一种实时荧光定量RT-PCR检测肠道病毒方法技术

本发明专利技术涉及生物化学技术领域，具体涉及一种实时荧光定量RT

【技术实现步骤摘要】
一种实时荧光定量RT
‑
PCR检测肠道病毒方法


[0001]本专利技术涉及生物化学
，尤其涉及一种实时荧光定量RT
‑
PCR检测肠道病毒方法。

技术介绍

[0002]肠道病毒可导致高度传染性的肠道疾病，以厌食、呕吐、腹泻和脱水为主要特征。
[0003]对于肠道病毒的检测已有许多种方法，包括ELISA，RT
‑
PCR及荧光定量RT
‑
PCR等，但不同的方法敏感性存在差异。在上述方法中，相比于其他方法，荧光定量RT
‑
PCR作为一项新型的RT
‑
PCR检测技术，具有灵敏、高效、可定量、高通量、无污染、操作简便等优点，在病原学检测中得到广泛应用。
[0004]采用上述方式，通过荧光定量RT
‑
PCR对测得的肠道病毒的荧光信号中会存在荧光波动的现象，从而导致得到的扩增数据不准确，使得PCR扩增曲线不平滑，影响肠道病毒检测结果的精确度。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种实时荧光定量RT
‑
PCR检测肠道病毒方法，旨在解决现有的检测肠道病毒方法所检测出来的结果的精确度较低的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了一种实时荧光定量RT
‑
PCR检测肠道病毒方法，包括以下步骤：
[0007]获取肠道病毒检测样品；
[0008]对所述肠道病毒检测样品进行预处理，得到检测基因；/>[0009]使用实时荧光定量RT
‑
PCR试剂盒对所述检测基因进行扩增，得到扩增反应体系溶液；
[0010]使用荧光定量PCR仪器对所述扩增反应体系溶液进行荧光检测，得到荧光信号；
[0011]构建函数模型提取所述荧光信号的扩增循环数，得到肠道病毒检测结果。
[0012]其中，所述对所述肠道病毒检测样品进行预处理，得到检测基因的具体方式为：
[0013]将所述肠道病毒检测样品放入离心管内，并向所述离心管加入缓冲溶液；
[0014]将所述离心管放入离心机内进行震荡后离心；
[0015]取所述离心管内的上清进行转录，得到检测基因。
[0016]其中，所述使用实时荧光定量RT
‑
PCR试剂盒对所述检测基因进行扩增，得到扩增反应体系溶液的具体方式为：
[0017]将实时荧光定量RT
‑
PCR试剂盒中的引物和探针进行稀释，得到稀释溶液；
[0018]将所述稀释溶液、所述检测基因和扩增试剂混合，得到扩增反应体系溶液。
[0019]其中，所述使用荧光定量PCR仪器对所述扩增反应体系溶液进行荧光检测，得到荧光信号的具体方式为：
[0020]将所述扩增反应体系溶液置于荧光定量PCR仪器中42℃预热5min后开始95℃预变
性1s和28℃退火延伸45s，得到荧光信号。
[0021]其中，所述预变性和所述退火延伸共40个循环。
[0022]其中，所述构建函数模型提取所述荧光信号的扩增循环数，得到肠道病毒检测结果的具体方式为：
[0023]对所述荧光信号的数据点进行排序，得到输入数据；
[0024]构建函数模型，并设置所述函数模型的模型参数；
[0025]将所述输入数据输入所述函数模型内进行扩增循环数提取，得到肠道病毒检测结果。
[0026]本专利技术的一种实时荧光定量RT
‑
PCR检测肠道病毒方法，通过获取肠道病毒检测样品；对所述肠道病毒检测样品进行预处理，得到检测基因；使用实时荧光定量RT
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PCR试剂盒对所述检测基因进行扩增，得到扩增反应体系溶液；使用荧光定量PCR仪器对所述扩增反应体系溶液进行荧光检测，得到荧光信号；构建函数模型提取所述荧光信号的扩增循环数，得到肠道病毒检测结果，通过构建的所述函数模型可避免所述荧光信号中的荧光波动，从而增加了最终得到的所述肠道病毒检测结果的精确度，解决了现有的检测肠道病毒方法所检测出来的结果的精确度较低的问题。
附图说明
[0027]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0028]图1是本专利技术提供的一种实时荧光定量RT
‑
PCR检测肠道病毒方法的流程图。
[0029]图2是对所述肠道病毒检测样品进行预处理，得到检测基因的流程图。
[0030]图3是使用实时荧光定量RT
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PCR试剂盒对所述检测基因进行扩增，得到扩增反应体系溶液的流程图。
[0031]图4是构建函数模型提取所述荧光信号的扩增循环数，得到肠道病毒检测结果的流程图。
具体实施方式
[0032]下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。
[0033]请参阅图1至图4，本专利技术提供一种实时荧光定量RT
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PCR检测肠道病毒方法，包括以下步骤：
[0034]S1获取肠道病毒检测样品；
[0035]具体的，在步骤S1和S2之间，所述方法还包括：
[0036]对容器进行杀菌消毒，使用消毒后的所述容器对所述肠道病毒检测样品进行密封保存。
[0037]S2对所述肠道病毒检测样品进行预处理，得到检测基因；
[0038]具体方式为：
[0039]S21将所述肠道病毒检测样品放入离心管内，并向所述离心管加入缓冲溶液；
[0040]具体的，通过吸头取样的方式将所述容器内的所述肠道病毒检测样品吸出后放入杀菌消毒后的所述离心管内，避免所述肠道病毒检测样品在转运的过程中受到污染，从而对后续的肠道病毒检测结果的精确度造成影响。加入的所述缓冲溶液为1mLpH值为7.2的PBS溶液。
[0041]S22将所述离心管放入离心机内进行震荡后离心；
[0042]具体的，所述离心机对所述离心管内的溶液反复震荡1min，然后在离心力为5000
×
g的条件下离心10min，取上清液备用。
[0043]S23取所述离心管内的上清进行转录，得到检测基因。
[0044]S3使用实时荧光定量RT
‑
PCR试剂盒对所述检测基因进行扩增，得到扩增反应体系溶液；
[0045]具体方式为：
[0046]S31将实时荧光定量RT
‑
PCR试剂盒中的引物和探针进行稀释，得到稀释溶液；
[0047]S32将所述稀释溶液、所述检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种实时荧光定量RT
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PCR检测肠道病毒方法，其特征在于，包括以下步骤：获取肠道病毒检测样品；对所述肠道病毒检测样品进行预处理，得到检测基因；使用实时荧光定量RT
‑
PCR试剂盒对所述检测基因进行扩增，得到扩增反应体系溶液；使用荧光定量PCR仪器对所述扩增反应体系溶液进行荧光检测，得到荧光信号；构建函数模型提取所述荧光信号的扩增循环数，得到肠道病毒检测结果。2.如权利要求1所述的实时荧光定量RT
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PCR检测肠道病毒方法，其特征在于，所述对所述肠道病毒检测样品进行预处理，得到检测基因的具体方式为：将所述肠道病毒检测样品放入离心管内，并向所述离心管加入缓冲溶液；将所述离心管放入离心机内进行震荡后离心；取所述离心管内的上清进行转录，得到检测基因。3.如权利要求2所述的实时荧光定量RT
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PCR检测肠道病毒方法，其特征在于，所述使用实时荧光定量RT
‑
PCR试剂盒对所述检测基因进行扩增，得到扩增反应体系溶液的具体方式为：将实时荧光...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建平，周涛，高智勇，何奕辉，张爱国，
申请(专利权)人：南京帝基生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：