一种化学-酶法制备去氢表雄酮的方法技术

本发明专利技术提供了一种化学

【技术实现步骤摘要】
一种化学
‑
酶法制备去氢表雄酮的方法


[0001]本专利技术涉及药物化合物
，尤其涉及一种化学
‑
酶法制备去氢表雄酮的方法。

技术介绍

[0002]去氢表雄酮(DHEA)是合成米非司酮、屈螺酮、炔诺酮、醋酸阿比特龙、醋酸乌利司他等众多甾体药物的一个关键中间体。去氢表雄酮也是人体血液循环中最为丰富的甾体物质，是人体内40多种激素合成所必需的前提物质，在人体内的含量会随着年龄的变化而变化。目前，去氢表雄酮获得的方法主要有化学合成、生物合成和从天然产物中提取。
[0003]化学法合成DHEA，有如下路线：
[0004][0005]该方法以4
‑
AD为原料，用乙酰氯和醋酐为3位烯酯化试剂、用高效催化剂吡啶盐酸盐催化乙二醇缩酮保护17位羰基、用硼氢化钾还原，稀盐酸水解去17位保护制备得到DHEA，总收率为70％，产品纯度大于99.0％。该工艺为纯化学方法，工艺较为复杂，需要采用昂贵的催化试剂，产物收率不高。
[0006]生物法合成DHEA，有如下路线：
[0007][0008]该方法是利用微生物发酵生产DHEA，原料是植物甾醇，先将3位羟基保护，再利用
微生物发酵脱去17位饱和支链，最后经过水解得到DHEA。生物合成具有原料来源广，反应步骤简短等优点，但是反应液成分复杂，后处理分离繁琐，产物的收率降低。
[0009]因此，如何得到一种工艺简单、高收率、高纯度的DHEA的合成方法是目前需要解决的问题。

技术实现思路

[0010]本专利技术的目的在于提供一种化学
‑
酶法制备去氢表雄酮的方法，以解决目前合成去氢表雄酮方法复杂、产物收率低的技术问题。
[0011]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0012]本专利技术提供了一种化学
‑
酶法制备去氢表雄酮的方法，包括以下步骤：
[0013]1)在保护气氛下，将水、冰醋酸和D
‑
抗坏血酸钠混合后顺次加入叔丁醇、强碱催化剂和4
‑
雄烯二酮进行反应，得到5
‑
雄烯二酮；
[0014]2)将叔丁醇与磷酸盐缓冲液混合后得到磷酸盐缓冲体系；
[0015]3)向磷酸盐缓冲体系中投入5
‑
雄烯二酮、氯化镁、酮还原酶、辅酶和辅酶再生系统进行酶促反应，即得到去氢表雄酮。
[0016]进一步的，所述水、冰醋酸和D
‑
抗坏血酸钠的质量比为10～15：0.2～0.5：0.3～0.6。
[0017]进一步的，所述强碱催化剂包含叔丁醇钾、叔丁醇钠、乙醇钠和丁基锂中的一种或几种。
[0018]进一步的，所述D
‑
抗坏血酸钠、叔丁醇、强碱催化剂和4
‑
雄烯二酮的质量比为0.3～0.6：2～5：1～3：1。
[0019]进一步的，步骤1)中，所述保护气氛包含氮气和/或氩气；所述反应的温度为25～40℃，反应的时间为1.5～3h。
[0020]进一步的，所述磷酸盐缓冲液包含质量比为1.0～2.0：0.1～0.2：0.1～0.4：3.0～5.0的一水葡萄糖、十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠和水；所述磷酸盐缓冲体系的pH为6.8～7.8；
[0021]步骤2)中，所述叔丁醇的含量是磷酸盐缓冲液质量的0.4～1.0倍。
[0022]进一步的，所述酮还原酶包含KRED
‑
101、KRED
‑
119和KRED
‑
130中的一种或几种。
[0023]进一步的，所述辅酶包含NAD和NADH，所述NAD和NADH的质量比为1～3：1～3。
[0024]进一步的，所述辅酶再生系统包含质量比为0.5～0.7：0.001～0.003的谷氨酸和谷氨酸脱氢酶；所述5
‑
雄烯二酮、氯化镁、酮还原酶、辅酶和辅酶再生系统的质量比为1：0.2～0.3：0.003～0.005：0.01～0.015：0.4～0.8。
[0025]进一步的，所述酶促反应的温度为35～45℃，酶促反应的时间为3～5h。
[0026]本专利技术的有益效果：
[0027]本专利技术通过使用D
‑
抗坏血酸钠控制体系氧气含量，避免中间产物5
‑
AD与氧气发生反应，使5
‑
AD更稳定的存在于反应体系中；通过采用特定比例的酮还原酶、辅酶和辅酶再生系统能够使5
‑
AD更稳定、快速的转化为DHEA。
[0028]本专利技术的工艺路线简单，相比于化学法合成DHEA路线更短，需要的反应条件更温和，相比于化学法合成DHEA的收率仅有70％，而本专利技术的工艺方法得到的总产物收率高达
95％，产物纯度在99％以上，工业化应用价值更高。
具体实施方式
[0029]本专利技术提供了一种化学
‑
酶法制备去氢表雄酮的方法，包括以下步骤：
[0030]1)在保护气氛下，将水、冰醋酸和D
‑
抗坏血酸钠混合后顺次加入叔丁醇、强碱催化剂和4
‑
雄烯二酮进行反应，得到5
‑
雄烯二酮；
[0031]2)将叔丁醇与磷酸盐缓冲液混合后得到磷酸盐缓冲体系；
[0032]3)向磷酸盐缓冲体系中投入5
‑
雄烯二酮、氯化镁、酮还原酶、辅酶和辅酶再生系统进行酶促反应，即得到去氢表雄酮。
[0033]在本专利技术中，所述水、冰醋酸和D
‑
抗坏血酸钠的质量比为10～15：0.2～0.5：0.3～0.6，优选为11～14：0.3～0.4：0.35～0.55，进一步优选为12～13：0.35～0.38：0.44～0.52。
[0034]在本专利技术中，所述强碱催化剂包含叔丁醇钾、叔丁醇钠、乙醇钠和丁基锂中的一种或几种，优选为叔丁醇钾和/或叔丁醇钠。
[0035]在本专利技术中，所述D
‑
抗坏血酸钠、叔丁醇、强碱催化剂和4
‑
雄烯二酮的质量比为0.3～0.6：2～5：1～3：1，优选为0.35～0.55：3～4：1.5～2.5：1，进一步优选为0.44～0.52：3.5～3.8：1.8～2.0：1。
[0036]在本专利技术中，步骤1)中，所述保护气氛包含氮气和/或氩气，优选为氮气。
[0037]在本专利技术中，步骤1)中，所述反应的温度为25～40℃，反应的时间为1.5～3h；优选的，反应的温度为30～38℃，反应的时间为2～2.5h；进一步优选的，反应的温度为32～35℃，反应的时间为2.5h。
[0038]在本专利技术中，所述磷酸盐缓冲液包含质量比为1.0～2.0：0.1～0.2：0.1～0.4：3.0～5.0的一水葡萄糖、十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠和水，优选为1.5～1.9：0.14～0.18：0.2～0.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化学
‑
酶法制备去氢表雄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)在保护气氛下，将水、冰醋酸和D
‑
抗坏血酸钠混合后顺次加入叔丁醇、强碱催化剂和4
‑
雄烯二酮进行反应，得到5
‑
雄烯二酮；2)将叔丁醇与磷酸盐缓冲液混合后得到磷酸盐缓冲体系；3)向磷酸盐缓冲体系中投入5
‑
雄烯二酮、氯化镁、酮还原酶、辅酶和辅酶再生系统进行酶促反应，即得到去氢表雄酮。2.根据权利要求1所述的化学
‑
酶法制备去氢表雄酮的方法，其特征在于，所述水、冰醋酸和D
‑
抗坏血酸钠的质量比为10～15：0.2～0.5：0.3～0.6。3.根据权利要求1或2所述的化学
‑
酶法制备去氢表雄酮的方法，其特征在于，所述强碱催化剂包含叔丁醇钾、叔丁醇钠、乙醇钠和丁基锂中的一种或几种。4.根据权利要求3所述的化学
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酶法制备去氢表雄酮的方法，其特征在于，所述D
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抗坏血酸钠、叔丁醇、强碱催化剂和4
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雄烯二酮的质量比为0.3～0.6：2～5：1～3：1。5.根据权利要求1或2或4所述的化学
‑
酶法制备去氢表雄酮的方法，其特征在于，步骤1)中，所述保护气氛包含氮气和/或氩气；所述反应的温度为25～40℃，反应的时间为1.5～3h。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：系祖斌，艾文，陶琳，郭明明，杨兵，马雷，
申请(专利权)人：湖北共同药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：