蜡样芽孢杆菌群检测用培养基制造技术

本发明专利技术提供一种能够简单地制造、无论温度条件如何蜡样芽孢杆菌的生长均良好、且选择性优异的蜡样芽孢杆菌群检测用培养基及使用了该培养基的蜡样芽孢杆菌群检测方法。所述蜡样芽孢杆菌群检测用培养基含有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C底物与甲氧苄啶，所述磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C底物具有能够被检测出的显色性或荧光性的游离基。荧光性的游离基。荧光性的游离基。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】蜡样芽孢杆菌群检测用培养基


[0001]本专利技术涉及蜡样芽孢杆菌群检测用培养基。

技术介绍

[0002]蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)是一种革兰氏阳性芽孢杆菌，通常广泛分布于土壤、河流等自然界中。关于本细菌所造成的污染范围，以作为与土壤紧密相关的食品的谷类、香料等为首，涉及因使用这些食品而被交差污染的食品、例如炒面、意大利面等面类、饭团、炒饭等米饭类、奶油焗(烤)、比萨、海鲜类及其加工品、食用肉及其加工品、食品原材料、点心类等、环境、临床材料等众多种类。本细菌所造成的污染有时会引起腐烂、变质。此外，已知本细菌可产生呕吐毒素及腹泻毒素，有时还会引起食物中毒。因此，从食品卫生及安全的角度出发，对本细菌的控制也很重要(非专利文献1)。
[0003]通常，作为用于检测蜡样芽孢杆菌的培养基，已知有NGKG琼脂培养基或MYP琼脂培养基(非专利文献1～3等)等。这些培养基利用作为蜡样芽孢杆菌的特性之一的蛋黄反应作为检测原理之一，因此含有蛋黄。这些含有蛋黄的培养基的配制方法由以下工序组成：事先将除蛋黄以外的琼脂等培养基原料进行灭菌并溶解的工序；冷却至50℃左右并进行保温的工序；接着以无菌方式对该培养基进一步添加并混合所采集的蛋黄的工序；然后将由此混合而成的培养基原料分注至培养皿中并使其固体化的工序。如上所述，在添加蛋黄时至少需要3道工序，步骤繁杂。这是为了防止蛋黄成分发生热变性，特别是在冷却保温工序中，若添加所采集的蛋黄时的培养基的温度过高，则蛋黄成分会发生变性，而若培养基温度过低，则会引起琼脂的固体化等，因此该温度的管理是重要的，需要熟练的经验。此外，由于检测原理所利用的所采集的蛋黄的状态容易因卵用鸡的品种差或个体差、饲养环境等而发生大幅改变，进而导致培养基性能也受控于所采集的蛋黄的状态，因此，对于培养后的具有蛋黄反应的菌落的鉴别而言，需要具有一定的经验性的规则。
[0004]因此，作为不利用蛋黄反应的蜡样芽孢杆菌群的检测用培养基，本申请的专利技术人提出了一种含有多粘菌素B、甲氧苄啶、林可霉素类抗生素及作为α
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葡萄糖苷酶的底物的5
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溴
‑4‑
氯
‑3‑
吲哚基
‑
α
‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷这4种成分的培养基(专利文献1)。此外，还提出了一种用于选择性检测蜡样芽孢杆菌及苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的培养基，其除了掺合有具有能够被检测出的显色性或荧光性的游离基的磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C底物与营养成分以外，还掺合有氯化锂、头孢他啶、多粘菌素B硫酸盐等(专利文献2)。现有技术文献专利文献
[0005]专利文献1：日本特开2011
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4712号公报专利文献2：美国专利第6284517号说明书
非专利文献
[0006]非专利文献1：食品衛生検査指針微生物編2004厚生労働省監修社団法人日本食品衛生協会266
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282頁非专利文献2：ISO11133 Microbiology of food,animal feed and water
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Preparation,production,storage and performance testing of culture media(2014)非专利文献3：ISO7932 Microbiology of food and animal feeding stuffs
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Horizontal method for the enumeration of presumptive Bacillus cereus
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Colony
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count technique at 30℃(2004)

技术实现思路

本专利技术要解决的技术问题
[0007]然而，已知专利文献1中记载的培养基在与ISO7932的MYP培养基的培养条件相同的30℃下，存在有时24小时的蜡样芽孢杆菌的生长不充分而无法检测到明确的菌落，葡萄球菌(Staphylococcus)属的一部分会造成假阳性等问题。此外，已知对于专利文献2中记载的培养基而言，不仅是蜡样芽孢杆菌群会呈阳性，李斯特氏菌(Listeria)等也会呈阳性。因此，本专利技术的技术问题为提供一种能够简单地制造、无论温度条件如何蜡样芽孢杆菌的生长均良好、且选择性优异的蜡样芽孢杆菌群检测用培养基及使用了该培养基的蜡样芽孢杆菌群检测方法。解决技术问题的技术手段
[0008]因此，鉴于上述实际情况，本申请的专利技术人对专门用于蜡样芽孢杆菌群检测的培养基及其检测方法进行了各种研究，结果发现，若使用具有能够被检测出的显色性或荧光性的游离基的磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C底物作为显色性或荧光性底物，并使培养基中含有甲氧苄啶，则即使不利用蛋黄反应，也能够在抑制除蜡样芽孢杆菌群以外的微生物的繁殖的同时，改善蜡样芽孢杆菌群的生长，从而完成了本专利技术。
[0009]即，本专利技术提供以下的专利技术[1]～[7]。[1]一种蜡样芽孢杆菌群检测用培养基，其含有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C底物与甲氧苄啶，所述磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C底物具有能够被检测出的显色性或荧光性的游离基。[2]根据[1]所述的蜡样芽孢杆菌群检测用培养基，其进一步含有β
‑
内酰胺类抗生素。[3]根据[1]或[2]所述的蜡样芽孢杆菌群检测用培养基，其进一步含有抗真菌剂。[4]根据[1]～[3]中任一项所述的蜡样芽孢杆菌群检测用培养基，其中，具有能够被检测出的显色性或荧光性的游离基的磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C底物选自5
‑
溴
‑4‑
氯
‑3‑
吲哚基肌醇
‑1‑
磷酸酯、5
‑
溴
‑6‑
氯
‑3‑
吲哚基肌醇
‑1‑
磷酸酯、6
‑
氯
‑3‑
吲哚基肌醇
‑1‑
磷酸酯、4
‑
甲基伞形酮肌醇1
‑
磷酸酯、4
‑
硝基苯基
‑
肌醇
‑1‑
磷酸酯、荧光素
‑
肌醇
‑1‑
磷酸酯及它们的盐。[5]根据[2]～[4]中任一项所述的蜡样芽孢杆菌群检测用培养基，其中，β
‑
内酰胺类抗生素选自青霉素类、头孢烯类、碳青霉烯类、单环菌素类及培南类抗生素。[6]根据[1]～[5]中任一项所述的蜡样芽孢杆菌群检测用培养基，其中，蜡样芽孢
杆菌群为选自蜡样芽孢杆菌、炭疽杆菌(Bacillus anthracis)、苏云金芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides)、假蕈状芽孢杆菌(Bacillus pseudomycoides)、韦氏芽胞杆菌(Bacillus weihenstephanensis)、细胞毒素芽孢杆菌(Baci本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种蜡样芽孢杆菌群检测用培养基，其含有磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C底物与甲氧苄啶，所述磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C底物具有能够被检测出的显色性或荧光性的游离基。2.根据权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌群检测用培养基，其进一步含有β
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内酰胺类抗生素。3.根据权利要求1或2所述的蜡样芽孢杆菌群检测用培养基，其进一步含有抗真菌剂。4.根据权利要求1～3中任一项所述的蜡样芽孢杆菌群检测用培养基，其中，具有能够被检测出的显色性或荧光性的游离基的磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C底物选自5
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溴
‑4‑
氯
‑3‑
吲哚基肌醇
‑1‑
磷酸酯、5
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溴
‑6‑
氯
‑3‑
吲哚基肌醇
‑1‑
磷酸酯、6
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氯
‑3‑
吲哚基肌醇
‑1‑
磷酸酯、4
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甲基伞形酮肌醇1
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磷酸酯、4
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硝基苯基
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【专利技术属性】
技术研发人员：小柳祐辅，
申请(专利权)人：日水制药株式会社，
类型：发明
国别省市：