一种金黄色葡萄球菌的富集培养方法和检测方法技术

本发明专利技术涉及微生物检测技术领域，公开了一种金黄色葡萄球菌的富集培养方法和检测方法。本发明专利技术将纤维素磁珠用无菌水重复洗涤，最后用无菌水重悬纤维素磁珠，得到磁珠液；将含有金黄色葡萄球菌的样本与所述磁珠液混合培养一段时间，分离磁珠，检测磁珠上富集的金黄色葡萄球菌。本发明专利技术的制备方法能够缩短至少1小时的检测时间，简单快速成本低。简单快速成本低。简单快速成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种金黄色葡萄球菌的富集培养方法和检测方法


[0001]本专利技术涉及食品微生物检测领域，具体涉及一种利用纤维素磁珠进行金黄色葡萄球菌的富集培养和检测方法。

技术介绍

[0002]检测食品样本中的致病菌时，通常由于目标菌含量低以及干扰物质的存在，大大降低检测结果的灵敏度和特异性，需要预増菌和选择性增菌，这就延长了检测时间。为缩短预増菌时间，需要对细菌进行浓缩富集。当前市场上细菌富集的磁珠包括功能化磁珠、静电吸附磁珠和裸磁珠等。
[0003]功能化磁珠目前应用广泛的技术是免疫磁分离技术。基于磁性微珠的免疫磁分离法(IMS)是将目标菌抗体连接到磁珠上，然后将连有抗体的磁珠投入样品液中对目标菌进行捕获、富集、磁分离。如中国专利CN103333818A公开了一种金黄色葡萄球菌分离的方法，其制备的纳米磁珠
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链霉亲和素
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长链生物素
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树状分子
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抗体
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SA复合物，借助树状分子的级联放大效应，将磁细菌信号成指数级扩大，在较低的磁场强度下就能实现磁细菌的分离，较常规免疫磁珠分离方法分离到目的菌能力更强。但是免疫磁分离中使用的抗体成本较为昂贵，且环境耐受能力差，方法繁琐操作复杂。
[0004]静电吸附磁珠能够吸附革兰氏阳性菌和阴性菌，但是不能特异性吸附细菌，操作复杂，耗时久，方法不够成熟。中国专利CN114774508A公开了一种磁珠富集金黄色葡萄球菌的方法，其制备得到金黄色葡萄球菌
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头孢吡肟
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聚氧乙烯二胺
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磁性纳米粒子复合物，相比于基于氢键或静电相互作用力的识别元件功能化磁性纳米粒子，该聚氧乙烯二胺介导的头孢吡肟功能化磁性纳米粒子复合物与细菌相互作用力更稳定，可以将基质中的低浓度的细菌几乎都分离出来，提高金黄色葡萄球菌的捕获效率。但该磁性纳米粒子不能达到特异性吸附，且制备方法复杂，步骤繁多，仍是影响其推广的主要阻碍因素。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一种金黄色葡萄球菌的富集培养和检测方法，对金黄色葡萄球菌能够达到特异性吸附，方法简单易行，大大缩短检测时间。
[0006]本专利技术的技术方案如下：
[0007]一种金黄色葡萄球菌的富集培养方法，包括以下步骤：将纤维素磁珠用无菌水重复洗涤，最后用无菌水重悬纤维素磁珠，得到磁珠液；将含有金黄色葡萄球菌的样本与所述磁珠液混合培养一段时间，分离磁珠，得到富集金黄色葡萄球菌的磁珠。
[0008]优选的，所述无菌水洗涤的次数为三次。
[0009]优选的，所述磁珠液中，无菌水的体积为纤维素磁珠原始磁珠液的1/10
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1/5。
[0010]本专利技术中，所述培养为在金黄色葡萄球菌的增菌培养基中进行。进一步优选，所述增菌培养基为BHI培养基。
[0011]本专利技术中，所述培养的温度为37℃，培养条件为震荡培养。进一步优选震荡频率为
180
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220rpm。
[0012]优选的，所述培养的时间为3
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5h。
[0013]本专利技术中，所述磁珠液现用现配。
[0014]本专利技术还提供了一种检测样本中金黄色葡萄球菌的方法，采用上述的方法富集培养金黄色葡萄球菌，在得到的富集有金黄色葡萄球菌的磁珠中加入裂解液，提取核酸进行PCR检测。
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0016]本专利技术采用纤维素磁珠特异性吸附金黄色葡萄球菌，从而实现了金黄色葡萄球菌的富集和培养。利用纤维素磁珠表面孔径对金黄色葡萄球菌进行特异性吸附，不用连接抗体，解决了免疫磁珠昂贵的问题。
[0017]本专利技术用无菌水对纤维素磁珠进行洗涤和重悬，去除了影响磁珠吸附和金黄色葡萄球菌生长的成分，制备方法简单快速，解决了操作复杂耗时久的问题。
[0018]本专利技术的方法能够在3小时内将低浓度菌液富集，并且増菌到PCR能够检测到的浓度，缩短金黄色葡萄球菌至少1小时的检测时间。
附图说明
[0019]图1为染24个金黄色葡萄球菌后纤维素磁珠的吸附检测效果。
具体实施方式
[0020]本专利技术提供了一种金黄色葡萄球菌的富集培养方法，包括以下步骤：将纤维素磁珠用无菌水重复洗涤，最后用无菌水重悬纤维素磁珠，得到磁珠液；将含有金黄色葡萄球菌的样本与所述磁珠液混合培养一段时间，分离磁珠，得到富集金黄色葡萄球菌的磁珠。
[0021]本专利技术发现，原始纤维素磁珠悬液的成分中有杀菌作用，将纤维素磁珠磁吸去掉残液后，用无菌水重悬磁珠能够特异性吸附金黄色葡萄球菌，实现金黄色葡萄球菌的富集培养和快速检测。
[0022]作为一种实施方式，预先将纤维素磁珠液置于磁力架，磁吸去掉残液，用无菌水重复洗涤。本专利技术中，所述无菌水洗涤的次数优选为2
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3次。
[0023]本专利技术洗涤完成后，将无菌水重悬纤维素磁珠，得到磁珠液。优选的，所述磁珠液中，无菌水的体积为纤维素磁珠原始磁珠液的1/10
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1/5。
[0024]本专利技术将含有金黄色葡萄球菌的样本与所述磁珠液混合富集培养一段时间。本专利技术中，所述培养为在金黄色葡萄球菌的增菌培养基中进行。进一步优选，所述增菌培养基为BHI培养基。所述培养的温度优选为金黄色葡萄球菌的适宜培养温度，例如为37℃；培养条件为震荡培养，进一步优选震荡频率为180
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220rpm。优选的，所述培养的时间为3
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5h。
[0025]本专利技术中，所述磁珠液现用现配。由于磁珠悬液为磁珠的保护、保存剂，与磁珠的功能、形态有关。本专利技术所用磁珠液为现用现配，若配制时间过长，则影响纤维素磁珠对金黄色葡萄球菌的富集培养效果。
[0026]本专利技术还提供了一种检测样本中金黄色葡萄球菌的方法，采用上述的方法富集培养金黄色葡萄球菌，在得到的富集有金黄色葡萄球菌的磁珠中加入裂解液，提取核酸进行PCR检测。作为一种实施方式，本专利技术用SAT试剂盒提取核酸，所用方法参照试剂盒说明进
行。PCR检测方法为本领域中的常规方法进行，本专利技术对此方法不做明确限定。经实验证明，本专利技术将纤维素磁珠重悬于无菌水中，与金黄色葡萄球菌共同培养，能够实现金黄色葡萄球菌的富集培养。纤维素磁珠能够特异性吸附金黄色葡萄球菌，缩短检测金黄色葡萄球菌至少1小时的时间。
[0027]下面通过具体实施方式结合附图对本专利技术作进一步详细说明。
[0028]应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术记载的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0029]以下实施例中所用纤维素磁珠型号为CB
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CLSO1，购自于恺硕生物科技(厦门)有限公司，磁珠粒径为5μm。
[0030]实施例1
[0031]纤维素磁珠对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种金黄色葡萄球菌的富集培养方法，其特征在于，包括以下步骤：将纤维素磁珠用无菌水重复洗涤，最后用无菌水重悬纤维素磁珠，得到磁珠液；将含有金黄色葡萄球菌的样本与所述磁珠液混合培养一段时间，分离磁珠，得到富集金黄色葡萄球菌的磁珠。2.根据权利要求1所述的富集培养方法，其特征在于，所述无菌水洗涤的次数为三次。3.根据权利要求1所述的富集培养方法，其特征在于，所述磁珠液中，无菌水的体积为纤维素磁珠原始磁珠液的1/10
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1/5。4.根据权利要求1所述的富集培养方法，其特征在于，所述培养为在金黄色葡萄球菌的增菌培养基中进行。5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：重增军，宋晓礁，张銮，解沙沙，刘萌，于秀剑，郑思晴，钮雅斌，
申请(专利权)人：张家口富熙生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：