一种幽门螺旋杆菌固体培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种幽门螺旋杆菌固体培养基，涉及微生物选择分离培养技术。本发明专利技术添加幽门螺旋杆菌抑菌剂，在不影响幽门螺旋杆菌生长的基础上，抑制大多数真菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长；并通过丙酮酸钠等抗氧化剂提高幽门螺杆菌的生长和耐气性，中和氧气的毒性作用和抗生素的抑制作用，从而增强幽门螺杆菌的分离，同时提供一部分能量；通过添加溶菌酶提高幽门螺旋杆菌传代成活率，完成初代选择分离培养和次代纯化培养，延长幽门螺旋杆菌菌体形态维持时间，提高阳性检出率。本发明专利技术具有高度选择性、生长率高和维持菌体形态等优点，可应用于临床、环境中对幽门螺旋杆菌的检测和培养。测和培养。

【技术实现步骤摘要】
一种幽门螺旋杆菌固体培养基


[0001]本专利技术涉及微生物选择分离培养
，具体涉及一种幽门螺旋杆 菌固体培养基。

技术介绍

[0002]幽门螺旋杆菌是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的革 兰氏阴性杆菌。在1994年幽门螺杆菌被世界卫生组织所属国际癌症研究 中心列为I类生物致癌因子。2017年10月27日公布的致癌清单中再次被 列为I类致癌物。
[0003]因此对于幽门螺旋杆菌的检测十分有必要，但幽门螺旋杆菌生长缓 慢，通常需要3～5天甚至更长时间，才能形成针尖状小菌落。为了抑制快 速生长的兼性厌氧菌和霉菌等，常需在培养基内加入由万古霉素、TMP、 两性霉素、多黏菌素等组合的抑菌剂，以防止杂菌对幽门螺旋杆菌菌落的 掩盖以及对菌株生长的影响。
[0004]现有的幽门螺旋杆菌固体培养基为了抑制杂菌加入大量的抗生素从 而也抑制了幽门螺旋杆菌本身的生长，如何在维持幽门螺旋杆菌的高生长 率的，又能抑制其他干扰菌株的生长是目前幽门螺旋杆菌培养基领域需要 解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术公开了一种选择培养幽门螺旋杆菌的固体培养基，涉及微生物 选择分离培养技术。添加幽门螺旋杆菌抑菌剂在不影响幽门螺旋杆菌的基 础上，抑制大多数真菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长；丙酮酸钠 等抗氧化剂可以提高幽门螺杆菌的生长和耐气性，中和氧气的毒性作用和 抗生素的抑制作用，从而增强幽门螺杆菌的分离，同时提供一部分碳源； 牛血清白蛋白提供丰富的营养物质供幽门螺旋杆菌的生长。可以在临床中 用于幽门螺旋杆菌的检测，也可对生活用水、废水和食物等生活环境进行 检测。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供技术方案如下：
[0007]一种幽门螺旋杆菌固体培养基，所述幽门螺旋杆菌固体培养基包括如 下含量的成分：
[0008][0009]进一步的，所述幽门螺旋杆菌固体培养基包括如下含量的成分：
[0010][0011]进一步的，所述抑菌剂包括但不限于万古霉素、头孢磺啶、两性霉素 B、甲氧苄啶和硫酸多粘菌素B中的至少一种，本领域技术人员认为可行 的抑菌剂种类均在本专利技术的保护范围之内。
[0012]进一步的，所述抑菌剂的组分为万古霉素、头孢磺啶、两性霉素B、 甲氧苄啶和硫酸多粘菌素B，按质量比万古霉素：头孢磺啶：两性霉素B： 甲氧苄啶和硫酸多粘菌素B＝4:2:2:2:1。
[0013]进一步的，所述幽门螺旋杆菌固体培养基的pH为7.0～7.5。
[0014]本专利技术还提供一种权利要求1所述的幽门螺旋杆菌固体培养基的制备 方法，包括以下步骤：
[0015]称取胰酶消化酪蛋白胨、葡萄糖、酵母浸粉、牛心浸粉、环糊精、氯 化钠、磷酸氢二钠、丙酮酸钠、甘氨酸、L
‑
半胱氨酸盐酸盐、二硫代苏糖 醇、琼脂加入蒸馏水中，121～125℃下灭菌处理，得到混合物：
[0016]将混合物的温度控制在45～55℃，往混合物中添加抑菌剂、牛血清白 蛋白和溶菌
酶进行混合，得到幽门螺旋杆菌固体培养基。
[0017]进一步的，所述抑菌剂、溶菌酶和牛血清白蛋白在幽门螺旋杆菌固体 培养基120～123℃灭菌后，降温至45～55℃时加入混合。
[0018]本专利技术还提供幽门螺旋杆菌固体培养基在培养幽门螺旋杆菌中的应 用。
[0019]进一步的，所述应用可以用于临床、环境中幽门螺旋杆菌的检验，以 及评估抗菌药物敏感性和替代药物的可能性。
[0020]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0021]1)本专利技术的培养基在各组分的相互作用下，抑制可快速生长的兼性 厌氧菌和霉菌，降低非目标菌株的干扰。
[0022]2)本专利技术通过添加多种抗氧化剂，有效避接菌时培养基与氧气的接 触，提高容错率，并且可持续降低培养基内氧气含量，维持幽门螺旋杆菌 生长的微需氧环境。
[0023]3)本专利技术通过添加溶菌酶提高幽门螺旋杆菌传代成活率，完成初代 选择分离培养和次代纯化培养，延长幽门螺旋杆菌菌体形态维持时间，提 高阳性检出率。
[0024]4)本专利技术使用富含脂质的牛血清白蛋白代替羊血或马血，有效避免 培养基颜色随时间延长而加深，培养基澄清透明，便于观察幽门螺旋杆菌 的菌落生长。
具体实施方式
[0025]为使本专利技术要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结 合具体实施例进行详细描述。
[0026]在本专利技术的一些实施例中，一种幽门螺旋杆菌固体培养基，包括如下 含量的成分：
[0027][0028]所述的抑菌剂按质量比万古霉素：头孢磺啶：两性霉素B：甲氧苄啶 和硫酸多粘菌素B＝4:2:2:2:1。
[0029]上述幽门螺旋杆菌固体培养基的制备方法如下：
[0030]称取胰酶消化酪蛋白胨、葡萄糖、酵母浸粉、牛心浸粉、环糊精、氯 化钠、磷酸氢二钠、丙酮酸钠、甘氨酸、L
‑
半胱氨酸盐酸盐、二硫代苏糖 醇、琼脂加入蒸馏水中，121～125℃下灭菌处理，得到混合物：
[0031]将混合物的温度控制在45～55℃，往混合物中添加万古霉素10mg/L、 头孢磺啶5mg/L、两性霉素5mg/L、甲氧苄啶5mg/L和硫酸多粘菌素B 2.5 μg/mL、牛血清白蛋白和溶菌酶进行混合，得到幽门螺旋杆菌固体培养基。
[0032]万古霉素是一种糖肽类抗生素，用于治疗细菌感染，通过阻碍细菌细 胞壁的合成，从而抑制细菌的生长和繁殖，对金黄色葡萄球菌、化脓链球 菌、肺炎链球菌等革兰氏阳性菌作用强；甲氧苄啶(TMP)为合成的广谱 抗菌剂，属磺胺增效药，其抗菌作用原理为干扰细菌的叶酸代谢。对多数 革兰阳性菌及革兰阴性菌有抗菌活性；头孢磺啶为第三代头孢菌
素，是第 一个抗铜绿假单胞菌的头孢类抗生素；两性霉素B为多烯类抗真菌药物， 对新型隐球菌、念珠菌属等有抑制作用；硫酸多粘菌素B对革兰氏阴性杆 菌有抑制或杀菌作用。
[0033]胰酶消化酪蛋白胨、葡萄糖、酵母浸粉、牛心浸粉和环糊精提供碳源、 氮源、维生素和矿物质；抗氧化剂吸收培养基中衍化产生的毒性氧离子； 氯化钠和磷酸氢二钠提供均衡的渗透压；牛血清白蛋白提供丰富的营养物 质；丙酮酸钠可以提高幽门螺杆菌的生长和耐气性，中和氧气的毒性作用 和抗生素的抑制作用，从而提高幽门螺杆菌的产量，同时可以提供一部分 能量，参与微生物营养代谢。
[0034]在对幽门螺旋杆菌分离株的传代研究发现，分离菌株再最初几次传代 中，其生长繁殖需要外源溶菌酶作用，再经过数次穿戴后该依赖性消失。 这是因为幽门螺旋杆菌在人体内的生存环境是富含溶菌酶的胃黏膜环境， 自身繁殖所需的解肽聚糖的酶其编码基因表达收到抑制或不表达，因此在 外部培养缺少溶菌酶的情况下此基因不能立即表达而导致样品中的幽门 螺旋杆菌在初代是不能生长繁殖，本专利技术通过添加溶菌酶提高幽门螺旋杆 菌传代成活率，完成初代选择分离培养和次代纯化培养，延长幽门螺旋杆 菌菌体形态维持时间，提高阳性检出率本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺旋杆菌固体培养基，其特征在于，所述幽门螺旋杆菌固体培养基包括如下含量的成分：2.根据权利要求1所述的一种幽门螺旋杆菌固体培养基，其特征在于，所述幽门螺旋杆菌固体培养基包括如下含量的成分：
3.根据权利要求1或2所述的一种幽门螺旋杆菌固体培养基，其特征在于，所述抑菌剂为万古霉素、头孢磺啶、两性霉素B、甲氧苄啶和硫酸多粘菌素B中的至少一种。4.根据权利3所述的一种幽门螺旋杆菌固体培养基，其特征在于，所述抑菌剂的组分为万古霉素、头孢磺啶、两性霉素B、甲氧苄啶和硫酸多粘菌素B，按质量比万古霉素：头孢磺啶：两性霉素B：甲氧苄啶和硫酸多粘菌素B＝4:2:2:2:1。5.根据权利要求1或2所述的一种幽门螺旋杆菌固体培养基，其特征在于，所述幽门螺旋杆菌固体培...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢志明，姜琳，谢清华，胡晓飞，董雯，
申请(专利权)人：山东博科生物产业有限公司，
类型：发明
国别省市：