血浆中胺碘酮和去乙基胺碘酮的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种血浆中胺碘酮和去乙基胺碘酮的检测方法，涉及药物检测的技术领域。该检测方法包括将经过前处理的样本使用高效液相色谱检测，将检测值带入标准曲线中，计算得到血浆样本中胺碘酮和去乙基胺碘酮的含量；前处理包括使用萃取剂萃取待测样本，萃取剂包括甲醇和乙腈。该检测方法缓解了现有技术中存在的血浆中胺碘酮和去乙基胺碘酮检测方法复杂耗时，检测成本较高的问题。检测成本较高的问题。检测成本较高的问题。

【技术实现步骤摘要】
血浆中胺碘酮和去乙基胺碘酮的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物检测
，尤其是涉及一种血浆中胺碘酮和去乙基胺碘酮的检测方法。

技术介绍

[0002]心律失常是临床常见的心血管疾病，以心悸、头晕为主要表现，若不及时予以治疗可导致患者晕厥，甚至是死亡，严重威胁患者生命。盐酸胺碘酮又名乙胺碘吠酮，是一个广泛用于治疗及预防室性及室上性心律失常的第Ⅲ类抗心律失常药物。
[0003]胺碘酮口服吸收不完全，起效慢，半衰期长；生物利用度约为50％，表观分布容积大约60L/kg，主要分布于脂肪组织及含脂肪丰富的器官，其次为心、肾、肺、肝及淋巴结。胺碘酮在血浆中62.1％与蛋白结合，33.5％可能与β脂蛋白结合。也有研究显示，胺碘酮的血浆蛋白结合率为95％。
[0004]静脉输液可能导致静脉炎，长期的服用容易造成胺碘酮及代谢物去乙基胺碘酮在体内的积累。这种由于药物代谢慢和药物积聚而引起的不良反应会造成包括肺中毒、肝中毒、神经毒性以及其他副作用(个体差异较大)。去乙基胺碘酮和母药胺碘酮有类似的生理活性和药理作用。因此监测胺碘酮及去乙基胺碘酮有助于指导其临床应用，以及提高药物疗效，避免或减少不良反应发生。
[0005]胺碘酮的检测方法主要包括高效薄层色谱法，高效液相色谱法，胶束毛细管电泳法，离子色谱法，LCMSMS法等。
[0006]液相色谱
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质谱法(LC
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MS/MS)测定胺碘酮具有非常高的灵敏度，特异性和准确度。但是LC
‑
MS/MS法需要一个耗时且复杂的前处理过程而且复杂的设备操作对操作人员有更高的要求，昂贵的设备及维护成本需要更大的资金投入。同时，由于胺碘酮在血浆中蛋白结合率极高，这也为准确且灵敏的检测血浆中的胺碘酮提高了技术难度。
[0007]因此，如何降低检测成本，简化操作，同时又能保证检测灵敏度，特异性和准确度是目前亟需解决的问题。
[0008]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于提供一种血浆中胺碘酮和去乙基胺碘酮的检测方法，该检测方法缓解了现有技术中存在的血浆中胺碘酮和去乙基胺碘酮检测方法复杂耗时，检测成本较高的问题。
[0010]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0011]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种血浆中胺碘酮和去乙基胺碘酮的检测方法，包括将经过前处理的样本使用高效液相色谱检测，将检测值带入标准曲线中，计算得到血浆样本中胺碘酮和去乙基胺碘酮的含量；
[0012]所述前处理包括使用萃取剂萃取待测样本，所述萃取剂包括甲醇和乙腈。
[0013]优选地，所述萃取剂为甲醇和乙腈的混合体系，按体积百分比计含有甲醇5～15％和乙腈85～95％；
[0014]优选地，所述萃取剂按体积百分比计含有甲醇10％和乙腈90％；
[0015]优选地，所述待测样本和萃取剂的体积比为1:3～1:5；优选为1:4。
[0016]优选地，所述前处理还包括将萃取剂和待测样本的混合体系震荡；
[0017]优选地，所述震荡为在恒温振荡器中震荡3～10min，优选为震荡5min；
[0018]优选地，将震荡后的萃取剂和待测样本的混合体系离心，取上清液至新的反应容器中，再次离心后进行高效液相色谱检测；
[0019]优选地，前处理步骤在96孔板中进行。
[0020]优选地，所述高效液相色谱检测的流动相包括流动相A和流动相B；
[0021]所述流动相A为水相，所述流动相A中含有磷酸二氢钾和磷酸；
[0022]所述流动相B为有机相；
[0023]优选地，所述流动相A中含有浓度为5～10mM的磷酸二氢钾和0.1～0.5％v/v的浓磷酸，所述浓磷酸为浓度≥85％的高效液相色谱级磷酸；
[0024]优选地，所述流动相A中含有浓度为5mM的磷酸二氢钾和0.2％v/v的浓磷酸；
[0025]优选地，所述流动相B为乙腈；
[0026]优选地，所述高效液相色谱检测使用Waters XBridge C18色谱柱。
[0027]优选地，所述高效液相色谱检测的洗脱程序为：
[0028]0.00min，流动相A 50％，流动相B 50％；
[0029]10.00min，流动相A 40％，流动相B 60％；
[0030]12.00min，流动相A 15％，流动相B 85％；
[0031]14.00min，流动相A 15％，流动相B 85％；
[0032]14.10min，流动相A 50％，流动相B 50％；
[0033]15.00min，流动相A 50％，流动相B 50％。
[0034]优选地，所述血浆的来源包括小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、兔、雪貂、猫、狗、山羊、绵羊、奶牛、猪、马、猴或人，优选为人体血浆。
[0035]优选地，所述标准曲线为标准曲线工作液中标准品的含量与标准品检测值的对应关系；
[0036]优选地，所述标准曲线以标准曲线工作液中标准品的色谱峰面积为因变量，以标准品工作液中标准品浓度为自变量进行线性回归；
[0037]优选地，所述标准曲线工作液中胺碘酮和去乙基胺碘酮的浓度范围分别独立的为0.05～5.00μg/mL；
[0038]优选地，所述标准曲线工作液的基质为动物血浆；优选为牛血浆；更优选为新生牛血浆。
[0039]优选地，所述检测方法还包括检测质控品。
[0040]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0041]本专利技术提供的血浆中胺碘酮和去乙基胺碘酮的检测方法，包括将经过前处理的样本使用高效液相色谱检测，将检测值带入标准曲线中，计算得到血浆样本中胺碘酮和去乙基胺碘酮的含量。其中前处理包括使用萃取剂萃取待测样本，萃取剂包括甲醇和乙腈。
[0042]本专利技术针对市场上诊断血浆中胺碘酮及去乙基胺碘酮方法的缺陷，研究了一种能准确、高通量同时检测人血浆中胺碘酮及去乙基胺碘酮的高效液相法。本专利技术通过优化了萃取剂的组成和前处理的步骤，改善了由于胺碘酮易于和血浆中的血浆蛋白结合，难以分离的缺陷，从而提高了后续高效液相色谱法对样本的检测效果。样品经前处理后，进入液相色谱仪进行检测，可以实现高通量的检测，并且二十分钟之内即可完成胺碘酮及去乙基胺碘酮的药物测试，方便，快速。该检测方法能满足相关法规对胺碘酮及去乙基胺碘酮药物检测的线性、重复性、批间差、准确度、稳定性等的要求，对监测患者胺碘酮及去乙基胺碘酮药物有重要作用。
[0043]本方法采用高效液相法高通量检测血浆中胺碘酮及去乙基胺碘酮，一次检测可同时得到胺碘酮及去乙基胺碘酮的检测结果，具有灵敏度高，重复性好，准确性高，特异性好等特点。该方法胺碘酮线性范围0.05
‑
5.00μg/mL，去乙基胺碘酮0.05
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5.00μg/mL，相关系数均r≥0.999；低值质控品重复性的变异系数(CV)≤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.血浆中胺碘酮和去乙基胺碘酮的检测方法，其特征在于，包括将经过前处理的样本使用高效液相色谱检测，将检测值带入标准曲线中，计算得到血浆样本中胺碘酮和去乙基胺碘酮的含量；所述前处理包括使用萃取剂萃取待测样本，所述萃取剂包括甲醇和乙腈。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述萃取剂为甲醇和乙腈的混合体系，按体积百分比计含有甲醇5～15％和乙腈85～95％；优选地，所述萃取剂按体积百分比计含有甲醇10％和乙腈90％；优选地，所述待测样本和萃取剂的体积比为1:3～1:5；优选为1:4。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述前处理还包括将萃取剂和待测样本的混合体系震荡；优选地，所述震荡为在恒温振荡器中震荡3～10min，优选为震荡5min；优选地，将震荡后的萃取剂和待测样本的混合体系离心，取上清液至新的反应容器中，再次离心后进行高效液相色谱检测；优选地，所述将震荡后的萃取剂和待测样本的混合体系离心的离心条件为0～10℃，3000～5000rmp离心5～15min；优选地，所述将震荡后的萃取剂和待测样本的混合体系离心的离心条件为4℃，4000rmp离心10min；优选地，高效液相色谱检测前离心的离心条件为0～10℃，3000～5000rmp离心3～10min；优选地，高效液相色谱检测前离心的离心条件为4℃，4000rmp离心5min；优选地，前处理步骤在96孔板中进行。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A为水相，所述流动相A中含有磷酸二氢钾和磷酸；所述流动相B为有机相；优选地，所述流动相A中含有浓度为5～10mM的磷酸二氢钾和0.1～0.5％v/v的浓磷酸，所述浓磷酸为浓度≥85％的高效液相色谱级磷酸；优选地，所述流动相A中含有浓度为5mM的磷酸二氢钾和0.2％v/v的浓磷酸；优选地...

【专利技术属性】
技术研发人员：应洪波，张新星，栗琳，苏营雪，丁沛瑜，郑佳，周继福，薛元强，周立，丁亮，
申请(专利权)人：江苏豪思睦可生物科技有限公司湖南豪思生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：