一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法技术

本发明专利技术公开了一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法，该方法包括以下步骤：配制PBST筛选培养基和无机盐培养基；膜片预处理：将PBAT地膜剪成膜片，然后依次浸泡于SDS和乙醇中；PBST降解菌的分离纯化：将土壤加入生理盐水中，制成土壤悬液，取土壤悬液接于30mlPBST筛选培养基中，逐日观察，待培养基出现浑浊，通过涂布稀释平板法在PBST筛选培养基分离纯化；PBST地膜降解菌的鉴定：16SrDNA序列在RDP数据库上比对，从中选择匹配度为95％以上的细菌菌株。本发明专利技术通过PBST筛选培养基和无机盐培养基相对照培养微生物菌群，并进行降解菌鉴定处，从而能够准确筛选处降解PBST地膜的菌株。菌株。

【技术实现步骤摘要】
一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法


[0001]本专利技术涉及菌株选育领域，具体是一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法。

技术介绍

[0002]地膜技术从最初的蔬菜种植，目前已经推广到棉花、玉米、甜菜、甘蔗、番茄、番薯、甜瓜等20余种作物。然而，地膜的广泛使用也带来了新的问题。目前传统农用塑料地膜材料主要是聚乙烯(PE)，在自然环境条件下难以降解，加之缺乏有效的治理措施，废旧地膜在农田土壤中逐年增多，污染持续加剧。据统计，我国农田每年会新增20
‑
30万吨不能降解的残留地膜，使土壤环境恶化，土壤含水量下降，板结且肥力下降，最终导致农作物减产。更有甚者，长久以来积聚的碎裂在土壤里的地膜碎片，完全处于失控状态，最终将渗入地下水系统或者悬浮在大气尘埃中，而给人类带来持久毁灭性的灾害。因此，开发可替代的全生物降解地膜材料，是迫在眉睫的事情。
[0003]PBST主要通过千吨以上聚酯装置聚合制备，采用1，4
‑
丁二酸、对苯二甲酸、1，4
‑
丁二醇为单体原料，稀土化合物作为催化剂，采用3釜或5釜流程，通过“双酯化、预缩聚、终塑聚”工艺，完成聚合。聚合产物在经过必要的增粘处理，进行吹膜，就可以得到生物降解地膜。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法，以解决
技术介绍
中的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法，包括以下步骤：
[0007]步骤一：配制PBST筛选培养基和无机盐培养基；
[0008]步骤二：PBST地膜降解菌的筛选
[0009](1)膜片预处理：将PBAT地膜剪成膜片，然后依次浸泡于2％SDS、75％乙醇和95％乙醇中，浸泡完毕后用无菌水冲洗直至冲洗干净，置于紫外灭菌灯下灭菌15min；
[0010](2)PBST降解菌的分离纯化：将土壤加入生理盐水中，制成浓度为10
‑4土壤悬液，取2ml土壤悬液接于30mlPBST筛选培养基中置于28℃，逐日观察，待培养基出现浑浊，通过涂布稀释平板法在PBST筛选培养基分离纯化；同时将2ml制备的土壤稀释液接种到30mL的无机盐培养基中作为对照品；
[0011]步骤三：PBST地膜降解菌的鉴定：测定16SrRNA并且16SrDNA序列在RDP数据库上比对，从中选择匹配度为95％以上的细菌菌株。
[0012]在上述技术方案的基础上，本专利技术还提供以下可选技术方案：
[0013]在一种可选方案中：所述PBST筛选培养基包括以下组分：PBST、K2HPO4·
3H2O、KH2PO4、MgSO4·
7H2O、NH4NO3、NaCl、FeSO4·
7H2O、ZnSO4·
7H2O和MnSO4·
H2O；其中，PBST筛选
培养基的PH值为7.2，并在培养基中添加琼脂粉。
[0014]在一种可选方案中：所述无机盐培养基包括以下组分：K2HPO4·
3H2O、KH2PO4、MgSO4·
7H2O、NH4NO3、NaCl、FeSO4·
7H2O、ZnSO4·
7H2O和MnSO4·
H2O，其中，无机盐培养基的PH值为7.2，并在培养基中添加琼脂粉。
[0015]在一种可选方案中：所述膜片的尺寸为2cm
×
1.5cm。
[0016]在一种可选方案中：所述膜片预处理中PBAT地膜在浸泡期间分别用数控超声波清洗仪和旋涡混匀仪振荡清洗10min。
[0017]在一种可选方案中：所述对照品于温度28摄氏度以及转速150r/min的搅拌下培养。
[0018]相较于现有技术，本专利技术的有益效果如下：
[0019]1、本专利技术采用自然环境中的微生物菌群对PBST地膜进行土壤富集培养，能够有效筛选及培育降解PBST地膜的菌株；
[0020]2、本专利技术通过PBST筛选培养基和无机盐培养基相对照培养微生物菌群，并进行降解菌鉴定处，从而能够准确筛选处降解PBST地膜的菌株。
具体实施方式
[0021]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白。本专利技术所列举的各实施例仅用以说明本专利技术，并非用以限制本专利技术的范围。对本专利技术所作的任何显而易知的修饰或变更都不脱离本专利技术的精神与范围。
[0022]在一种实施例中提出一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法，具体方法如下：
[0023]培养基的配制：
[0024]PBST筛选培养基(g/L)：1g PBST、0.92gK2HPO4·
3H2O、0.7g KH2PO4、0.7g MgSO4·
7H2O、1.0g NH4NO3、0.005gNaCl、0.002g FeSO4·
7H2O、0.002g ZnSO4·
7H2O和0.001g MnSO4·
H2O，pH＝7.2左右，固体培养基添加18
‑
20g的琼脂粉；
[0025]无机盐培养基：0.92gK2HPO4·
3H2O、0.7g KH2PO4、0.7g MgSO4·
7H2O、1.0g NH4NO3、0.005gNaCl、0.002g FeSO4·
7H2O、0.002g ZnSO4·
7H2O和0.001g MnSO4·
H2O，pH＝7.2左右；固体培养基添加18
‑
20g的琼脂粉。
[0026]PBAT地膜降解菌的筛选
[0027]膜片预处理
[0028]将PBAT地膜剪成大小为2cm
×
1.5cm的膜片，然后依次浸泡于2％SDS、75％乙醇、95％乙醇中4h，期间分别用数控超声波清洗仪和旋涡混匀仪振荡清洗10min，浸泡完毕后用无菌水冲洗3次，再用无菌水冲洗干净，置于紫外灭菌灯下灭菌15min。
[0029]PBST降解菌的分离纯化
[0030]将1.0g土壤加入9.0mL生理盐水中，制成浓度为10
‑4土壤悬液，取2ml接于30mlPBST筛选培养基中置于28℃，逐日观察，待培养基出现浑浊，通过涂布稀释平板法在PBST筛选培养基分离纯化。同时将2ml制备的土壤稀释液接种到30mL的无机盐培养基中作为对照，于28℃、150r/min培养。
[0031]PBST地膜降解菌的鉴定
[0032]16SrRNA测序在生工生物工程(上海)股份有限公司进行，16SrDNA序列在RDP数据库http://rdp.cme.msu.edu/index.jsp上比对，从中选择匹配度为95％以上的细菌菌株。
[0033]测序结果如下：
[0034]S1952 Z
‑
1 1472bp
[0035]TTTGATTCCTGGCTCAGGA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：配制PBST筛选培养基和无机盐培养基；步骤二：PBST地膜降解菌的筛选(1)膜片预处理：将PBAT地膜剪成膜片，然后依次浸泡于2％SDS、75％乙醇和95％乙醇中，浸泡完毕后用无菌水冲洗直至冲洗干净，置于紫外灭菌灯下灭菌15min；(2)PBST降解菌的分离纯化：将土壤加入生理盐水中，制成浓度为10
‑4土壤悬液，取2ml土壤悬液接于30mlPBST筛选培养基中置于28℃，逐日观察，待培养基出现浑浊，通过涂布稀释平板法在PBST筛选培养基分离纯化；同时将2ml制备的土壤稀释液接种到30mL的无机盐培养基中作为对照品；步骤三：PBST地膜降解菌的鉴定：测定16SrRNA并且16SrDNA序列在RDP数据库上比对，从中选择匹配度为95％以上的细菌菌株。2.根据权利要求1所述的能够有效降解PBST地膜的菌株的选育方法，其特征在于，所述PBST筛选培养基包括以下组分：PBST、K2HPO4·
3H2O、KH2PO4、MgSO4·
7H2O、NH4NO3、NaCl、FeSO4·

【专利技术属性】
技术研发人员：张爱琳，祝培豪，何玉香，朱兆清，樊秀花，苗颖，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：