一种总抗氧化物状态测定试剂盒及其制备、使用方法技术

本发明专利技术提供了一种总抗氧化物状态测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括：磷酸盐缓冲液50～150mmol/L，ABTS 1～100mg/L，过氧化物酶0.05～0.2％，稳定剂1～20g/L，表面活性剂0.01～1％，防腐剂0.01～0.1％；所述试剂R2包括：磷酸盐缓冲液50～150mmol/L，双氧水1～20mmol/L，稳定剂1～20g/L，表面活性剂0.01～1％，防腐剂0.01～0.1％。本发明专利技术还提供了一种上述试剂盒的制备及使用方法。本发明专利技术试剂盒采用液态双试剂形式，可广泛适用于生化仪器的分析检测，准确度高、稳定性好、安全有效，满足临床检测和诊断需求。临床检测和诊断需求。

【技术实现步骤摘要】
一种总抗氧化物状态测定试剂盒及其制备、使用方法


[0001]本专利技术涉及免疫学测定领域，尤其涉及一种总抗氧化物状态测定试剂盒及其制备、使用方法。

技术介绍

[0002]活性氧(Reactive oxygen species,ROS)主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧，同时一些环境因子例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等也可以诱导活性氧的产生。活性氧产生后，可以导致细胞或组织发生不同程度的氧化损伤，诱发氧化应激(Oxidative stress)，继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病、肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。机体中存在多种抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除体内产生的各种活性氧，以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液，细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的生物学意义。
[0003]目前，总抗氧化能力检测的主要方法有比色法、还原铁抗氧化能力FRAP法、氧自由基清除法等。其中比色法操作简单便捷、准确安全、便于自动化，适用于临床检测与诊断。其主要原理是：ABTS在适当的氧化剂作用下被氧化成绿色的ABTS+，在抗氧化物存在时ABTS+的产生会被抑制，在一定波长下测定ABTS+的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。
[0004]中国专利CN102115737B公开了一种人总抗氧化状态检测试剂盒，其原理是通过正铁肌红蛋白和双氧水一起反应，将ABTS氧化成ABTS+，并通过抗菌肽等维持正铁肌红蛋白、ABTS和双氧水的稳定性，但是抗菌肽制备方法较复杂。
[0005]中国专利CN111766233B公开了一种血清总抗氧化物状态测定试剂盒，其原理是通过过二硫酸钾将ABTS氧化成ABTS+，并通过复合稳定剂等维持试剂盒稳定性，碳酸钾增加过二硫酸钾氧化效果，但是过二硫酸钾有强刺激性，与有机物摩擦或撞击能引起燃烧，存在一定安全隐患。
[0006]由此可见，本领域仍需寻求一种新的ABTS氧化剂，并将其开发成一种准确、稳定、安全有效的检测试剂盒。

技术实现思路

[0007]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种准确度高、稳定性好、安全有效的总抗氧化物状态测定试剂盒及其制备、使用方法。
[0008]本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：
[0009]一种总抗氧化物状态测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括：磷酸盐缓冲液50～150mmol/L，ABTS 1～100mg/L，过氧化物酶0.05～0.2％，稳定剂1～20g/L，表面
活性剂0.01～1％，防腐剂0.01～0.1％；所述试剂R2包括：磷酸盐缓冲液50～150mmol/L，双氧水1～20mmol/L，稳定剂1～20g/L，表面活性剂0.01～1％，防腐剂0.01～0.1％；其中所述百分比为体积比。
[0010]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1和R2的pH为7.0～7.5。
[0011]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1和R2中的表面活性剂为吐温系列、曲拉通系列中的一种或两种。
[0012]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1中的稳定剂为缬氨酸、葡聚糖中的一种或两种。
[0013]作为本专利技术的优选方式之一，当试剂R1中的稳定剂采用“缬氨酸+葡聚糖”的组合时，所述缬氨酸与葡聚糖之间质量比为2:1。
[0014]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2中的稳定剂为海藻糖。
[0015]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1和R2中的防腐剂为叠氮化钠、庆大霉素、硫柳汞、Proclin300中的一种或多种。
[0016]更优选地，所述防腐剂为Proclin300。
[0017]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1与试剂R2的体积比为3：1。
[0018]一种上述总抗氧化物状态测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：试剂R1、R2均先加入磷酸盐缓冲液，用盐酸或氢氧化钠调节pH，试剂R1和R2的pH值为7.0～7.5，再分别按照相应比例添加其他组成，最终制得目标所需的总抗氧化状态测定试剂盒。
[0019]一种上述总抗氧化物状态测定试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
[0020](1)吸取样本5μL，加入150μL试剂R1；预孵育5min后，于414nm波长下测定吸光值A1；
[0021](2)再加入50μL试剂R2，混匀，反应5min后，414nm波长下测定吸光值A2，并计算
△
A；
[0022](3)根据
△
A计算总抗氧化物状态含量。
[0023]设计原理：
[0024]本专利技术选用过氧化物酶催化过氧化氢将ABTS氧化成ABTS+，发较稳定蓝绿色光，可在414nm测定；抗氧化物抑制标本中该色度的生成，抑制程度与抗氧化剂浓度成正比；反应简单、快速、特异；同时，本专利技术还提供一种稳定剂组合(缬氨酸+葡聚糖)，使得试剂性能能够长期稳定有效，满足临床检测和诊断需求。
[0025]本专利技术相比现有技术的优点在于：
[0026](1)本专利技术提供的试剂盒为液态双试剂，不需要复溶配制，误差小；且选用过氧化物酶催化过氧化氢将ABTS氧化成ABTS+，试剂成分以及产物无毒无害，反应快速且灵敏；可直接在各类生化分析仪上进行检测，操作简单方便；
[0027](2)本专利技术通过在试剂R1中添加一种组合稳定剂“缬氨酸+葡聚糖”，可有效保护过氧化物酶的活性稳定，试剂R2中添加海藻糖作为稳定剂，综合保持试剂的检测准确性和有效性；
[0028](3)本专利技术试剂盒可在具备有400～800nm波长的全自动生化分析仪上检测血液中抗氧化总状态的含量，直接上机使用，快速精准，自动化程度高，大大提高工作效率，且检测样本量少，可进行少量样本和急诊样本的测定。
具体实施方式
[0029]下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。
[0030]实施例1
[0031]本实施例的一种总抗氧化物状态测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2。
[0032]所述试剂R1包括：磷酸盐缓冲液50mmol/L，ABTS1mg/L，过氧化物酶0.05％，缬氨酸1g/L，吐温系列
‑
200.01％，叠氮化钠0.01％，pH 7.0。
[0033]所述试剂R2包括：磷酸盐缓冲液50mmol/L，双氧水1mmol/L，海藻糖1g/L，吐温
‑
20 0.01％，叠氮化钠0.01％，pH 7.0。
[0034]其中，所述百分比为体积比。
[0035]本实施例所述试剂R1和试剂R本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种总抗氧化物状态测定试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括：磷酸盐缓冲液50～150mmol/L，ABTS 1～100mg/L，过氧化物酶0.05～0.2％，稳定剂1～20g/L，表面活性剂0.01～1％，防腐剂0.01～0.1％；所述试剂R2包括：磷酸盐缓冲液50～150mmol/L，双氧水1～20mmol/L，稳定剂1～20g/L，表面活性剂0.01～1％，防腐剂0.01～0.1％。2.根据权利要求1所述的总抗氧化物状态测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和R2的pH为7.0～7.5。3.根据权利要求1所述的总抗氧化物状态测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和R2中的表面活性剂为吐温系列、曲拉通系列中的一种或两种。4.根据权利要求1所述的总抗氧化物状态测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的稳定剂为缬氨酸、葡聚糖中的一种或两种。5.根据权利要求4所述的总抗氧化物状态测定试剂盒，其特征在于，当试剂R1中的稳定剂采用“缬氨酸+葡聚糖”的组合时，所述缬氨酸与葡聚糖之间质量比为2:1。6.根据权利要求1所述的总抗氧化物状态测定试剂盒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：芮双印，杨小枘，
申请(专利权)人：安徽大千生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：