一种钙卫蛋白检测剂盒及其制备与检测方法技术

本发明专利技术提供了一种钙卫蛋白检测剂盒，包括试剂R1、试剂R2和校准品；试剂R1包括缓冲液、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、促凝剂；试剂R2包括缓冲液、偶联有荧光标志物标记

【技术实现步骤摘要】
一种钙卫蛋白检测剂盒及其制备与检测方法


[0001]本专利技术涉及免疫学测定领域，尤其涉及一种钙卫蛋白检测剂盒及其制备与检测方法。

技术介绍

[0002]钙卫蛋白是一种由中性粒细胞所分泌、与炎症反应紧密相关的钙锌结合蛋白。钙卫蛋白可以对炎性细胞的黏附与迁移起到调控作用，致炎物质也能诱导细胞再表达钙卫蛋白，放大炎症过程中的细胞因子级联反应，是疾病活性监测、复发的早期检测和治疗疗效检测的理想标志物。因此，钙卫蛋白正常化可作为一项病人炎性肠病黏膜治愈的预测和标志指标。
[0003]胶乳增强免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法，原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂(聚乙二醇等)的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度；当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加；通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。胶乳增强免疫比浊法的优势体现在：1、省时省力；2、稳定准确；3、灵敏度高。
[0004]因此，若能将胶乳增强免疫比浊法用于钙卫蛋白检测，将能设计出一种操作简单、省时省力、准确度高、灵敏度好的钙卫蛋白检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种操作简单、省时省力、准确度高、灵敏度好的基于胶乳增强免疫比浊法的钙卫蛋白检测剂盒及其制备与检测方法。
[0006]本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：
[0007]一种钙卫蛋白检测剂盒，包括试剂R1、试剂R2和校准品；
[0008]所述试剂R1包括：缓冲液10～100mmol/L，电解质0.9～10％，稳定剂2～10g/L，表面活性剂1～5ml/L，防腐剂0.1～1g/L，促凝剂5～25g/L；
[0009]所述试剂R2包括：缓冲液10～100mmol/L，偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒1％，电解质0.9～10％，稳定剂2～10g/L，表面活性剂0.05～1ml/L，防腐剂0.1～1g/L；其中，所述偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒由两种不同粒径的胶乳颗粒以共价键结合方式分别偶联两组含有荧光标志物的钙卫蛋白单克隆抗体构成；
[0010]所述校准品包括：缓冲液10～100mmol/L，电解质0.9～10％，稳定剂1～5g/L，防腐剂0.1～1g/L，钙卫蛋白0～40mg/L。
[0011]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1中：
[0012]缓冲液为MES缓冲液、硼酸缓冲液、硼砂缓冲液、磷酸盐缓冲液、Hepes缓冲液、Tris缓冲液中的至少一种；
[0013]电解质为氯化钠氯化钾中的至少一种；
[0014]稳定剂为BSA、酪蛋白、乙二醇中的至少一种；
[0015]表面活性剂为吐温20、曲拉通x
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100中的至少一种；
[0016]防腐剂为叠氮钠、Proclin300中的至少一种；
[0017]促凝剂为PEG6000。
[0018]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2中：
[0019]缓冲液为MES缓冲液、硼酸缓冲液、硼砂缓冲液、磷酸盐缓冲液、Hepes缓冲液、Tris缓冲液中的至少一种；
[0020]电解质为氯化钠氯化钾中的至少一种；
[0021]稳定剂为BSA、酪蛋白中的至少一种；
[0022]表面活性剂为吐温20、曲拉通x
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100中的至少一种；
[0023]防腐剂为叠氮钠、Proclin300中的至少一种。
[0024]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2的“偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒”中，不同粒径的两种胶乳颗粒分别偶联荧光标志物标记的不同钙卫蛋白单克隆抗体，偶联完成后，两种胶乳颗粒按小颗粒：大颗粒＝4:1的比例混合，构成“偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒”完整组成液。
[0025]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2的“偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒”中，采用的两种不同粒径胶乳颗粒，其粒径分别为100nm、160nm。
[0026]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2的“偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒”中，采用的荧光标志物为异硫氰酸荧光素FITC。因为抗体中含有荧光标志物，便可以根据检测离心后的上清液中荧光的含量来确定抗体的利用率是否达到工艺要求，并可针对性的改善抗体利用率。
[0027]作为本专利技术的优选方式之一，所述荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的制备方法如下：
[0028]a.取钙卫蛋白单克隆抗体纯液，用0.5mol/L pH9.5的碳酸盐缓冲液稀释至20mg/mL。
[0029]b.按荧光素与蛋白质比1：20～1：100称取异硫氰酸荧光素，用pH9.5的碳酸盐缓冲液溶解；
[0030]c.将球蛋白液置于电磁搅拌器上，启动开关，轻轻搅拌，以不起沫为准；逐滴加入荧光素液；加完后，用试纸测定搅拌液的pH值，pH值若低于9.0，则以碳酸钠溶液调整；置4℃搅拌6～12h即可。
[0031]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2的“偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒”中，采用的两种钙卫蛋白单克隆抗体采用本领域可直接购买得到的相应抗体即可，没有特定要求。所述校准品中的“钙卫蛋白”，采用本领域可直接购买得到的即可，没有特定要求。
[0032]作为本专利技术的优选方式之一，所述校准品中：
[0033]缓冲液为MES缓冲液、硼酸缓冲液、硼砂缓冲液、磷酸盐缓冲液、Hepes缓冲液、Tris缓冲液中的至少一种；
[0034]电解质为氯化钠氯化钾中的至少一种；
[0035]稳定剂为海藻糖、BSA、甘油中的至少一种；
[0036]防腐剂为叠氮钠、Proclin300中的至少一种。
[0037]作为本专利技术的优选方式之一，所述偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒的制备方法为：
[0038]①
将该两种不同粒径的含有羧基基团的胶乳颗粒分成两组，每组分别在活化缓冲液pH4.5～6.0与EDC、NHS配合的条件下活化；活化后的基团在pH4.7～7.0缓冲环境中通过氨基形成酰胺键；
[0039]②
制备含有荧光标志物的两组钙卫蛋白单克隆抗体；
[0040]③
将两组活化后的不同粒径胶乳颗粒以共价键结合方式分别偶联两组含有荧光标志物的不同钙卫蛋白单克隆抗体，形成两组偶联后胶乳颗粒；
[0041]④
用封闭剂对两组偶联后胶乳颗粒分别进行封闭，重悬、超声后用胶贮液进行本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种钙卫蛋白检测剂盒，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2和校准品；所述试剂R1包括：缓冲液10～100mmol/L，电解质0.9～10％，稳定剂2～10g/L，表面活性剂1～5ml/L，防腐剂0.1～1g/L，促凝剂5～25g/L；所述试剂R2包括：缓冲液10～100mmol/L，偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒1％，电解质0.9～10％，稳定剂2～10g/L，表面活性剂0.05～1ml/L，防腐剂0.1～1g/L；其中，所述偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒由两种不同粒径的胶乳颗粒以共价键结合方式分别偶联两组含有荧光标志物的钙卫蛋白单克隆抗体构成；所述校准品包括：缓冲液10～100mmol/L，电解质0.9～10％，稳定剂1～5g/L，防腐剂0.1～1g/L，钙卫蛋白0～40mg/L。2.根据权利要求1所述的钙卫蛋白检测剂盒，其特征在于，所述试剂R1中：缓冲液为MES缓冲液、硼酸缓冲液、硼砂缓冲液、磷酸盐缓冲液、Hepes缓冲液、Tris缓冲液中的至少一种；电解质为氯化钠氯化钾中的至少一种；稳定剂为BSA、酪蛋白、乙二醇中的至少一种；表面活性剂为吐温20、曲拉通x
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100中的至少一种；防腐剂为叠氮钠、Proclin300中的至少一种；促凝剂为PEG6000。3.根据权利要求1所述的钙卫蛋白检测剂盒，其特征在于，所述试剂R2中：缓冲液为MES缓冲液、硼酸缓冲液、硼砂缓冲液、磷酸盐缓冲液、Hepes缓冲液、Tris缓冲液中的至少一种；电解质为氯化钠氯化钾中的至少一种；稳定剂为BSA、酪蛋白中的至少一种；表面活性剂为吐温20、曲拉通x
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100中的至少一种；防腐剂为叠氮钠、Proclin300中的至少一种。4.根据权利要求1所述的钙卫蛋白检测剂盒，其特征在于，所述试剂R2的“偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒”中，不同粒径的两种胶乳颗粒分别偶联荧光标志物标记的不同钙卫蛋白单克隆抗体，偶联完成后，两种胶乳颗粒按小颗粒：大颗粒＝4:1的比例混合，构成“偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒”完整组成液。5.根据权利要求1所述的钙卫蛋白检测剂盒，其特征在于，所述试剂R2的“偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒”中，采用的两种不同粒径胶乳颗粒，其粒径分别为100nm、160nm。6.根据权利要求1所述的钙卫蛋白检测剂盒，其特征在于，所述试剂R2的“偶联有荧光标志物标记
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抗人钙卫蛋白抗体的胶乳颗粒”中，采用的荧光标志物为异硫氰酸荧光素FITC。7...

【专利技术属性】
技术研发人员：芮双印，席瑞，
申请(专利权)人：安徽大千生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：