一种UPLC同时检测柑橘中10种呋喃香豆素的方法技术

本发明专利技术公开了一种UPLC同时检测柑橘中10种呋喃香豆素的方法，涉及食品技术领域。该方法采用的超高效液相色谱仪的测试条件包括：色谱柱:Waters CORTECS C18+柱，3.0mm

【技术实现步骤摘要】
一种UPLC同时检测柑橘中10种呋喃香豆素的方法


[0001]本专利技术涉及食品
，具体来说，涉及一种UPLC同时检测柑橘中10种呋喃香豆素的方法。

技术介绍

[0002]呋喃香豆素是自然界中广泛存在的次级代谢产物，由一系列由呋喃环连接香豆素组成的化合物组成，是由香豆素母核的7位羟基与6位或8位取代的异戊烯基缩合形成呋喃环的一类化合物及其衍生物的总称。呋喃香豆素类通常存在于高等植物中，主要分布在芸香科、桑科、豆科和芹菜科四个高等植物科。
[0003]目前，呋喃香豆素的检测方法主要有紫外分光光度法、高效液相色谱法、液质联用法等。紫外分光光度法操作简便，但测定的是样品中呋喃香豆素的总量，且测量结果极易受样品中其他有较强紫外吸收物质的干扰。HPLC是分析复杂样品中呋喃香豆素类成分的常用方法，但由于这类样品基质复杂，干扰多，而常规HPLC的分离时间较长，且分离能力有限，容易产生误判。液质联用仪器设备则较为昂贵，操作维护复杂。
[0004]超高效液相色谱(UPLC)是近年来液相色谱发展的新方向之一，它采用亚2 μm填料，使分离效能、峰容量和分析速度均有大幅度提高。李贵节等（李贵节, 谭祥, 王华,等. HPLC
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DAD
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FLD同时测定柑橘果汁中12种多甲氧基黄酮和香豆素类物质[J]. 食品科学, 2017, 38(20):7.）建立了HPLC
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DAD
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FLD能同时检测出柑橘果汁中佛手柑素、佛手柑内酯、环氧佛手柑素、佛手酚4种呋喃香豆素的方法，采用的柱子是Thermo Scientific HyPURITY C18 (4.6
×
150 mm，3
ꢀµ
m)，但柑橘中的呋喃香豆素种类多且结构复杂，远不止以上四种。赵喜娟等（Zhao X J , Guo P M , Pang W H , et al. A Rapid UHPLC
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QqQ
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MS/MS method for the Simultaneous Qualitation and Quantitation of Coumarins, Furocoumarins, Flavonoids, Phenolic Acids in Pummelo Fruits[J]. Food Chemistry, 2020, 325:126835.）建立了一种UHPLC
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QqQ
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MS/MS方法，用于同时测定柚子中包括花椒毒内酯、补骨脂素、欧前胡素、异欧前胡素在内的8种呋喃香豆素，采用的柱子是Waters Acquity UPLC HSS T3 (2.1
ꢀ×ꢀ
100 mm，1.8
ꢀµ
m)，仍不能达到分离10种呋喃香豆素的效果，同时前处理较为复杂且液质联用仪器较为昂贵，操作维护复杂。
[0005]由于呋喃香豆素种类较多，UPLC法同时检测多种呋喃香豆素的方法鲜有报道，UPLC法同时检测10种呋喃香豆素的研究尚无报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术针对
技术介绍
中的不足，提供了一种UPLC同时检测柑橘中10种呋喃香豆素的方法，该方法能同时测定柑橘样品中是否存在花椒毒内酯、佛手酚、异茴芹内酯、环氧佛手柑素、佛手柑素、欧前胡素、异欧前胡素、补骨脂素、佛手柑内酯、异补骨脂素成分，步骤简单，准确度高，重现性好，具有快速、高通量检测的特点。
[0007]为实现上述目的，本专利技术技术解决方案如下：
一种UPLC同时检测柑橘中10种呋喃香豆素的方法，同时检测方法包括如下步骤：1）配制标准品：称取10种呋喃香豆素的标准品，分别置于容量瓶中，加入甲醇溶液溶解稀释定容，获得单一标准储备液；2）配制标准溶液：分别移取步骤1）中的单一标准储备液，加入甲醇溶液稀释配制成混合标准溶液；3）样品前处理：称取柑橘样品置于离心管中，加入甲醇溶液，浸泡提取，水浴震荡辅助提取，离心收集上清液，旋转蒸发至无醇，加入甲醇溶液复溶，通过滤膜过滤，获得待测样品；4）检测分析：将步骤2）的混合标准溶液和步骤3）的待测样品分别上超高效液相色谱仪进行定性和定量分析测定，得到混合标准溶液的标准工作曲线和柑橘样品中呋喃香豆素的种类及含量。
[0008]进一步地，所述步骤1）的10种呋喃香豆素成份的标准品的重量称取5mg；所述容量瓶体积采用10mL。
[0009]进一步地，所述步骤2）的混合标准溶液的浓度为50μg/ml。
[0010]进一步地，所述步骤3）的柑橘样品准确称取2g，置于50mL的离心管中，加入甲醇15mL，浸泡提取30 min，水浴震荡辅助提取30min（100rpm、30℃）， 4000rpm离心10 min，收集上清液，向残留物中再加入甲醇10mL，水浴震荡辅助提取30min， 4000rpm离心10 min，收集上清液，重复两次，合并上清液。
[0011]进一步地，所述步骤3）合并的上清液在35℃真空旋转蒸发仪上旋转蒸发至无醇，用色谱级甲醇定容于5 mL，经0.22μm的尼龙滤膜过滤后待检测。
[0012]进一步地，所述步骤4）的标准工作曲线由步骤2）的混合标准溶液移取5μL、10μL、25μL、50μL、75μL及100μL分别置于50mL的离心管中，不加入样品并根据步骤3）处理后上机测定得到。
[0013]进一步地，所述步骤4）的超高效液相色谱仪的测试条件如下：1）液相色谱条件色谱柱:Waters CORTECS C18+柱，3.0mm
×
150mm，1.6μm；柱温：30
°
C；流速：0.3mL/min；进样量：5μL；检测波长：310nm；流动相A：0.1%甲酸
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水；流动相B：0.1%甲酸
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乙腈；采用梯度洗脱。
[0014]进一步地，所述梯度洗脱的程序：0~3.00min，流动相B的体积分数5%至15%；3.00~8.00min，流动相B的体积分数由15%至21%；8.00~16.00min，流动相B的体积分数为21%；16.00~29.00min，流动相B的体积分数由21%至30%；29.00~42.00min，流动相B的体积分数由30%至42%；42.00~50.00min，流动相B的体积分数由42%至60%；50.00~59.00min，流动相B的体积分数由60%至95%；59.00~59.10min，流动相B的体积分数由95%至5%；59.10~62.00min，流动相B的体积分数为5%。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
1) 本专利技术首次报道了同时检测柑橘中10种呋喃香豆素（花椒毒内酯、佛手酚、异茴芹内酯、环氧佛手柑素、佛手柑素、欧前胡素、异欧前胡素、补骨脂素、佛手柑内酯、异补骨脂素）的方法，测量的种类高于已有文献中的数量。
[0016]2）本专利技术采用的色谱柱为Waters CORTECS C18+本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种UPLC同时检测柑橘中10种呋喃香豆素的方法，其特征在于：同时检测方法包括如下步骤：S1：配制标准品：称取10种呋喃香豆素的标准品，分别置于容量瓶中，加入甲醇溶液溶解稀释定容，获得单一标准储备液；S2：配制标准溶液：分别移取S1中的单一标准储备液，加入甲醇溶液稀释配制成混合标准溶液；S3：样品前处理：称取柑橘样品置于离心管中，加入甲醇溶液，浸泡提取，水浴震荡辅助提取，离心收集上清液，旋转蒸发至无醇，加入甲醇溶液复溶，通过滤膜过滤，获得待测样品；S4:检测分析：将步骤S2的混合标准溶液和步骤S3的待测样品分别上超高效液相色谱仪进行定性和定量分析测定，得到混合标准溶液的标准工作曲线和柑橘样品中呋喃香豆素的种类及含量。2.根据权利要求1所述的UPLC同时检测柑橘中10种呋喃香豆素的方法，其特征在于：所述S1中的10种呋喃香豆素成份的标准品的重量称取5mg；所述容量瓶体积采用10mL。3.根据权利要求1所述的UPLC同时检测柑橘中10种呋喃香豆素的方法，其特征在于：所述S2的混合标准溶液的浓度为50μg/ml。4.根据权利要求1所述的UPLC同时检测柑橘中10种呋喃香豆素的方法，其特征在于：所述S3具体包括柑橘样品准确称取2g，置于50mL的离心管中，加入甲醇15mL，浸泡提取30 min，100rpm、30℃水浴震荡辅助提取30min， 4000rpm离心10 min，收集上清液，向残留物中再加入甲醇10mL，水浴震荡辅助提取30min， 4000rpm离心10 min，收集上清液，重复两次，合并上清液。5.根据权利要求4所述的UPLC同时检测柑橘中10种呋喃香豆素的方法，其特征在于：所述合并上清液在35℃真空旋转蒸发仪上旋转蒸发至无醇，用色谱级...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙玉敬，王艺华，张红娟，毕冉冉，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：