一种制备11α,17α-羟基黄体酮的方法技术

本发明专利技术提供了一种制备11α,17α

【技术实现步骤摘要】
一种制备11
α
,17
α
‑
羟基黄体酮的方法


[0001]本专利技术涉及生物合成
，尤其涉及一种制备11α,17α
‑
羟基黄体酮的方法。

技术介绍

[0002]11α,17α
‑
羟基黄体酮是合成甾体类药物醋酸泼尼松龙的重要中间体。11α,17α
‑
羟基黄体酮的制备是以17α
‑
羟基黄体酮为底物，通过霉菌发酵获得。但由于17α
‑
羟基黄体酮极低的水溶性，霉菌摄取困难，导致霉菌发酵生产11α,17α
‑
羟基黄体酮的效率较低。
[0003]目前，主要是通过在霉菌发酵液中加入助溶剂的方式，增加17α
‑
羟基黄体酮的溶解性，提高生产效率。但是添加助溶剂不可避免的引入外源杂质，且助溶剂的成分可能对霉菌细胞或羟基化酶产生抑制作用，从而降低霉菌的生产能力，影响11α,17α
‑
羟基黄体酮的生产效率。因此，有必要提供一种新的制备11α,17α
‑
羟基黄体酮的方法，提高霉菌的生产11α,17α
‑
羟基黄体酮的能力。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种制备11α,17α
‑
羟基黄体酮的方法，提高赭曲霉生产11α,17α
‑
羟基黄体酮的能力。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种制备11α,17α
‑
羟基黄体酮的方法，包括如下步骤：
[0007](1)将赭曲霉孢子悬液接种于种子培养基中，在26～28℃下培养20～30h，得到赭曲霉种子液；
[0008](2)将赭曲霉种子液按照8～12v/v％的接种量接种于发酵培养基中，在28～30℃下培养，培养期间每隔3～5h进行一次超声处理，培养16～20h后，得到发酵液；
[0009](3)在所述发酵液中加入17α
‑
羟基黄体酮，继续发酵60～80h即可。
[0010]优选的，所述种子培养基包括如下浓度的组分：葡萄糖15～25g/L、玉米浆20～30g/L、酵母膏10～30g/L、蛋白胨20～40g/L、NaCl 0.2～0.4mol/L，pH＝6.0～7.0。
[0011]优选的，所述发酵培养基包括如下浓度的组分：葡萄糖20～40g/L、玉米浆20～30g/L、酵母膏10～30g/L、蛋白胨20～40g/L、NaCl 0.5～0.7mol/L，pH＝6.0～7.0。
[0012]优选的，所述超声处理的频率为0.5～1MHz，声强为0.1～1.0W/cm2，时间为5～15min。
[0013]优选的，所述17α
‑
羟基黄体酮加入发酵液后的浓度为40～50g/L。
[0014]本专利技术提供了一种制备11α,17α
‑
羟基黄体酮的方法，本专利技术通过调整赭曲霉所处培养基的渗透压和辅以超声处理改变赭曲霉菌细胞膜的通透性，增加了对17α
‑
羟基黄体酮底物的摄入能力，提高了对17α
‑
羟基黄体酮的转化率，最终提高了11α,17α
‑
羟基黄体酮的生产效率。本专利技术能够将11α,17α
‑
羟基黄体酮底物的浓度提高到50g/L，转化率保持在96％左右。
具体实施方式
[0015]本专利技术提供了一种制备11α,17α
‑
羟基黄体酮的方法，包括如下步骤：
[0016](1)将赭曲霉孢子悬液接种于种子培养基中，在26～28℃下培养20～30h，得到赭曲霉种子液；
[0017](2)将赭曲霉种子液按照8～12v/v％的接种量接种于发酵培养基中，在28～30℃下培养，培养期间每隔3～5h进行一次超声处理，培养16～20h后，得到发酵液；
[0018](3)在所述发酵液中加入17α
‑
羟基黄体酮，继续发酵60～80h即可。
[0019]本专利技术将赭曲霉孢子悬液接种于种子培养基中，在26～28℃下培养20～30h，得到赭曲霉种子液。
[0020]在本专利技术中，所述赭曲霉孢子悬液是将赭曲霉先接种到斜面培养基上培养得到赭曲霉孢子，然后制备的赭曲霉孢子悬液。
[0021]在本专利技术中，所述赭曲霉购自宁波明舟生物科技有限公司，菌种编号为B72170。
[0022]在本专利技术中，所述斜面培养基优选包括如下浓度的组分：马铃薯15～25g/L、葡萄糖15～25g/L、琼脂15～25g/L、自然pH。进一步优选为马铃薯20g/L、葡萄糖20g/L、琼脂20g/L、自然pH。
[0023]在本专利技术中，所述赭曲霉在斜面培养基上培养的温度优选为26～30℃，进一步优选为28℃；所述培养的时间优选为3～7天，进一步优选为5天。
[0024]在本专利技术中，所述赭曲霉孢子悬液用含0.01％吐温
‑
20的灭菌生理盐水配置。
[0025]在本专利技术中，所述赭曲霉孢子悬液的浓度优选为107～108个/mL，进一步优选为108个/mL。
[0026]在本专利技术中，所述赭曲霉孢子悬液接种于种子培养基中的接种量优选为6～10v/v％，进一步优选为8v/v％。
[0027]在本专利技术中，所述种子培养基，优选包括如下浓度的组分：葡萄糖15～25g/L、玉米浆20～30g/L、酵母膏10～30g/L、蛋白胨20～40g/L、NaCl0.2～0.4mol/L，pH＝6.0～7.0，进一步优选包括如下浓度的组分：葡萄糖20g/L、玉米浆25g/L、酵母膏20g/L、蛋白胨30g/L、NaCl 0.3mol/L，pH＝7.0。
[0028]在本专利技术中，所述赭曲霉种子液的培养温度进一步优选为27℃，时间进一步优选为25h。
[0029]在本专利技术中，所述赭曲霉种子液培养时的转速优选为150～250r/min，进一步优选为200r/min。
[0030]培养得到赭曲霉种子液后，将赭曲霉种子液按照8～12v/v％的接种量接种于发酵培养基中，在28～30℃下培养，培养期间每隔3～5h进行一次超声处理，培养16～20h后，得到发酵液。
[0031]在本专利技术中，所述赭曲霉种子液的接种量进一步优选为10v/v％。
[0032]在本专利技术中，所述发酵培养基，优选包括如下浓度的组分：葡萄糖20～40g/L、玉米浆20～30g/L、酵母膏10～30g/L、蛋白胨20～40g/L、NaCl0.5～0.7mol/L，pH＝6.0～7.0，进一步优选包括如下浓度的组分：葡萄糖30g/L、玉米浆25g/L、酵母膏20g/L、蛋白胨30g/L、NaCl 0.6mol/L，pH＝6.0。
[0033]在本专利技术中，所述发酵液的培养温度进一步优选为29℃。
[0034]在本专利技术中，所述培养期间本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备11α,17α
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羟基黄体酮的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将赭曲霉孢子悬液接种于种子培养基中，在26～28℃下培养20～30h，得到赭曲霉种子液；(2)将赭曲霉种子液按照8～12v/v％的接种量接种于发酵培养基中，在28～30℃下培养，培养期间每隔3～5h进行一次超声处理，培养16～20h后，得到发酵液；(3)在所述发酵液中加入17α
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羟基黄体酮，继续发酵60～80h即可。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述种子培养基包括如下浓度的组分：葡萄糖15～25g/L、玉米浆20～30g/L、酵母膏10～30g/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶琳，系祖斌，艾文，马雷，杨兵，
申请(专利权)人：湖北共同药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：