靶向Nectin-4的抗体药物偶联物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术提供了一种靶向脊髓灰质炎病毒受体样分子4(Nectin

【技术实现步骤摘要】
靶向Nectin
‑
4的抗体药物偶联物及其制备方法和用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本专利申请要求于2021年4月30日提交的申请号为CN202110481199.4的中国专利技术专利申请的优先权权益，在此将其全部内容引入作为参考。


[0003]本专利技术涉及抗体药物偶联物，具体而言，本专利技术涉及靶向脊髓灰质炎病毒受体样分子4(Nectin
‑
4)的抗体药物偶联物及其制备方法和用途。

技术介绍

[0004]Nectins(脊髓灰质炎病毒受体样分子)是一类新颖的细胞粘附蛋白，与钙粘蛋白共同或单独调节细胞连接，家族成员包括Nectin
‑
1、
‑
2、
‑
3、
‑
4，它们都由具有3个Ig的环状结构、1个跨膜区、胞质尾区组成。在这些成员中，Nectin
‑
4特异性表达于胚胎、胎盘以及肿瘤细胞中，已有研究发现其与多种肿瘤细胞的发生、发展有着密切联系。例如，对2394例肿瘤患者进行病理切片分析，发现Nectin
‑
4广泛表达于膀胱癌、乳腺癌以及胰腺癌患者人群中。因此，Nectin
‑
4已成为许多肿瘤或癌症的诊断和治疗的一个重要靶点。
[0005]抗体药物偶联物(Antibody
‑
drug conjugate；ADC)是一种利用抗体对肿瘤细胞表面特定抗原的特异性识别能力，精准地将抗肿瘤药物(如细胞毒性剂、细胞抑制剂、小分子化疗物等)递送到肿瘤靶细胞，使之发生胞内积蓄并释放，进而精准杀伤肿瘤的技术。抗体药物偶联物一般由三部分组成：抗体或抗体类配体，小分子药物，将抗体或抗体类配体与药物偶联起来的连接子(接头)。由于分子量大小合适，稳定性高，靶向性强，毒副作用小，抗体药物偶联物已被认为是最具潜力的抗肿瘤药物。
[0006]但是，成功开发ADC也存在诸多必须考虑且解决的问题。例如，抗体需特异性地识别病变部位，免疫致敏性低，能够高效迅速地发生细胞内吞作用；抗体
‑
药物接头，在血液中稳定性要高并需在所靶向的细胞中特异地被激活并高效释放小分子药物，否则会对正常细胞产生不可接受水平的毒性；所偶联的小分子药物需具有强细胞杀伤能力等。在目前进入临床试验的抗体药物偶联物中，高活性的细胞毒性小分子药物通常是通过连接子连接在抗体表面的赖氨酸残基或者铰链区域的半胱氨酸残基处，最佳药物/配体比值(DAR)为2
‑
4。但是，抗体表面大量的赖氨酸残基(超过80个)以及偶联反应的非选择性，导致偶联数目和位点不确定，进而导致生成的抗体药物偶联物不均一。例如，由抗HER2靶向药物曲妥珠单抗与微管抑制剂美坦新(DM1)制成的抗体药物偶联物T
‑
DM1(平均DAR为3.5)，其DAR分布为0
‑
8。同样，虽然抗体铰链区的链间二硫键只有四对，但为了达到最佳平均DAR(2
‑
4)的要求，需要对链间二硫键进行部分还原。但是，现有还原剂(DTT、TCEP等)无法选择性地还原链间二硫键，因此生成的偶联物也不是均一的产物，而是由多种组分组成，主要组分的DAR为0、2、4、6、8，而且对应每一种特定DAR的组分都存在由于连接位点不同而形成的异构体。抗体药物偶联物产品的不均一性可导致各成员组分之间药物动力学性质、效价以及毒性的不均一性。例如，具有较高DAR的组分在体内被清除得更快，并导致更高的毒性。
[0007]目前，西雅图基因公司与安斯泰来合作，利用该公司特有的连接子mc
‑
vc
‑
MMAE与anti
‑
Nectin
‑
4抗体enfortumab进行随机偶联，得到一种anti
‑
Nectin
‑
4抗体药物偶联物Enfortumab Vedotin(Padcev)。临床试验结果显示，在接受化疗以及PD
‑
1/PD
‑
L1抑制剂治疗的患者中，接受Enfortumab Vedotin的患者的中位总生存期为12.9个月，比化疗对照组延长了3.9个月，显示了良好的肿瘤治疗效果。然而，临床研究同时发现，使用Enfortumab Vedotin往往伴随发热、皮肤瘙痒、周围神经病、干眼症、中性粒细胞下降。这些不良反应与小分子与抗体连接过量、连接方式不稳定直接相关。
[0008]因此，本领域迫切需要提供高效、简单、实用的化学偶联方法用于靶向Nectin
‑
4的抗体
‑
药物偶联物研究与开发。

技术实现思路

[0009]本专利技术要解决的技术问题是，通过杂交瘤筛选和人源化技术，获得特异性结合人Nectin
‑
4的高亲和力抗体，其中通过人源化设计，使该抗体最大程度减少鼠源氨基酸的数目，以拥有更好的体内安全性和应用前景；在此基础上，进一步筛选具有更强细胞内吞效应的抗体，将其与小分子化学药物制备成抗体药物偶联物(antibody
‑
drug conjugate)，利用该抗体对Nectin
‑
4表达细胞的靶向性和经由靶点的强的内吞效应，结合该小分子化学药物的作用，以达到优异的肿瘤杀伤效果。
[0010]因此，本专利技术的一个目的是提供特异性结合Nectin
‑
4的抗体或其片段；其中，所述抗体的片段涵盖抗体的各种功能性片段，例如其抗原结合部分，如Fab、F(ab
’
)2或scFv片段。本专利技术的另一个目的是提供采用该抗体或其片段制备的靶向Nectin
‑
4的抗体药物偶联物或其盐。
[0011]本专利技术的技术方案如下。
[0012]一方面，本专利技术提供一种靶向Nectin
‑
4的抗体药物偶联物或其盐，其包含与药物共价连接的抗Nectin
‑
4的抗体或其片段。
[0013]在本专利技术提供的抗体药物偶联物或其盐中，所述抗Nectin
‑
4的抗体或其片段包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含如下所示的重链互补决定区1至3(CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3)和轻链互补决定区1至3(CDR
‑
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3)：
[0014](i)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13所示的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3；和，氨基酸序列分别如SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向Nectin
‑
4的抗体药物偶联物或其盐，其包含与药物共价连接的抗Nectin
‑
4的抗体或其片段；其中，所述抗Nectin
‑
4的抗体或其片段包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含如下所示的重链互补决定区1至3(CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3)和轻链互补决定区1至3(CDR
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L1、CDR
‑
L2和CDR
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L3)：(i)氨基酸序列分别如SEQ ID NO 11:、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13所示的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3；和，氨基酸序列分别如SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示的CDR
‑
L1、CDR
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L2和CDR
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L3；(ii)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:13所示的CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
‑
H3；和，氨基酸序列分别如SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示的CDR
‑
L1、CDR
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L2和CDR
‑
L3；(iii)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:13所示的CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
‑
H3；和，氨基酸序列分别如SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示的CDR
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L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3。2.根据权利要求1所述的抗体药物偶联物或其盐，其特征在于，所述抗体药物偶联物或其盐具有分子式Ab
‑
[L
‑
CTD]m，其中Ab表示所述抗Nectin
‑
4的抗体或其片段，L表示接头，CTD表示药物，m表示相对于每一分子Ab的药物平均连接数；优选地，CTD为细胞毒药物，优选地，CTD为选自以下的一种或多种：微管抑制剂类MMAE、DM1、DM4、Tublysin、鹅膏蕈碱、卡奇霉素、艾日布林及所述药物的衍生物；拓扑异构酶抑制剂类SN38、依喜替康及所述药物的衍生物；DNA结合剂PBD、多柔比星及所述药物的衍生物；优选地，m为1.0
‑
5.0，优选为3.0
‑
4.2，更优选为3.5
‑
4.5，进一步优选为3.8
‑
4.2，又优选为3.9
‑
4.1，特别优选为4.0。3.根据权利要求1或2所述的抗体药物偶联物或其盐，其特征在于，所述抗Nectin
‑
4的抗体或其片段的重链和轻链分别包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或其变体，所述轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或其变体；优选地，所述抗Nectin
‑
4的抗体或其片段的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)分别包含：(i)如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其变体；和，如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或其变体；(ii)如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或其变体；和，如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或其变体；(iii)如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或其变体；和，如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或其变体；或(iv)如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或其变体；和，如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或其变体。4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体药物偶联物或其盐，其特征在于，所述抗Nectin
‑
4的抗体或其片段为针对Nectin
‑
4的单克隆抗体、单链抗体、双功能抗体、单域抗
体、纳米抗体、完全或部分人源化的抗体或者嵌合抗体等任意形式；或者，所述抗体或其片段为针对Nectin
‑
4的半抗体或半抗体的抗原结合片段，例如scFv、BsFv、dsFv、(dsFv)2、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv；优选地，所述Nectin
‑
4为哺乳动物Nectin
‑
4，优选灵长类动物Nectin
‑
4，更优选人Nectin
‑
4。5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体药物偶联物或其盐，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体，优选为鼠源、嵌合或人源化的单克隆抗体；更优选地，所述单克隆抗体的重链恒定区为IgG1或IgG4亚型，轻链恒定区为κ型；或者，所述抗体为免疫球蛋白，具体为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM，例如IgA、IgD、IgE、IgG或IgM的人亚型，更优选为人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型；优选地，所述抗Nectin
‑
4的抗体或其片段包含重链恒定区，所述重链恒定区包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或其变体；或者，所述抗Nectin
‑
4的抗体或其片段包含轻链恒定区，所述轻链恒定区包含如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或其变体。6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体药物偶联物或其盐，其特征在于，所述抗体药物偶联物或其盐具有如下式Ia和/或Ib所示的结构：和/或其中：Ab是所述抗Nectin
‑
4的抗体或其片段；Ar
’
为选自如下的任一个：取代或未取代的C6
‑
C10亚芳基和取代或未取代的5
‑
12元亚杂芳基，其中所述取代指基团上的氢原子被一个或多个取代基所取代，所述取代基选自如下的任一个：卤素(F、Cl、Br或I)、卤代烷基(例如卤代C1
‑
C6烷基、优选卤代C1
‑
C4烷基，例如三氟甲基)和烷氧基(例如C1
‑
C6烷氧基、优选C1
‑
C4烷氧基，例如甲氧基)；L1为连接于Ar
’
基团上的
‑
O(CH2CH2O)n
‑
，其中n选自1
‑
24中任一整数，优选为1
‑
10、更优选3
‑
5中的任意整数；L2为酶切片段，如二肽或三肽或四肽或其与自释放结构片段的组合(即2
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4个氨基酸组成的多肽片段或其与自释放结构片段的组合)，如Val
‑
Ala、Val
‑
Ala
‑
PAB、Val
‑
Cit、Val
‑
Cit
‑
PAB、Phe
‑
Lys
‑
PAB、Ala
‑
Ala
‑
Ala、Gly
‑
Gly
‑
Phe
‑
Gly(GGFG)、MAC glucuronide p...

【专利技术属性】
技术研发人员：周伟，谭小钉，刘大涛，
申请(专利权)人：迈威上海生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：