技术旨在提供一种检测效率高、检测准确度高且适用于成分复杂的中药提取废渣中活性物质含量的检测方法。
[0006]技术方案：本专利技术所述的中药提取废渣中活性物质含量的检测方法，所述活性物质为绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、灰毡毛忍冬皂苷甲和灰毡毛忍冬皂苷乙，采用超高压液相色谱
‑
飞行时间质谱仪进行含量检测，步骤如下：
[0007](1)制备供试品溶液：制备供试品溶液：取中药提取废渣，稀释过滤，作为供试品溶液；
[0008](2)制备对照品溶液：精密称定绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、灰毡毛忍冬皂苷甲、灰毡毛忍冬皂苷乙混合，用甲醇配制成对照品溶液；
[0009](3)色谱条件：色谱柱：Agilent Poroshell 120 SB
‑
AQ C18，流动相A为0.1％甲酸
水溶液，流动相B为甲醇，洗脱方式为梯度洗脱，流速：0.3
‑
0.5mL/min，进样量5μL；
[0010]质谱条件：采用ESI离子源，离子化模式为负离子模式：0
‑
45min，135V，45
‑
75min，175V，毛细管电压为3.5kV，干燥气温度350℃；
[0011](4)测定方法：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入超高压液相色谱
‑
飞行时间质谱仪，按步骤(3)所述的色谱条件和质谱条件进行测定，即得。
[0012]进一步地，步骤(1)中，所述的中药提取废渣脉络宁注射液酯提废渣，制备供试品溶液的过程具体为：取脉络宁注射液酯提废渣，用10倍水稀释，过ADS
‑
7大孔树脂柱，经水、10％乙醇、90％乙醇和100％乙醇梯度洗脱，收集90％乙醇洗脱部位，取500μL，氮吹至干，以1mL甲醇溶解，再用甲醇稀释10倍，经0.22μm滤膜过滤得供试品溶液；
[0013]进一步地，步骤(2)中，所述的绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、灰毡毛忍冬皂苷甲、灰毡毛忍冬皂苷乙的质量比为2:1:2:1:4。
[0014]进一步地，步骤(3)中，所述的色谱柱的规格为3.0mm
×
100mm，粒径为2.7μm，色谱柱的柱温呈梯度变化，0
‑
20min，20
±
5℃；20
‑
75min，40
±
5℃。
[0015]进一步地，步骤(3)中，所述的梯度洗脱的洗脱程序为：0
‑
20min，80％
→
75％流动相A，20％
→
25％流动相B；20
‑
25min，75％
→
65％流动相A，25
→
35％流动相B；25
‑
40min，65％
→
50％流动相A，35
→
50％流动相B；40
‑
75min，50％
→
30％流动相A，50
→
70％流动相B。
[0016]进一步地，步骤(3)中，所述的质谱所用的电离模式为负电离模式，在进行质谱分析时，对各活性物质的一级质谱进行二级质谱裂解，裂解的条件为：裂解电压为：酚酸、黄酮和环烯醚萜90V，皂苷210V，碰撞能量为195V，雾化气体为N2，子离子扫描范围m/z为100
‑
1700，雾化气压力50psi，干燥气流速10.0L/min，Skimmer电压65V。
[0017]进一步地，所述的绿原酸的出锋时间为11
‑
13min；异绿原酸A的出锋时间为35
‑
36min；异绿原酸C的出锋时间为38
‑
40min；灰毡毛忍冬皂苷乙的出锋时间为52
‑
54min；灰毡毛忍冬皂苷甲的出锋时间为54
‑
56min。
[0018]有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有以下显著优点：本专利技术检测方法通过采用超高压液相色谱
‑
飞行时间质谱仪对中药脉络宁酯提废渣中的五种活性成分同时进行了含量测定，建立了方便、可靠与准确的定量方法，不仅为含有复杂成分的中药提取废渣中活性成分的含量测定提供了依据，还为中药资源的综合利用与废弃物回收开发工作提供了参考与评判依据。
附图说明
[0019]图1为本专利技术实施例1对照品溶液TIC图；
[0020]图2为本专利技术实施例1供试品溶液TIC图，峰1：绿原酸，峰2：异绿原酸A，峰3：异绿原酸C，峰4：灰毡毛忍冬皂苷乙，峰5：灰毡毛忍冬皂苷甲。
具体实施方式
[0021]下面，结合具体实施例和附图进一步对本专利技术进行说明。
[0022]实施例1：本专利技术所述脉络宁酯提废渣中活性物质含量的测定方法如下：
[0023]1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种中药提取废渣中活性物质含量的检测方法，所述活性物质为绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、灰毡毛忍冬皂苷甲和灰毡毛忍冬皂苷乙，其特征在于，采用超高压液相色谱
‑
飞行时间质谱仪进行含量检测，步骤如下：(1)制备供试品溶液：取中药提取废渣，稀释过滤，作为供试品溶液；(2)制备对照品溶液：精密称定绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、灰毡毛忍冬皂苷甲、灰毡毛忍冬皂苷乙混合，用甲醇配制成对照品溶液；(3)色谱条件：色谱柱：Agilent Poroshell 120 SB
‑
AQ C18，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇，洗脱方式为梯度洗脱，流速：0.3
‑
0.5mL/min，进样量5μL；质谱条件：采用ESI离子源，离子化模式为负离子模式：0
‑
45min，135V，45
‑
75min，175V，毛细管电压为3.5kV，干燥气温度350℃；(4)测定方法：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入超高压液相色谱
‑
飞行时间质谱仪，按步骤(3)所述的色谱条件和质谱条件进行测定，即得。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的中药提取废渣为脉络宁注射液酯提废渣。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C、灰毡毛忍冬皂苷甲、灰毡毛忍冬皂苷乙的质量比为2:1:2:1:4。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的色谱柱的规格为3.0mm
×
100mm，粒径为2.7μm。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的色谱柱的柱温呈梯度变化，0
‑
20min，20
±
5℃；20
‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：鲁正熹，陈雨，李剑，姚静远，冯煦，徐向阳，何晓东，印敏，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所金陵药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：