一种幽门螺旋杆菌药敏试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及药敏检测技术领域，具体涉及一种幽门螺旋杆菌药敏试剂盒及其检测方法。本发明专利技术的检测方法包括：制备选择性培养基、配制幽门螺旋杆菌药敏板、菌种培养接种、药敏检测等步骤，通过设置高低两个不同浓度的抗生素实验组以及阴性对照组，将经过选择性培养基培养后的幽门螺旋杆菌接种至药敏板中，培养后，通过氧化酶变色反应进行药敏结果分析，从而判定幽门螺旋杆菌对抗生素的敏感性。本发明专利技术方法可以更加准确、快速的进行幽门螺旋杆菌对抗生素敏感性的分析。感性的分析。感性的分析。

【技术实现步骤摘要】
一种幽门螺旋杆菌药敏试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术涉及药敏检测
，具体涉及一种幽门螺旋杆菌药敏试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]幽门螺旋杆菌作为一种革兰氏阴性弯曲杆菌，微需氧，对生长条件要求十分苛刻，主要分布在胃黏膜组织中，可引起胃炎、消化道溃疡等疾病，严重者可导致胃癌。2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布幽门螺杆菌(感染)在一类致癌物清单中。预防和控制胃癌已日益引起人们的关注，及早发现幽门螺旋杆菌感染者，及时而有效地用抗生素杀灭幽门螺旋杆菌，对预防和控制胃癌有重大意义。
[0003]目前，主要用于幽门螺旋杆菌根除治疗的抗生素是：阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑、左氧氟沙星以及呋喃唑酮。而现在，微生物耐药性正在不断增长蔓延，因此，在对幽门螺旋杆菌患者进行治疗之前应先进行耐药性实验，以保证制定最有效果的治疗方案，防止由于幽门螺旋杆菌的耐药性而耽误最佳治疗时间。
[0004]现有的幽门螺旋杆菌药敏检测方法存在较多缺陷，常用的尿素酶法易受胃内幽门螺旋杆菌分布不均匀以及pH值的影响而导致结果出现假阳性；常用的药敏纸片法、平板稀释法受抗生素含量以及菌液浑浊程度的影响较大，培养时间较长，结果往往不够准确。此外，几乎所有的技术方案都是将幽门螺旋杆菌直接在含有抗生素的培养基中培养，检测；由于抗生素的作用，导致幽门螺旋杆菌生长缓慢，导致药敏检测效率低，最关键的，随着幽门螺旋杆菌的培养，培养基变浑浊，加入药敏反应液难以区分相邻浓度区间的颜色变化。
[0005]因此，寻找一种药敏检测效率高，检测效果更显著的幽门螺旋杆菌药敏检测方法是十分重要的。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种幽门螺旋杆菌药敏检测方法，通过选择性培养基对幽门螺旋杆菌进行培养鉴定，随后接种至药敏板中，培养后加入氧化酶反应液，通过颜色变化来判定幽门螺旋杆菌对抗生素的敏感性，从而对幽门螺旋杆菌耐药性进行快速检测。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术提供技术方案如下：
[0008]一种幽门螺旋杆菌药敏检测方法，包括如下步骤：
[0009](1)制备选择性培养基；
[0010](2)配制幽门螺旋杆菌药敏板：将低浓度抗生素及高浓度抗生素加入药敏板中，同时设置阴性对照组和阳性对照组；
[0011](3)菌种培养接种：幽门螺旋杆菌接种至选择性培养基中培养，菌液接种至药敏板中培养；
[0012](4)药敏检测：向药敏板加入氧化酶反应液，1～3min后根据颜色变化判断药敏性；
[0013]所述低浓度抗生素的浓度为1～8mg/L，高浓度抗生素的浓度为32～64mg/L。
[0014]进一步的，(1)中，所述选择性培养基包括如下含量的成分：
[0015][0016][0017]剩余的两个板孔一个加入选择性培养基得到阴性对照组，一个加入包含幽门螺旋杆菌的选择性培养基得到阳性对照组。
[0018]所述选择性培养基还包括抑菌剂，所述抑菌剂包括如下含量的组分：5mg/L头孢磺啶、5mg/L TMP、10mg/L万古霉素、5mg/L两性霉素B、2.5mg/L多粘菌素B；进一步的，所述选择性培养基需要添加的抑菌剂和无菌冻融脱纤维马血在121℃，20min灭菌后，放置45～55℃时加入；所述选择性培养基pH值为7.0～7.5。
[0019]进一步的，(2)中，所述药敏板具有12板孔，将如下浓度的抗生素分别放置于不同板孔内：
[0020][0021]上述不同浓度种类的抗生素共占10板孔，剩余2板孔分别为阴性对照组和阳性对照组。
[0022]进一步的，将含有抗生素的药敏板干燥保存。
[0023]进一步的，(3)中，幽门螺旋杆菌接种至选择性培养基中培养，培养条件为37℃，二氧化碳体积浓度为5～10％，培养时间24～48h。
[0024]进一步的，(4)中，所述氧化酶反应液为1mg/mL的对苯二胺水溶液，优选的，将菌液接种至药敏板中培养，随后每孔加入10μL氧化酶反应液，观察颜色变化。
[0025]本专利技术的药敏检测方法根据颜色变化判断药敏性的判断标准为：加入氧化酶反应液，低浓度抗生素和高浓度抗生素对应的板孔显色为蓝色，则为耐药；低浓度抗生素和高浓度抗生素对应的板孔不显色，则为敏感；高浓度抗生素颜色对应的板孔不显色，低浓度抗生
素对应的板孔显色为蓝色，则为中敏。
[0026]本专利技术还提供一种幽门螺旋杆菌药敏检测试剂盒，包括选择性培养基、药敏板、氧化酶反应液(1mg/mL的对苯二胺水溶液)；
[0027]优选的，一种幽门螺旋杆菌药敏检测试剂盒包括20人份选择性培养基、具有12板孔的药敏板、氧化酶反应液5mL。
[0028]进一步的，所述试剂盒用于临床幽门螺旋杆菌对抗生素的敏感性测试。
[0029]与现有产品相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0030]1)迅速便捷：本专利技术的幽门螺旋杆菌药敏检测方法，是将培养后的菌液加入到含抗生素的药敏板中，通过加入氧化酶反应液发生变色反应，观察颜色变化，即可在1min左右迅速得出结果；
[0031]2)结果稳定：本专利技术通过氧化酶变色反应判定幽门螺旋杆菌对抗生素的敏感性，首先，具有氧化酶的幽门螺旋杆菌使细胞色素C氧化，然后氧化型的细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生蓝色变化，即为幽门螺旋杆菌生长，对抗生素不敏感，反之，无颜色变化则为敏感，将结果分为三种，相比抗生素倍比稀释法，本专利技术的方法颜色变化更明显，极大的降低了判断难度；
[0032]3)培养高效：本专利技术使用特有的选择性培养基快速的选择性的培养幽门螺旋杆菌，缩短了检测周期。
附图说明
[0033]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0034]图1为本专利技术氧化酶反应法与倍比稀释法板孔显色图。
具体实施方式
[0035]下面通过具体的实施方案叙述本专利技术。除非特别说明，本专利技术中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本专利技术的范围，本专利技术的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本专利技术实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本专利技术的保护范围。
[0036]实施例中所述氧化酶反应法即为本专利技术的一种幽门螺旋杆菌药敏检测方法。
[0037]实施例1
[0038]一种幽门螺旋杆菌药敏检测方法，为如下步骤：
[0039](1)制备选择性培养基，选择性培养基的组分为：
[0040][0041][0042]上述组分溶解于去离子水得到选择性培养基，其中无菌冻融脱纤维马血在121℃，20min灭菌后，放置45～55℃时加入。
[0043](2)配制幽门螺旋杆菌药敏板：将低浓度抗生素及高浓度抗生素加入具有12板孔的药敏板中，同时设置阴本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺旋杆菌药敏检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备选择性培养基；(2)配制幽门螺旋杆菌药敏板：将低浓度抗生素及高浓度抗生素加入药敏板中，同时设置阴性对照组和阳性对照组；(3)菌种培养接种：幽门螺旋杆菌接种至(1)中的选择性培养基中培养得到菌液，菌液接种至药敏板中培养；(4)药敏检测：向药敏板加入氧化酶反应液，1～3min后根据颜色变化判断药敏性；所述低浓度抗生素的浓度为1～8mg/L，高浓度抗生素的浓度为32～64mg/L。2.如权利要求1所述的一种幽门螺旋杆菌药敏检测方法，其特征在于，(1)中，所述选择性培养基包括如下含量的成分：3.如权利要求1所述的一种幽门螺旋杆菌药敏检测方法，其特征在于，(2)中，所述药敏板具有12板孔，将如下浓度的抗生素分别放置于不同板孔内：板具有12板孔，将如下浓度的抗生素分别放置于不同板孔内：4.如权利要求1所述的一种幽门螺旋杆菌药敏检测方法，其特征在于，(2)中，所述阴性对照组为不加幽门螺杆菌且不含任何抗生素的选择性培养基，所述的阳性对照组为含有幽门螺杆菌但不含任何抗生素的选择性培养基。5.如权利要求1所述的一种幽门螺旋杆菌药敏检测方法，其特征在于，(3)...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢志明，崔光华，谢清华，胡晓飞，董雯，
申请(专利权)人：山东博科生物产业有限公司，
类型：发明
国别省市：