包含程序性细胞死亡配体1蛋白的融合蛋白及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种包含程序性细胞死亡配体1(PD

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含程序性细胞死亡配体1蛋白的融合蛋白及其用途


[0001]本专利技术涉及一种包含程序性细胞死亡配体1(PD
‑
L1)蛋白及修饰免疫球蛋白的Fc区域的融合蛋白及其用途。

技术介绍

[0002]人程序性细胞死亡配体1(PD
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L1，programmed cell death
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ligand 1)作为程序性死亡受体1(PD
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1，programmed death
‑
1)的配体，是在如T淋巴细胞、B淋巴细胞、树突状细胞(Dendritic cell)或巨噬细胞的造血细胞和如角化细胞、胰岛细胞、肝细胞等的非
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造血细胞中表达的1型跨膜蛋白。另一方面，为了使T细胞活性化，除T细胞受体(receptor)和抗原的第一信号刺激之外，同时需要第二信号刺激(协同刺激(co
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stimulation))。在此情况下，若没有两个信号中的任何一个信号，T细胞处于非活性化(anergy)状态。程序性死亡受体1是调节T细胞的第二信号活性的第二信号刺激因子(免疫检查点(immune check point)或免疫调节剂(immune modulator))，可通过与如活性化的T细胞(CD8和/或CD4)或树突状细胞的在细胞表面表达的程序性细胞死亡配体1或B7.1(CD80)等结合，起到抑制T细胞的增殖、减少细胞因子(cytokine)的表达等的抑制T细胞的功能的作用。
[0003]已知程序性死亡受体1：程序性细胞死亡配体1之间的结合诱导调节T细胞的活性(Immunol Rev.2010Jul；236:219
‑
42)，当利用这种程序性细胞死亡配体1的免疫耐受诱导功能，向胶原性关节炎(CIA，collagen
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induced arthritis)小鼠模型注射与免疫球蛋白G1的Fc融合的程序性细胞死亡配体1蛋白(PD
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L1
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Ig)时，观察到关节炎症状得到缓解(Rheumatol Int.2011Apr；31(4):513
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9)。由于程序性死亡受体1在活性化的T细胞中表达，因此，预测PD
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L1蛋白不仅在自身免疫性疾病而且在器官移植过程中诱导免疫耐受，可有用地用作特异性靶向活性免疫细胞的治疗剂。
[0004]迄今为止，对于程序性死亡受体1/程序性细胞死亡配体1细胞信号体系的治疗剂朝着作为拮抗剂(antagonist)通过阻碍免疫耐受(tolerance breaking)增加T细胞活性的方向开发。但是，目前为止，尚未开发以利用兴奋剂(agonist)诱导T细胞免疫耐受为基础的免疫治疗剂。这是因为，在程序性死亡受体1/程序性细胞死亡配体1拮抗剂的情况下，可容易地利用抗体融合技术开发，但在技术上，难以开发需要开发为可溶性(soluble)形态的蛋白质的程序性死亡受体1/程序性细胞死亡配体1信号兴奋剂。
[0005]免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)的Fc融合技术是用于增加蛋白质治疗剂的体内半衰期的技术中的一种。然而，在用于现有的免疫球蛋白融合技术的免疫球蛋白G1的情况下，由于在体内引起抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(antibody dependent cell
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mediated cytotoxicity，ADCC)及补体依赖性细胞毒作用(complement dependent cytotoxicity，CDC)，因此，作为自身免疫性疾病治疗剂或器官移植中的免疫耐受诱导剂的免疫球蛋白融合蛋白无法起到抑制炎症反应的作用，反而存在使炎症恶化的问题。
[0006]因此，需要开发将程序性细胞死亡配体1的半衰期维持为与现有的免疫球蛋白融合蛋白治疗剂相似，并且，不诱发抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用及补体依赖性细胞毒
作用，从而提高作为免疫抑制剂的程序性细胞死亡配体1治疗功效的技术。

技术实现思路

[0007]专利技术要解决的问题
[0008]本专利技术的目的在于，提供一种融合蛋白，包含程序性细胞死亡配体1蛋白及修饰免疫球蛋白的Fc区域。
[0009]并且，本专利技术的另一目的在于，本专利技术提供一种核酸分子，对所述融合蛋白进行编码。
[0010]并且，本专利技术的另一目的在于，提供一种表达载体，包含所述核酸分子。
[0011]并且，本专利技术的另一目的在于，提供一种宿主细胞，包含所述表达载体。
[0012]并且，本专利技术的另一目的在于，提供一种用于预防或治疗免疫疾病的药物组合物，包含融合蛋白作为有效成分，所述融合蛋白包含程序性细胞死亡配体1蛋白及修饰免疫球蛋白的Fc区域。
[0013]并且，本专利技术的另一目的在于，提供一种包含程序性细胞死亡配体1蛋白及修饰免疫球蛋白的Fc区域的融合蛋白的用途，用于生产具有免疫疾病的预防或治疗效果的医药制剂。
[0014]并且，本专利技术的另一目的在于，提供一种免疫疾病的预防或治疗方法，包括将包含程序性细胞死亡配体1蛋白及修饰免疫球蛋白的Fc区域的融合蛋白与药学上可接受的载体施用于个体的步骤。
[0015]解决问题的手段
[0016]为了达到上述目的，本专利技术提供一种融合蛋白，包含程序性细胞死亡配体1(PD
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L1)蛋白及修饰免疫球蛋白的Fc区域。
[0017]并且，本专利技术提供一种核酸分子，对所述融合蛋白进行编码。
[0018]并且，本专利技术提供一种表达载体，包含所述核酸分子。
[0019]并且，本专利技术提供一种宿主细胞，包含所述表达载体。
[0020]本专利技术提供一种用于预防或治疗免疫疾病的药物组合物，包含融合蛋白作为有效成分，所述融合蛋白包含程序性细胞死亡配体1(PD
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L1)蛋白及修饰免疫球蛋白的Fc区域。
[0021]并且，本专利技术提供一种包含程序性细胞死亡配体1蛋白及修饰免疫球蛋白的Fc区域的融合蛋白的用途，用于生产具有免疫疾病的预防或治疗效果的医药制剂。
[0022]并且，本专利技术提供一种免疫疾病的预防或治疗方法，包括将包含程序性细胞死亡配体1蛋白及修饰免疫球蛋白的Fc区域的融合蛋白与药学上可接受的载体施用于个体的步骤。
[0023]专利技术的效果
[0024]根据本专利技术的融合蛋白是程序性细胞死亡配体1蛋白及修饰免疫球蛋白的Fc区域通过由免疫球蛋白G1(IgG1)铰链构成的序列与GS序列相连接的融合蛋白，其特征在于，通过由免疫球蛋白G1铰链构成的序列与GS序列相连接来以诱导二聚体且维持柔韧性的方式制备。并且，根据本专利技术的融合蛋白具有如下的效果：相比于现有的融合蛋白，纯度及生产收率显著高，对程序性死亡受体1的结合能力高，减少活性化的T细胞的增殖，抑制通过活性化的T细胞生成的细胞因子的产生，抑制T细胞或巨噬细胞浸润组织，从而可有用地用于治
疗免疫疾病。
附图说明
[0025]图1示出包含程序本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种融合蛋白，其特征在于，包含程序性细胞死亡配体1(PD
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L1)蛋白及修饰免疫球蛋白的Fc区域。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述程序性细胞死亡配体1(PD
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L1)蛋白为程序性细胞死亡配体1(PD
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L1)蛋白的胞外域或其片段。3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述程序性细胞死亡配体1(PD
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L1)蛋白由选自由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:6组成的组中的氨基酸序列构成，或者所述程序性细胞死亡配体1(PD
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L1)蛋白为与选自由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:6组成的组中的氨基酸序列具有70％以上的同源性的多肽。4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述程序性细胞死亡配体1(PD
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L1)蛋白与修饰免疫球蛋白的Fc区域的N
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端或C
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端融合。5.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述程序性细胞死亡配体1(PD
‑
L1)蛋白通过连接肽与修饰免疫球蛋白的Fc区域连接。6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述连接肽由选自由SEQ ID NO:10的GGGSGGS、SEQ ID NO:17的AAGSGGGGGSGGGGSGGGGS、SEQ ID NO:18的GGSGG、SEQ ID NO:19的GGSGGSGGS、SEQ ID NO:20的GGGSGG、(G4S)n、(GGS)n、(GS)n、(GSSGGS)n、SEQ ID NO:21的KESGSVSSEQLAQFRSLD、SEQ ID NO:22的EGKSSGSGSESKST、SEQ ID NO:23的GSAGSAAGSGEF、(EAAAK)n、SEQ ID NO:24的CRRRRRREAEAC、A(EAAAK)4ALEA(EAAAK)4A、SEQ ID NO:25的GGGGGGGG、SEQ ID NO:26的GGGGGG、SEQ ID NO:27的AEAAAKEAAAAKA、SEQ ID NO:28的PAPAP、(Ala
‑
Pro)n、SEQ ID NO:29的VSQTSKLTRAETVFPDV、SEQ ID NO:30的PLGLWA、SEQ ID NO:31的TRHRQPRGWE、SEQ ID NO:32的AGNRVRRSVG、SEQ ID NO:33的RRRRRRRR、SEQ ID NO:34的GFLG及SEQ ID NO:35的GSSGGSGSSGGSGGGDEADGSRGSQKAGVDE组成的组中的任一种以上的氨基酸序列构成，其中，n为1至10的整数。7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其特征在于，所述连接肽由SEQ ID NO:1...

【专利技术属性】
技术研发人员：成永哲，辛恩朱，黄宥利，李圣熙，
申请(专利权)人：格纳西尼有限公司，
类型：发明
国别省市：