用于在对象中调节SMN2剪接的组合物和方法技术

本发明专利技术公开了用于调节对象中的SMN2mRNA剪接的化合物、组合物和方法。还提供了所公开的化合物和组合物用于生产药物的用途，所述药物用于治疗疾病和病症，包括脊髓性肌萎缩症。包括脊髓性肌萎缩症。

【技术实现步骤摘要】
94/26887公开了组合物和方法，其使用不激活RNAse H的反义寡核苷酸，来对抗包含突变的mRNA前体分子的异常剪接。
[0007]近端型脊髓性肌萎缩症(SMA)是一种遗传性的、神经退行性病变，其特征为脊髓运动神经元的丧失。SMA是一种发病较早的常染色体隐性遗传病，是目前导致婴儿死亡的首要原因。SMA在不同患者中的严重性不同，因此将其分成三类。I型SMA是最严重的形式，患者在出生时或出生后6个月内发病，一般在2岁以内死亡。患有I型SMA的儿童无法坐下或行走。II型SMA是中间形式，患者能够坐下，但不能站立或行走。患者患有III型SMA的，即该疾病的慢性形式，一般在出生后18个月后发展成SMA(Lefebvre et al.,Hum.Mol.Genet.,1998,7,1531
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1536)。
[0008]导致SMA的分子机制是运动神经元存活基因1(SMN1)的两个拷贝均缺失，SMN1也称为SMN端粒，这种蛋白是一种多蛋白复合物的一部分，该多蛋白复合物被认为参与小核糖核酸蛋白snRNP生物合成和循环。在染色体5q13的复制区存在一个基本相同的基因SMN2，也称为SMN着丝粒，其调节疾病的严重程度。正常SMN1基因的表达仅导致运动神经元存活基因(SMN)蛋白的表达。尽管SMN1和SMN2都能够编码相同的蛋白，但SMN2在其外显子7的+6位含有翻译沉默突变，会导致在SMN2转录物中外显子7的包含不足。这样，SMN2主要形成为被截短的版本，缺乏外显子7，其不稳定且无活性(Cartegni and Krainer,Nat.Genet.,2002,30,377
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384)。SMN2基因表达产生约10
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20％的SMN蛋白和80
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90％不稳定/非功能性的SMNΔ7蛋白。SMN蛋白在剪接体装配过程中的作用已被验证，且其还可以介导mRNA在神经元的轴突和神经末梢间的转运。
[0009]反义技术可有效调节一种或多种特定基因产物，包括可变剪接产物的表达，且其在多种治疗、诊断和研究应用上具有独特的作用。反义技术的原理为，反义化合物可与靶核酸杂交，通过多种反义机制之一调节基因表达的活性，例如转录、剪接或翻译。反义化合物的序列特异性使其成为一种极具吸引力的工具，用于靶点验证和基因功能化，以及作为治疗手段用于选择性调节疾病相关基因的表达。
[0010]本领域已知某些与SMN2互补的反义化合物，参见例如，WO 2007/002390；US 61/168,885；Hua et al.,American J.of Human Genetics(April 2008)82,1
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15；Singh et al.,RNA Bio.6:3,1
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10(2009)。与本领域已知的此类化合物和方法相比，本文所公开的某些反义化合物和方法具有所需的特性。已有专利描述了被设计用于调节SMN2剪接的嵌合肽核酸分子(WO 02/38738；Cartegni and Krainer,Nat.Struct.Biol.,2003,10,120
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125)。
[0011]专利技术概述
[0012]在某些实施方式中，本专利技术提供了方法，其包括向对象给药包含反义寡核苷酸的反义化合物，该反义化合物互补于人SMN2 mRNA前体的编码核酸的内含子7，其中反义化合物给药至脑脊液(CSF)中。在某些实施方式中，所述给药是至鞘内空隙。在某些实施方式中，所述给药是至脑内的脑脊液。在某些实施方式中，所述给药包含推注注射。在某些实施方式中，所述给药包含利用递送泵输注。
[0013]在某些实施方式中，所述反义化合物的给药剂量为0.01至10毫克反义化合物每千克对象体重。在某些实施方式中，剂量为0.01至10毫克反义化合物每千克对象体重。在某些实施方式中，剂量为0.01至5毫克反义化合物每千克对象体重。在某些实施方式中，剂量为0.05至1毫克反义化合物每千克对象体重。在某些实施方式中，剂量为0.01至0.5毫克反义
化合物每千克对象体重。在某些实施方式中，剂量为0.05至0.5毫克反义化合物每千克对象体重。
[0014]在某些实施方式中，每日给药所述剂量。在某些实施方式中，每周给药所述剂量。在某些实施方式中，连续给药反义化合物，且所述剂量是每日给药的剂量。在某些实施方式中，该方法包含在诱导期给药至少一个诱导剂量以及在维持期给药至少一个维持剂量。在某些实施方式中，诱导剂量为0.05至5.0毫克反义化合物每千克对象体重。在某些实施方式中，维持剂量为0.01至1.0毫克反义化合物每千克对象体重。在某些实施方式中，诱导期的持续时间为至少1周。在某些实施方式中，维持期的持续时间为至少1周。在某些实施方式中，各个诱导剂量和各个维持剂量均包含单次注射。在某些实施方式中，各个诱导剂量和各个维持剂量均独立地包含两次或更多注射。在某些实施方式中，在至少1周的治疗期内，给药反义化合物至少两次。在某些实施方式中，治疗期为至少一个月。在某些实施方式中，治疗期为至少2个月。在某些实施方式中，治疗期为至少4个月。在某些实施方式中，通过一次或更多推注注射给药诱导剂量，以及通过输液泵给药维持剂量。
[0015]在某些实施方式中，该方法包含评估反义化合物的耐受性和/或有效性。在某些实施方式中，当出现反义化合物给药不耐受的指征时，降低反义化合物的给药剂量或给药频率。在某些实施方式中，当出现反义化合物给药有效的指征后，维持或降低反义化合物的给药剂量或给药频率。在某些实施方式中，当出现反义化合物给药无效的指征后，增加反义化合物的给药剂量。在某些实施方式中，当出现反义化合物给药有效的指征后，降低反义化合物的给药频率。在某些实施方式中，当出现反义化合物给药无效的指征后，增加反义化合物的给药频率。
[0016]在某些实施方式中，该方法包括将反义化合物与至少一种其他疗法联合给药。在某些实施方式中，反义化合物与至少一种其他疗法同时联合给药。在某些实施方式中，在至少一种其他疗法给药前，给药反义化合物。在某些实施方式中，在至少一种其他疗法给药之后，给药反义化合物。在某些实施方式中，所述至少一种其他疗法包括，给药丙戊酸、利鲁唑、羟基脲和丁酸盐中的一种或更多种。在某些实施方式中，所述至少一种其他疗法包括给药曲古霉素
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A。在某些实施方式中，至少一种其他疗法包括给药干细胞。在某些实施方式中，至少一种其他疗法为基因治疗。在某些实施方式中，基因治疗给药至CSF以及反义化合物给药至全身。在某些实施方式中，基因治疗给药至CSF，以及反义化合物给药至全身和CSF。在某些实施方式中，本专利技术提供了治疗方案，其中初始时给药反义化合物至CSF和全身，随后给药基因治疗至CSF，并将反义化合物给药至全身。在某些此类实施方式中，在初始治疗时对象为婴儿。在某些此类实施方式中，对象为2岁以下。在某些实施方式中，在对象的年龄足以接受基因治疗以前，将反义化合物给药至对象的中枢神经系统。在某些此类实施方式中，反义化合物自始自终全身给药。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种方法，包括向对象给药包含反义寡核苷酸的反义化合物，该反义寡核苷酸互补于人SMN2 mRNA前体的编码核酸的内含子7，其中所述反义化合物给药至脑脊液。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述给药是至鞘内空隙。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述给药是至脑内的脑脊液。4.根据权利要求1
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3任意一项所述的方法，其中所述给药包含推注注射。5.根据权利要求1
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3任意一项所述的方法，其中所述给药包含利用递送泵输注。6.根据权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：渤健马萨诸塞州股份有限公司，
类型：发明
国别省市：