作为血管生成素模拟物和Tie2激动剂治疗血管疾病的C4结合蛋白C端区段和血管生成素-1纤维蛋白原样域之间的嵌合融合体制造技术

本公开涉及用于通过激动性激活Tie2/TEK受体治疗血管疾病的血管生成素

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】作为血管生成素模拟物和Tie2激动剂治疗血管疾病的C4结合蛋白C端区段和血管生成素
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1纤维蛋白原样域之间的嵌合融合体
[0001]序列表
[0002]本申请包含已以ASCII格式电子提交的序列表，并且其全部内容通过引用在此并入本文。2020年6月17日创建的所述ASCII副本命名为14002_6006
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00134_SL.txt，大小为57,523字节。


[0003]本公开特别涉及用于通过Tie2/TEK受体的激动性活化治疗血管疾病的血管生成素
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1模拟物。

技术介绍

[0004]血管生成素
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Tie2信号传导通路是血管发育、血管重塑、产后血管发生和血管通透性的主要调节剂(Saharinen P,Eklund L,Alitalo K.Therapeutic targeting of the angiopoietin
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TIE pathway.Nat Rev Drug Discov.2017；16(9):635
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661)。该通路主要通过内皮酪氨酸激酶受体Tie2(TEK)与其细胞外配体血管生成素
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1(Ang1)和2(Ang)的直接结合起作用(Saharinen P,Eklund L,Alitalo K.Therapeutic targeting of the angiopoietin
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TIE pathway.Nat Rev Drug Discov.2017；16(9):635
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661)。尽管Ang1的强的规范激动剂功能有明确的定义，但Ang2通常被认为是Tie2的背景依赖性拮抗剂(Souma T,et al.Context
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dependent functions of angiopoietin 2are determined by the endothelial phosphatase VEPTP.Proc Natl Acad Sci U S A.2018；115(6):1298
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1303)。此外，Ang
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Tie2信号传导通路的强度由负调节剂(例如，血管内皮蛋白酪氨酸磷酸酶(VEPTP/PTPRB))调节，并且该通路还与整联蛋白信号传导具有串扰(Saharinen P,Eklund L,Alitalo K.Therapeutic targeting of the angiopoietin
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TIE pathway.Nat Rev Drug Discov.2017；16(9):635
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661)。在Tie2下游的许多细胞内信号转导通路可被激活，导致ERK1/2、AKT和eNOS磷酸化(Saharinen P,Eklund L,Alitalo K.Therapeutic targeting of the angiopoietin
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TIE pathway.Nat Rev Drug Discov.2017；16(9):635
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661)。
[0005]血管生成素
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Tie2信号转导系统已被研究作为治疗极其多种疾病的潜在治疗靶点。大量文献描述了如何激活该通路对防止血管渗漏和炎症具有有效作用(Parikh SM.Angiopoietins and Tie2 in vascular inflammation.Curr Opin Hematol.2017；24(5):432
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438；Saharinen P,Eklund L,Alitalo K.Therapeutic targeting of the angiopoietin
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TIE pathway.Nat Rev Drug Discov.2017；16(9):635
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661)。适应症包括但不限于癌症、败血症、缺血性中风、急性肾损伤、慢性肾病、糖尿病性肾病和视网膜病变、创伤愈合、急性肺损伤、同种异体移植物排斥等疾病和病况(Saharinen P,Eklund L,Alitalo K.Therapeutic targeting of the angiopoietin
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TIE pathway.Nat Rev Drug Discov.2017；16(9):635
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661)。通过外源性干预调节该通路提供了通过防止炎症和血管渗
漏的有害作用，从而保持内皮屏障完整性，来稳定血管内皮的治疗机会(Parikh SM.Angiopoietins and Tie2 in vascular inflammation.Curr Opin Hematol.2017；24(5):432
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438)。
[0006]学术实验室和生物技术公司已经付出了相当大的努力来生产用于治疗用途的生物等效或生物更好(biobetter)的Ang类似物或模拟物。已经尝试了几种Ang1模拟物设计，但没有一种达到了临床测定阶段，主要是因为在实现期望药效方面遇到了障碍(Koh GY.Orchestral actions of angiopoietin
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1in vascular regeneration.Trends Mol Med.2013；19(1):31
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39)。
[0007]血管生成素共享相似的分子域结构，其具有C端纤维蛋白原样域(FLD)(其赋予与细胞表面受体Tie2的结合)、中间卷曲螺旋域(CCOD)(介导单体的同多聚化)以及较短的N端超簇集域(SCD)区段(其使得血管生成素二聚体能够通过分子内二硫键簇集成多聚体结构)(图1A)(Koh GY.Orchestral actions of angiopoietin
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1in vascular regeneration.Trends Mol Med.2013；19(1):31
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39)。较高的寡聚化是效力的主要决定因素，并且虽然单体血管生成素配体可以结合Tie2，但它们不诱导Tie2受体酪氨酸磷酸化以及调节微血管系统且对血管和淋巴管发育、维持和功能至关重要的下游细胞内信号传导的激活(Saharinen P,Eklund L,Alitalo K.Therapeutic targeting of the angiopoietin
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TIE pathway.Nat Rev Drug Discov.2017；16(9):635
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661))。Ang1是主要以更高级的多聚体形式存在的Tie2的有效激动剂，其促进Tie2受体簇集并引发下游信号传导级联(Koh GY.Orchestral actions of angiopoietin
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1in vascular regeneration.Trends Mol Med.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.嵌合多肽，其包含与血管生成素(Ang)的纤维蛋白原样域(FLD)连接的补体蛋白C4结合蛋白(C4bp)的C端域。2.根据权利要求1所述的嵌合多肽，其中所述C4bp域位于所述多肽的N端，并且所述Ang域位于所述多肽的C端，从而形成C4bp
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Ang多肽。3.根据权利要求1所述的嵌合多肽，其中所述Ang域位于所述多肽的N端，并且所述C4bp域位于所述多肽的C端，从而形成Ang
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C4bp多肽。4.根据权利要求1至3中任一项所述的嵌合多肽，其中所述Ang是Ang1或Ang2。5.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合多肽，其中所述C4bp的C端域包含SEQ ID NO:1。6.根据权利要求1至5中任一项所述的嵌合多肽，其中所述Ang1的纤维蛋白原样域包含SEQ ID NO:2，并且所述Ang2的纤维蛋白原样域包含SEQ ID NO:3。7.根据权利要求1至6中任一项所述的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包含Ang1
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C4bp多肽、C4bp
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Ang1多肽、C4bp
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Ang2及其加有HIS标签的形式和/或其含有信号肽的形式。8.根据权利要求1至7中任一项所述的嵌合多肽，其中所述多肽还包含信号肽。9.根据权利要求8所述的嵌合多肽，其中所述信号肽选自IL2的信号肽和人CD33的信号肽。10.根据权利要求1至9中任一项所述的嵌合多肽，其中所述多肽包含信号肽，并且具有和不具有C端标记物/标签。11.根据权利要求1至9中任一项所述的嵌合多肽，其中所述多肽还包含位于所述C4bp域和所述Ang域之间的接头肽。12.根据权利要求1至11中任一项所述的嵌合多肽，其中所述接头肽选自包含氨基酸序列GGGGS(SEQ ID NO:4)、EAAAK(SEQ ID NO:32)、PAPAP(SEQ ID NO:33)、AEAAAKEAAAKA(SEQ ID NO:34)、KESGSVSSEQLAQFRSLD(SEQ ID NO:35)和EGKSSGSGSESKST(SEQ ID NO:36)的接头。13.根据权利要求1至12中任一项所述的嵌合多肽，其中所述多肽包含不带C端标记物的接头。14.根据权利要求1至13中任一项所述的嵌合多肽，其中所述多肽还包含N端和/或C端标记物。15.根据权利要求1至14中任一项所述的嵌合多肽，其中所述标记物选自聚His、GST、MBP、Flag、CBP和蛋白A标记物/标签。16.根据权利要求1至15中任一项所述的嵌合多肽，其中所述多肽包含SEQ ID NO:9、10、11、12、13、18、20、28或29的氨基酸序列。17.根据权利要求1至16中任一项所述的嵌合多肽，其还包含肠激酶切割位点。18.根据权利要求1至15中任一项所述的嵌合多肽，其中所述多肽包含SEQ ID NO:15、16或17。19.根据权利要求1至18中任一项所述的嵌合多肽，其中通过本公开的至少一种标准测定法，所述多肽在体外或体内与Tie2结合，和/或激活Tie2，和/或激活AKT的磷酸化。20.根据权利要求1至19中任一项所述的嵌合多肽，其中所述多肽降低血管通透性。21.根据权利要求20所述的嵌合多肽，其中所述多肽降低皮肤、眼和/或肺中的血管通
透性。22.根据权利要求20所述的嵌合多肽，其中所述多肽降低由VEGF、细菌代谢物诸如LPS、化学毒素诸如芥子油，或其它感染和化学毒性引起的血管通透性增加。23.核酸，其编码权利要求1至22中任一项所述的多肽。24.根据权利要求23所述的核酸，其中所述核酸序列已被密码子优化，用于在细菌、酵母或哺乳动物细胞中表达所述多肽。25.根据权利要求23至24中任一项所述的核酸，其中所述核酸包含SEQ ID NO:19至24。26.重组载体，其包含权利要求23至25中任一项所述的核酸。27.根据权利要求26所述的重组载体，其中所述载体是腺病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体(等)。28.包含7个嵌合多肽的蛋白复合物，其中所述多肽选自权利要求1至22中任一项所述的多肽。29.细胞，其包含权利要求1至22中任一项所述的多肽、权利要求23至25中任一项所述的核酸、权利要求26至27中任一项所述的载体和/或权利要求28所述的蛋白复合物。30.药物组合物，其包含权利要求23至25中任一项所述的核酸、权利要求26至27中任一项所述的载体、权利要求28所述的蛋白复合物和/或权利要求29所述的细胞以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。31.降低有此需要的受试者中的血管通透性或渗漏的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至22中任一项所述的多肽、权利要求29所述的细胞、权利要求23至25中任一项所述的核酸、权利要求26至27中任一项所述的载体、权利要求28所述的蛋白复合物、权利要求29所述的细胞和/或权利要求30所述的药物组合物。32.根据权利要求30所述的方法，其中已经在皮肤、眼、肺、肾、脑、肝、心脏和/或肠中增加所述血管通透性或渗漏。33.根据权利要求31所述的方法，其中所述血管通透性或渗漏已经响应于升高的选自VEGF、传染原、毒性化学物质等的药剂水平而增加。34.治疗有此需要的受试者中的伴有异常血管通透性或渗漏的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至22中任一项所述的多肽、权利要求29所述的细胞、权利要求23至25中任一项所述的核酸、权利要求26至27中任一项所述的载体和/或权利要求28所述的蛋白复合物。35.治疗有此需要的受试者中的对Tie2激活响应的疾病或病症或与病理性血管生成相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至22中任一项所述的多肽、权利要求29所述的细胞、权利要求23至25中任一项所述的核酸、权利要求26至27中任一项所述的载体、权利要求28所述的蛋白复合物和/或权利要求30所述的药物组合物，从而激活Tie2。36.根据权利要求34所述的方法，其中所述对Tie2激活响应的疾病或病症是任何疾病或病症，其中通过Tie2激活减少...

【专利技术属性】
技术研发人员：J金，P刘，M里兹克，
申请(专利权)人：曼宁研究公司，
类型：发明
国别省市：