动物模型的构建方法及消融脂肪细胞的方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及动物模型的构建方法及消融脂肪细胞的方法。本发明专利技术提供了白喉毒素和基质胶在构建动物模型中的应用。本发明专利技术可以实现在实验鼠体内局部脂肪组织特异性消融脂肪细胞，为研究不同部位脂肪组织块中脂肪细胞的功能差异提供动物模型，并且可以拓展达到局部组织块内消除其他特定细胞类型的目的。型的目的。

【技术实现步骤摘要】
动物模型的构建方法及消融脂肪细胞的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及动物模型的构建方法及消融脂肪细胞的方法。

技术介绍

[0002]目前肥胖及并发症(糖尿病、心血管疾病、肿瘤等多种慢性疾病)是威胁人类健康的重大问题。脂肪组织是肥胖发生的责任组织器官，是引起相关并发症的起始部位。因此认识脂肪组织的特点及功能是科学家应对肥胖及相关并发症问题的关键途径。脂肪组织在体内分布广泛，科学家根据脂肪组织分布位置对脂肪组织进行了命名，例如：皮下脂肪组织(根据具体部位有更详细的名称，如肩背部、臀部、腹股沟等脂肪组织)，内脏脂肪组织(大网膜脂肪组织、肠系膜脂肪组织、肾脏周围脂肪组织等)。
[0003]现研究已知皮下脂肪与内脏脂肪组织结构、功能特点具有显著差异，并且不同部位脂肪组织功能与其相邻器官功能存在相适应的特点，也就是说脂肪组织是具有异质性的。对于脂肪组织异质性的研究是重要的生物学问题，也是认识脂肪组织功能的重要途径。
[0004]局部脂肪组织块手术切除的方法虽然能够通过精细的手术操作将局部脂肪组织块较为特异的切除，但是针对一些周围结构复杂的脂肪组织块(如肠系膜脂肪组织)操作起来难度大(需要借助显微镜手术)；并且脂肪组织整块切除时去掉的不是某一类细胞，无法明确切除后出现的变化是由哪一类细胞引起(特异性差)；脂肪组织切除后可以通过再生修复重建脂肪组织，从而不能长时间用于观察研究(效果不佳)。
[0005]全身性基因敲除脂肪细胞发育成熟的关键基因，然后得到全身脂肪细胞缺乏的动物模型，再通过移植其他脂肪组织块，从而构建缺乏某种脂肪组织的动物模型的方法实施起来周期长，并且繁殖获得的转基因小鼠效率低、成本高。而且需要供体小鼠提供脂肪组织用于移植也相应的增加了成本。全身基因敲除对模型动物还可能存在一些未知的影响，后续即便是通过多部位移植也难以做到完全重建其他部位的脂肪组织结构。
[0006]虽然目前人们已经认识到脂肪组织异质性研究的重要性，但是用于异质性研究的合适的动物模型至今未开发出来，从而阻碍了人们对脂肪组织异质性及局部脂肪组织功能的研究。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术提供了动物模型的构建方法及消融脂肪细胞的方法。本专利技术可以实现在实验鼠体内局部脂肪组织特异性消融脂肪细胞，为研究不同部位脂肪组织块中脂肪细胞的功能差异提供动物模型，并且可以拓展达到局部组织块内消除其他特定细胞类型的目的。
[0008]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0009]本专利技术提供了白喉毒素和基质胶在构建动物模型中的应用。
[0010]本专利技术还提供了动物模型的构建方法，对小鼠的脂肪组织给予包括白喉毒素的基
质胶。
[0011]在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中所述白喉毒素的浓度为30ng/g体重。
[0012]在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中所述给予的体积为15μL/g体重，浓度为2ng/μL。
[0013]在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中所述基质胶以基质胶溶液的形式给予，所述基质胶溶液包括：基质胶和PBS缓冲液；
[0014]上述构建方法中所述基质胶和所述PBS缓冲液的体积比为1:(0～3)。
[0015]在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中所述小鼠包括(B6
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iDTR)
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Cre转基因小鼠。
[0016]在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中所述(B6
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iDTR)
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Cre转基因小鼠的构建方法包括以下步骤：取B6
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iDTR转基因小鼠与Cre转基因小鼠杂交后，与亲本所述B6
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iDTR转基因小鼠回交，获得所述(B6
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iDTR)
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Cre转基因小鼠。
[0017]在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中所述Cre转基因小鼠包括：Adipoq
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Cre转基因小鼠。
[0018]在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中所述Cre转基因小鼠包括细胞特异性表达Cre酶的转基因小鼠，所述Cre转基因小鼠用于某一特定脂肪组织块内的特定细胞类型的功能。
[0019]在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中所述B6
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iDTR小鼠或所述转基因Cre小鼠的体重为22～25g，周龄不小于8周，数量不小于5只。
[0020]在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中所述脂肪组织包括：结肠系膜脂肪组织、性腺脂肪组织、肾脏周围脂肪组织或皮下脂肪组织中的一种或多种。
[0021]本专利技术还提供了上述构建方法获得的动物模型在制备脂肪组织或脂肪细胞消融的药物或制剂中的应用。
[0022]本专利技术还提供了消融脂肪细胞的方法，对样本的脂肪组织给予包括白喉毒素的基质胶。
[0023]在本专利技术的一些实施方案中，上述方法中所述白喉毒素的浓度为30ng/g体重。
[0024]在本专利技术的一些实施方案中，上述方法中所述给予的体积为15μL/g体重，浓度为2ng/μL。
[0025]在本专利技术的一些实施方案中，上述方法中所述给予的部位包括结肠系膜脂肪组织、性腺脂肪组织、肾脏周围组织脂肪或皮下脂肪组织中的一种或多种，可以将上述给予的部位的脂肪细胞消融。
[0026]本专利技术提供了白喉毒素和基质胶在构建动物模型中的应用。
[0027]本专利技术的有益效果包括：
[0028](1)本专利技术提供的动物模型的构建方法中转基因小鼠编辑的基因对小鼠健康无影响，并且使用的Adipoq
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Cre转基因小鼠针对脂肪细胞的特异性好。
[0029](2)本专利技术提供的动物模型的构建方法中白喉毒素注射后对小鼠健康无明显影响。
[0030](3)本专利技术提供的动物模型的构建方法以及消融脂肪细胞的方法中局部注射操作
方法较易掌握，可推广性强。
[0031](4)本专利技术提供的脂肪消融的方法能够十分特异性的局部消除目的细胞类型。
附图说明
[0032]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0033]图1示结肠系膜脂肪组织(LMAT)中脂肪细胞缺失动物模型构建；
[0034]其中：A示通过B6
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iDTR转基因小鼠与Adipoq
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Cre工具鼠构建脂肪细胞表达白喉毒素受体(DTR)实验鼠的方法示意图；B示转基因动物基因型鉴定核酸凝胶电泳结果图；C示LMAT显微镜下局部注射含白喉毒素(DT)基质胶的模型构建图，绿色箭头所指为DT基质胶注射后的LMAT；D中左示DT注射一周后诱导LMAT中脂肪细胞消融后的实验组(B6
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iDTR+/+Adipoq
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Cre)与对照组(B6
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iDTR+/+本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.白喉毒素和基质胶在构建动物模型中的应用。2.动物模型的构建方法，其特征在于，对小鼠的脂肪组织给予包括白喉毒素的基质胶。3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述基质胶以基质胶溶液的形式给予，所述基质胶溶液包括：基质胶和PBS缓冲液；所述基质胶和所述PBS缓冲液的体积比为1:(0～3)。4.如权利要求2或3所述的构建方法，其特征在于，所述小鼠包括(B6
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iDTR)
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Cre转基因小鼠。5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述(B6
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iDTR)
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Cre转基因小鼠的构建方法包括以下步骤：取B6
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iDTR转基因小鼠...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓沱，张浩伟，丁豫晋，廖喜艳，
申请(专利权)人：中南大学湘雅二医院，
类型：发明
国别省市：