一种伪无菌大鼠模型的构建方法技术

本发明专利技术提供一种伪无菌大鼠模型的构建方法，包括以下步骤：S1，采用复方聚乙二醇电解质散混合乳果糖口服液灌胃大鼠以清除大鼠肠内容物；S2，清除大鼠肠内容物后，每隔50

【技术实现步骤摘要】
一种伪无菌大鼠模型的构建方法


[0001]本专利技术涉及一种伪无菌大鼠模型的构建方法。

技术介绍

[0002]肠道是人体面积最大的“器官”，容纳了数以万亿计的微生物。此前研究表明，肠道微生物群不仅可以以益生菌的形式直接保护生理健康，还可以通过其代谢产物间接影响机体功能，因此对肠道微生物群的研究至关重要。国际上常用构建无菌动物模型或口服抗生素鸡尾酒的方法，移除或抑制肠道微生物群以研究肠道微生物群的功能。
[0003]现有技术中构建无菌动物模型的方法为：从母体大鼠中通过无菌剖腹取出第一代无菌大鼠幼体，后经过一系列完全无菌的培养系统，使得第一代大鼠在无菌环境下饲养长大，长大后继续繁育至第二代即无菌动物模型构建成功，整个过程需要严格控制无菌条件。
[0004]但无菌动物模型的构建存在饲养条件苛刻、实验周期漫长、经费花销极高等缺点，而抗生素往往需要连续灌胃21天以上才可以发挥效用。长期灌胃抗生素不仅容易导致耐药微生物群增加，还会对肠组织产生损伤，例如空肠小肠绒毛脱落、肠蠕动速率减慢等。此外，如果后续进行菌群再定植还会大大降低菌群的定植效率。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种新的伪无菌大鼠模型的构建方法，并从大鼠小肠病理学损伤、肠道菌群稳定性方面对此方法进行评估。本专利技术通过大鼠给药一定天数的灌肠液与四联抗生素，建立一种实验周期较短，经费花销低，菌群稳定，造模成功率高且对大鼠肠组织无病理损伤的伪无菌大鼠模型建造方案，为后续肠道菌群功能研究提供一种定量化研究工具。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一种伪无菌大鼠模型的构建方法，包括以下步骤：S1，采用复方聚乙二醇电解质散混合乳果糖口服液灌胃大鼠以清除大鼠肠内容物；S2，清除大鼠肠内容物后，每隔50
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70min灌胃一次四联抗生素溶液，连续8
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10次；S3，之后，每天灌胃四联抗生素溶液两次，连续灌胃至大鼠体重变化稳定，粪便DAI评分为0后，停止灌胃。
[0007]作为优选方案，步骤S1中，所述复方聚乙二醇电解质散混合乳果糖口服液的配制方法为：用水将乳果糖口服液稀释，得到混合液，然后将复方聚乙二醇电解质散溶于所述混合液；每份复方聚乙二醇电解质散由以下物质组成：A 剂：聚乙二醇4000，13.125 g；B 剂：碳酸氢钠0.1785 g，氯化钠0.3507g，氯化钾 0.0466 g。
[0008]作为优选方案，所述乳果糖口服液、复方聚乙二醇电解质、水的用量比为：30ml：1份：500ml。
[0009]作为优选方案，步骤S1中，所述采用复方聚乙二醇电解质散混合乳果糖口服液灌
胃大鼠具体为：第一天连续灌胃8
‑
10次，第二天连续灌胃3
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5次，每次间隔50
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70min，每次1.8
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2.2ml。
[0010]作为优选方案，步骤S2中，每1L所述四联抗生素溶液的配制方法为：将1.125g阿莫西林克拉维酸钾片、50mg注射用替加环素、400mg盐酸莫西沙星和1.67g/L奥硝唑溶于无菌注射用水中，定容至1L。
[0011]作为优选方案，步骤S2中，按大鼠体重每次灌胃四联抗生素溶液9
‑
11ml/kg。
[0012]作为优选方案，步骤S3中，每天早晚灌胃一次四联抗生素溶液，按大鼠体重每次灌胃四联抗生素溶液9
‑
11ml/kg。
[0013]作为优选方案，步骤S3中，连续灌胃四联抗生素溶液4天。
[0014]作为优选方案，构建过程中，将大鼠饲养于带灭菌垫料、紫外线照射的单独隔间内，自由饮用灭菌饲料及灭菌注射用水。
[0015]本专利技术的第二个目的是提供一种伪无菌大鼠模型，是应用上述的方法构建得到的。
[0016]本专利技术的技术关键点在于灌肠液配比，采用大鼠安全剂量的复方聚乙二醇电解质散混合乳果糖口服液，第一天连续灌胃9h，第二天连续灌胃4h，每小时一次，每次2ml，清理大鼠的肠内容物之后再给予大鼠安全剂量的四联抗生素：阿莫西林克拉维酸钾片（1.125g/L）+注射用替加环素（50mg/L）+盐酸莫西沙星（400mg/L）+奥硝唑（1.67g/L）每隔1h灌胃一次，连续灌胃9h，清除或抑制肠道内不同种类的菌群。在无菌隔离室内正常饮灭菌后的食物和水，连续灌胃小剂量抗生素4天，减少菌群再定植。至大鼠体重变化稳定，粪便DAI评分为0时，即第7天，停止灌胃抗生素，正常饮用灭菌饲料及用水。第8天，第9天，第10天，连续进行革兰氏染色，检测模型稳定性。
附图说明
[0017]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1为不同药物处理前后大鼠体重对比。
[0018]图2为各组大鼠评分统计图。
[0019]图3为各组大鼠小肠、结肠解剖示例图。其中，A组为禁食12h组，B组为舒泰清处理组，C组为乳果糖+舒泰清处理组。
[0020]图4为各组大鼠盲肠生物量对比图。
[0021]图5为各组大鼠盲肠解剖示例图。其中，A组为乳果糖+舒泰清处理组，B组为舒泰清处理组，C组为禁食12h组。
[0022]图6为本专利技术的伪无菌大鼠模型的建立方法的流程图。
[0023]图7为各组大鼠体重变化折线图。
[0024]图8为各组大鼠小肠组织HE染色镜检图（200
×
）。
[0025]图9为各组大鼠盲肠解剖图。
[0026]图10为各组大鼠粪便样品革兰氏染色镜检图（100
×
）。
[0027]图11 为各组大鼠粪便样品16sRNA测定科水平物种组成柱状图。
[0028]图12为各组大鼠粪便16sRNA组间Alpha多样性指数盒状图。
[0029]图13为正常空白组大鼠与伪无菌模型组大鼠硝苯地平药时曲线图及药代动力学参数。
具体实施方式
[0030]以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。
[0031]实施例1大鼠灌肠液筛选过程实验名称:灌肠液筛选实验实验动物：18只雄性，wistar大鼠，体重为200
±
20g。
[0032]实验药物前处理：复方聚乙二醇电解质散（舒泰清）溶液+乳果糖口服液的配制：用无菌注射用水将30ml乳果糖口服液稀释至500ml，然后将1包复方聚乙二醇电解质散溶于上述混合物。
[0033]每包复方聚乙二醇电解质散（舒泰清）由以下物质组成：A剂：聚乙二醇4000，13.125g；B剂：碳酸氢钠0.1785g，氯化钠0.3507g，氯化钾0.0466g。
[0034]复方聚乙二醇电解质散（舒泰清）溶液的配制：将1包复方聚乙二醇电解质散用水稀释至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种伪无菌大鼠模型的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：S1，采用复方聚乙二醇电解质散混合乳果糖口服液灌胃大鼠以清除大鼠肠内容物；S2，清除大鼠肠内容物后，每隔50
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70min灌胃一次四联抗生素溶液，连续8
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10次；S3，之后，每天灌胃四联抗生素溶液两次，连续灌胃至大鼠体重变化稳定，粪便DAI评分为0后，停止灌胃。2.根据权利要求1所述的一种伪无菌大鼠模型的构建方法，其特征在于：步骤S1中，所述复方聚乙二醇电解质散混合乳果糖口服液的配制方法为：用水将乳果糖口服液稀释，得到混合液，然后将复方聚乙二醇电解质散溶于所述混合液；每份复方聚乙二醇电解质散由以下物质组成：A 剂：聚乙二醇4000，13.125 g；B 剂：碳酸氢钠0.1785 g，氯化钠0.3507g，氯化钾 0.0466 g。3.根据权利要求2所述的一种伪无菌大鼠模型的构建方法，其特征在于：所述乳果糖口服液、复方聚乙二醇电解质散、水的用量比为：30ml：1份：500ml。4.根据权利要求3所述的一种伪无菌大鼠模型的构建方法，其特征在于：步骤S1中，所述采用复方聚乙二醇电解质散混合乳果糖口服液灌胃大鼠具体为：第一天连续灌胃8
‑
10次，第二天连续灌胃3
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5次，每次间隔...

【专利技术属性】
技术研发人员：王荣，贺嘉馨，李文斌，张娟红，孙月梅，
申请(专利权)人：中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院，
类型：发明
国别省市：