微型制导和导航控制(miniGNC)抗体样蛋白及其制备和使用方法技术

一种多特异性抗体样蛋白，其具有包含第一结合单体、CH1结构域、第一铰链、第一CH2结构域和第一CH3结构域的第一单体，以及包含第二结合单体、CL结构域、第二铰链、第二CH2结构域和第二CH3结构域的第二单体，其中第一结合单体和第二结合单体被构建为形成二聚体，其中第一单体和第二单体通过CH1结构域和CL结构域之间的至少一个二硫键以及第一铰链和第二铰链之间的至少一个二硫键共价配对，其中第一单体和第二单体可以任选地包含第一结合结构域(D1)和第二结合结构域(D2)、以及第四结合结构域(D4)和第五结合结构域(D5)，并且其中多特异性抗体样蛋白至少是双特异性的。抗体样蛋白至少是双特异性的。抗体样蛋白至少是双特异性的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】微型制导和导航控制(miniGNC)抗体样蛋白及其制备和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]根据35U.S.C.119(e)，本申请要求2020年3月17日提交的美国临时申请序列号62/991,042的优先权，其全部公开内容通过引用并入本文。


[0003]本申请一般涉及用于癌症免疫疗法的多特异性抗体的
，更具体地涉及制备和使用针对免疫细胞和肿瘤细胞两者的表面分子具有多种结合活性的微型制导和导航控制(miniGNC)抗体。

技术介绍

[0004]治疗性抗体已经成为治疗几种疾病的支柱，包括但不限于癌症、感染和自身免疫。虽然单克隆抗体、单特异性抗体提供了治疗疾病的直接机制，例如，通过抑制或激活特定的信号传导途径，但是多特异性抗体允许探索更复杂的治疗机制。通过靶向多个不同的抗原或单个抗原内的多个表位，可以引发生物应答如细胞共定位和激活，这使得例如T细胞和其他免疫细胞能够重定向到表达特定抗原的肿瘤细胞的位点。这样，双特异性和多特异性抗体已经成为免疫肿瘤学领域的重要平台。
[0005]由于多特异性抗体平台的优点，已经开发了许多这样的框架。一种这样的平台被称为制导和导航控制(GNC)。GNC蛋白包括将多个功能上独立的结合部分连接至能够将效应细胞和靶细胞结合在一起的单个实体中的蛋白(参见申请人的申请WO/2019/005641、WO2019191120和PCT/US20/59230，其全文并入本文)。一般来说，这些平台仅限于至少两种特异性，从而阻碍了对需要结合两种以上抗原的复杂治疗机制的探索。对于具有两种以上特异性的抗体平台，结合域数量的增加一般需要形成通常具有不良物理和生物学特性的大分子。分子量的增加可降低显影性，因为较大和较复杂的分子更可能存在聚集和溶解性问题。此外，与较小尺寸的蛋白质相比，大分子渗入实体瘤的能力可能受到阻碍。因此，需要具有两种以上特异性的多特异性抗体平台，该特异性不明显大于单克隆IgG抗体。

技术实现思路

[0006]以下概述仅是说明性的，并不旨在以任何方式进行限制。除了上述说明性方面、实施例和特征之外，通过参考附图和以下详细描述，其他方面、实施例和特征将变得显而易见。
[0007]本申请提供了具有结合特异性的蛋白质，例如多特异性蛋白质样抗体，包括多特异性抗体，以及这些结合蛋白的片段，包括但不限于scFv结构域、Fab区、Fc结构域、VH、VL、轻链、重链、可变区和互补决定区(CDR)。本申请还提供了制备和使用本文公开的抗体样蛋白的方法。
[0008]在一个方面，本申请提供了多特异性抗体样蛋白。在一个实施方案中，具有N
‑
末端
和C
‑
末端的多特异性抗体样蛋白包括：第一单体，其包括从N
‑
末端到C
‑
末端的第一结合单体、CH1结构域、第一铰链、第一CH2结构域和第一CH3结构域，其中第一单体可以任选地包括连接至N
‑
末端的第一结合结构域(D1)、连接至C
‑
末端的第四结合结构域(D4)、或两者；第二单体，其包括从N
‑
末端到C
‑
末端的第二结合单体、CL结构域、第二铰链、第二CH2结构域和第二CH3结构域，其中第二单体可以任选地包含连接至N
‑
末端的第二结合结构域(D2)、连接至C
‑
末端的第五结合结构域(D5)、或两者，其中第一结合单体和第二结合单体被构建为形成二聚体，其中第一单体和第二单体通过CH1结构域和CL结构域之间的至少一个二硫键以及第一铰链和第二铰链之间的至少一个二硫键共价配对，并且其中多特异性抗体样蛋白是至少双特异性的。
[0009]在一个实施方案中，多特异性抗体样蛋白可以是三特异性的、四特异性的或五特异性的。在一个实施方案中，多特异性抗体样蛋白可以是单克隆抗体。在一个实施方案中，多特异性抗体样蛋白可以是纯化的单克隆抗体。在一个实施方案中，多特异性抗体样蛋白可以是人源化抗体。
[0010]在一个实施方案中，多特异性抗体样蛋白还可以包含第一CH3结构域和第二CH3结构域之间的二硫键。
[0011]在一个实施方案中，多特异性抗体样蛋白还可以包含第一铰链和第二铰链之间的第二二硫键。
[0012]在一个实施方案中，在各种结构域之间使用连接接头。在一个实施方案中，连接接头可包含(G
x
S
y
)
n
接头，其中n、x和y各自独立地为1至10的整数。在一个实施方案中，D1、D2、D4或D5通过接头连接至N
‑
或C
‑
末端。在一个实施方案中，接头可以包含(G
x
S
y
)
n
接头。n、x和y各自独立地可以为1至10的整数。在一个实施方案中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。在一个实施方案中，x为1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。在一个实施方案中，y为1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。
[0013]在一个实施方案中，第一CH3结构域被构建为形成孔(hole)结构，其中第二CH3结构域被构建为形成旋钮(knob)结构，并且其中第一CH2和CH3结构域以及第二CH2和CH3结构域被构建为异源二聚化以形成互补Fc结构域。
[0014]在一个实施方案中，第一CH3结构域可以在T366S、L368A或Y407V处包含至少一个“孔”突变，并且第二CH3结构域可以在T366W处包含“旋钮”突变。
[0015]在一个实施方案中，Fc结构域可包含H435R/Y436F处的突变。
[0016]在一个实施方案中，Fc结构域被工程化以消除选自ADCC、ADCP或CDC的效应细胞功能。
[0017]在一个实施方案中，Fc结构域可以在L234A、L235A、G237A、K322A(Eu编号)处包含至少一个突变。在一个实施方案中，Fc区包含L234A/L235A/G237A/K322A处的突变。在一个实施方案中，Fc区包含L234A/L235A/K322A(Eu编号)处的突变。在一个实施方案中，Fc结构域包含无效突变。在一个实施方案中，IgG4 Fc结构域包含突变S228P(Eu编号)。在一个实施方案中，IgG4 Fc结构域包含突变S228P/F234A/L234A(Eu编号)。
[0018]在一个实施方案中，重链恒定序列可衍生自IgG1或IgG4。
[0019]在一个实施方案中，Fc结构域可包括与SEQ ID NO.313或314具有至少50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％的同一性的氨基酸序列。
[0020]在一个实施方案中，第一结合单体可包含VH结构域，第二结合单体可包含VL结构域，并且VH、CH1、VL、CL结构域形成Fab区作为第三结合结构域(D3)。在一个实施方案中，Fab区可包括VH本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种具有N
‑
末端和C
‑
末端的多特异性抗体样蛋白，其包含：第一单体，其从N
‑
末端至C
‑
末端包含第一结合单体、CH1结构域、第一铰链、第一CH2结构域和第一CH3结构域，其中所述第一单体任选地包含连接至N
‑
末端的第一结合结构域(D1)、连接至C
‑
末端的第四结合结构域(D4)、或两者；第二单体，其从N
‑
末端至C
‑
末端包含第二结合单体、CL结构域、第二铰链、第二CH2结构域和第二CH3结构域，其中所述第二单体任选地包含连接至N
‑
末端的第二结合结构域(D2)、连接至C
‑
末端的第五结合结构域(D5)、或两者；其中所述第一结合单体和第二结合单体被构建为形成二聚体，其中所述第一单体和所述第二单体通过所述CH1结构域和所述CL结构域之间的至少一个二硫键以及所述第一铰链和所述第二铰链之间的至少一个二硫键共价配对，以及其中所述多特异性抗体样蛋白是至少双特异性的。2.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述第一结合单体包含VH结构域，第二结合单体包含VL结构域，并且其中所述VH、CH1、VL、CL结构域形成Fab区作为第三结合结构域(D3)。3.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述第一结合单体和所述第二结合单体形成NKG2D受体作为第三结合结构域(D3)。4.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述第一CH3结构域被构建成形成孔结构，其中所述第二CH3结构域被构建成形成旋钮结构，并且其中所述第一CH2和CH3结构域以及所述第二CH2和CH3结构域被构建成异源二聚化以形成互补Fc结构域。5.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述D1、D2、D4和D5独立地为scFv结构域、VHH结构域、受体或配体。6.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述D1、D2、D3、D4和D5各自独立地具有针对选自EGFR、HER2、HER3、EGFRvIII、ROR1、CD3、CD28、CEA、LMP1、LMP2A、间皮素、PSMA、EpCAM、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、gpA33、GD2、TROP2、NKG2D、NKG2D配体、BCMA、CD19、CD20、CD33、CD123、CD22、CD30、PD
‑
L1、PD1、OX40、4
‑
1BB、GITR、TIGIT、TIM
‑
3、LAG
‑
3、CTLA4、CD40、CD40L、VISTA、ICOS、BTLA、LIGHT、HVEM、CSF1R、CD73、CD39、CLDN18.2、DLL3、HLA
‑
G、FcRH5、GPRC5D、LIV
‑
1、MUC1、CD138、CD70、CD16、uPAR、Siglec
‑
15、CD47、CD38、NKp46、PD
‑
L2、CD160、LOX
‑
1、SIRPα、CD27的抗原具有结合特异性，并且其中所述Fc结构域包含人IgG Fc结构域。7.根据权利要求1所述的多特异性抗体样蛋白，其中所述D1对CD3、CD20、CEA、HER2、EGFR或NKG2D配体具有结合特异...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱义，苏米里，
申请(专利权)人：成都百利多特生物药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：