一种羰基还原酶不对称还原制备(-)-5-氮杂螺[2,4]庚烷-7-醇的方法技术

本发明专利技术公开了一种羰基还原酶不对称还原制备(

【技术实现步骤摘要】
一种羰基还原酶不对称还原制备(
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)
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的方法


[0001]本专利技术属于有机合成
，具体涉及一种羰基还原酶不对称还原制备(
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)
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的方法。

技术介绍

[0002]AL8326是一种由南京爱德程医药科技有限公司研制的具有自主知识产权的1.1类(全球未上市)抗肿瘤新药，是通过抑制酪氨酸激酶FGF家族受体、VEGF家族受体以及Aurora激酶家族的Aurora
‑
B小分子口服片剂，其结构全新、抗肿瘤作用明确且毒性反应较小，具有广谱的体内外抗肿瘤活性，动物实验证明其可有效抑制多种实体瘤。
[0003]目前临床前研究中使用的AL8326是一种混旋化合物，即具有左旋和右旋两种结构，其进入人体后仅有一种构型能够真正作用于病变部位，另一种构型并无药效而且还是导致药物毒副作用的根本原因，经临床验证左旋体(
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)AL8326能发挥更好的治疗效果。(
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)
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氮杂螺[2.4]庚烷
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醇作为制备左旋体(
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)AL8326的重要中间体，其合成将极大地推动手性药物(
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)AL8326的研究进展，使药物AL8326有望分离为单一构型的化合物，进而使药物AL8326瞄准特定病变部位并且在病变部位积蓄或释放有效成分，在病变部位局部形成相对较高的药物分子浓度，在提高药效的同时抑制毒副作用，也减少对正常组织细胞的伤害，从而发挥出更好的高效低毒作用。
[0004]目前，关于混旋的5
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的拆分已有报道。中国专利技术专利申请，CN113072480A，给出了一种手性(
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)
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氮杂螺[2.4]庚烷
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醇的制备方法，其合成路线如下式1所示：
[0005][0006]上述合成路线虽然能够获得合格的目标产物手性(
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氮杂螺[2.4]庚烷
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醇，但是存在合成路线长，操作步骤繁琐，合成效率低，且存在单次拆分中间体利用率低以及目标产物总收率偏低的缺点。
[0007]本专利技术旨在提出一种羰基还原酶不对称还原制备(
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)
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的方法，以期解决上述技术问题。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于，克服现有技术中存在的缺陷，提供一种羰基还原酶不对称还原制备(
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)
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的方法，反应路线短，操作简单，具有原料便宜易得、利用率高、反应时间快、反应条件温和、产物手性纯度高、环境污染少等优点；本专利技术方法制备的(
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的收率在85％以上(以5
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氮杂螺[2,4]庚烷
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酮计)、目标产物ee值为100％。
[0009]为实现上述目的，本专利技术的技术方案是设计一种羰基还原酶不对称还原制备(
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)
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的方法，包括如下步骤：
[0010]S1：羰基还原酶冻干粉的制备，将ATCC 7330菌株接种到Luria
‑
Bertani液体培养基上，接种量为1％，培养基中氯霉素含量为100μg/mL，培养温度为25℃，220rpm培养24h，当测得OD
600
浓度为0.6时加入异丙基
‑
β
‑
D
‑
硫代半乳糖苷并使其浓度为0.4mM，25℃诱导16h，诱导结束后，离心收集菌体，经洗菌、重悬、超声破碎后冻干，获得羰基还原酶冻干粉；
[0011]S2：将步骤S1制备的羰基还原酶冻干粉、辅酶、辅酶循环酶、缓冲液和溶剂混合制备成反应体系溶液，将5
‑
氮杂螺[2,4]庚烷
‑7‑
酮加入反应体系溶液中，在羰基还原酶的催化下，5
‑
氮杂螺[2,4]庚烷
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酮进行不对称还原反应生成(
‑
)
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇。
[0012]优选的技术方案是，所述的步骤S2中，溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、丁醇、异丙醇、二
甲基亚砜、水中的一种或几种。
[0013]进一步优选的技术方案还有，所述的步骤S2中，缓冲液为甲酸盐缓冲液，其溶质摩尔浓度为0.05mol/L。
[0014]进一步优选的技术方案还有，所述的步骤S2中，甲酸盐缓冲液为HCOOH
‑
HCOONa水溶液，其中溶剂与甲酸盐缓冲液的体积投料比为1:1～30。
[0015]进一步优选的技术方案还有，所述的步骤S2中，溶剂为水，水与甲酸盐缓冲液的体积投料比为1:6。
[0016]优选的技术方案还有，所述的步骤S2中，5
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氮杂螺[2,4]庚烷
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酮和羰基还原酶在反应体系溶液中的质量浓度比为1:0.1～1，其中5
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氮杂螺[2,4]庚烷
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酮质量浓度为3.5％。
[0017]优选的技术方案还有，所述的步骤S2中，辅酶为NADPH或NADH，辅酶与羰基还原酶冻干粉的质量投料比为1:20～100；所述的辅酶循环酶为甲酸脱氢酶，甲酸脱氢酶与羰基还原酶冻干粉的质量投料比为1:1.25。
[0018]进一步优选的技术方案还有，所述的步骤S2中，辅酶为NADPH，辅酶与羰基还原酶冻干粉的质量投料比为1:50。
[0019]优选的技术方案还有，所述的步骤S2中，羰基还原酶的催化反应温度为10～50℃，反应时间为1～2h，反应体系溶液的pH为6.5～8.0。
[0020]进一步优选的技术方案还有，所述的步骤S2中，羰基还原酶的催化反应温度为20～30℃。
[0021]本专利技术的优点和有益效果在于：
[0022]1、本专利技术的一种羰基还原酶不对称还原制备(
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的方法，反应路线短，操作简单，具有原料便宜易得、利用率高、反应时间快、反应条件温和、产物手性纯度高、环境污染少等优点。
[0023]2、本专利技术的一种羰基还原酶不对称还原制备(
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的方法，制备的(
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种羰基还原酶不对称还原制备(
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：羰基还原酶冻干粉的制备，将ATCC 7330菌株接种到Luria
‑
Bertani液体培养基上，接种量为1％，培养基中氯霉素含量为100μg/mL，培养温度为25℃，220rpm培养24h，当测得OD
600
浓度为0.6时加入异丙基
‑
β
‑
D
‑
硫代半乳糖苷并使其浓度为0.4mM，25℃诱导16h，诱导结束后，离心收集菌体，经洗菌、重悬、超声破碎后冻干，获得羰基还原酶冻干粉；S2：将步骤S1制备的羰基还原酶冻干粉、辅酶、辅酶循环酶、缓冲液和溶剂混合制备成反应体系溶液，将5
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氮杂螺[2,4]庚烷
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酮加入反应体系溶液中，在羰基还原酶的催化下，5
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氮杂螺[2,4]庚烷
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酮进行不对称还原反应生成(
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)
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇。2.如权利要求1所述的羰基还原酶不对称还原制备(
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的方法，其特征在于，所述的步骤S2中，溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、丁醇、异丙醇、二甲基亚砜、水中的一种或几种。3.如权利要求2所述的羰基还原酶不对称还原制备(
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的方法，其特征在于，所述的步骤S2中，缓冲液为甲酸盐缓冲液，其溶质摩尔浓度为0.05mol/L。4.如权利要求3所述的羰基还原酶不对称还原制备(
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)
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氮杂螺[2,4]庚烷
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醇的方法，其特征在于，所述的步骤S2中，甲酸盐缓冲液为HCOOH
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HCOONa水溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：张文超，吕列超，于佳，张林，
申请(专利权)人：常州佳德医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：