新的IL-10变体蛋白及其用途制造技术

本发明专利技术涉及新的IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新的IL
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10变体蛋白及其用途


[0001]本专利技术涉及新的IL
‑
10变体蛋白及其用途。特别地，本专利技术涉及其生产产率和免疫抑制活性得到增强的新的IL
‑
10变体蛋白及其用途。

技术介绍

[0002]白细胞介素10 (以下被称为"IL
‑
10")是作为约37 kDa的非共价结合的同源二聚体表达的抗炎细胞因子，其称为细胞因子合成抑制因子(CSIF)。IL
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10在免疫耐受的诱导和维持中起重要作用，并且这些占优势的抗炎性质早已为人所知。IL
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10抑制促炎细胞因子例如TNFα、IL
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1、IL
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6和IL
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12以及Th1细胞因子例如IL
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2和INFγ的分泌，并且调控吞噬细胞、B细胞和T细胞的分化和增殖(Glocker等人，Ann. NY Acad. Sci. 1246: 102
‑
107，2011；Moore等人，Annu. Rev. Immunol. 19: 683
‑ꢀ
765 (2001)；Waal Malefyt等人，J. Exp. Med. 174: 915
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924，1991)，Williams等人，Immunol. 113: 281
‑
292，2004)。另外，它是抗原呈递的有力抑制剂，抑制MHC II类表达以及共刺激因子CD80和CD86的上调(Mosser & Yhang，Immunol. Rev. 226: 205
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218，2008)。由于这些特性，已进行了各种研究，以使用IL
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10作为用于炎性肠病或免疫相关疾病如银屑病的治疗剂。
[0003]然而，已知IL
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10具有双重特性，其也具有免疫刺激活性的相反效应。在这方面，具体而言，IL
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10刺激B细胞活化，延长B细胞的存活，并且可能促成B细胞的类别转换。它还可以刺激NK细胞增殖和细胞因子产生，并且可以充当促进CD8
+ T细胞的特定亚群增殖的生长因子(Mosser & Yhang，Immunol. Rev. 226: 205
‑
218，2009；Cai等人，Eur. J. Immunol. 29: 2658
‑
2665，1999；Santin等人，J. Virol. 74: 4729
‑
4737，2000；Rowbottom等人，Immunol. 160: 3188
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3193，1998)。重要的是，已报道在人中高剂量的IL
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10 (分别为20和25 μg/kg)可以增加IFNγ的产生(Lauw等人，J. Immunol.，165: 2783
‑
2789，2000；Tilg等人，Gut 50: 191
‑
195，2002)。
[0004]相应地，已报道IL
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10蛋白的第87个氨基酸异亮氨酸涉及免疫活化，并且当由丙氨酸取代时，免疫活化可以被抑制(Ding等人，J. Exp. Med. 191 (2): 213
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223，2000)。然而，在IL
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10变体蛋白的情况下，已确认了与野生型相比，与IL
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10R1的结合亲和性非常弱，并且因此，它的不利之处在于对于等价的免疫抑制活性需要高剂量的施用。
[0005]另一方面，由于IL
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10蛋白的结构性质，当作为重组蛋白质生产时，生成大量的不溶性聚集物，其在生产率方面造成极大的问题。相应地，已通过在基于IL
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10的二级结构的第四个和第五个α螺旋之间引入6 a.a.的接头肽，开发了并不形成二聚体的单体IL
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10 (Josephson等人，J. Biol. Chem. 275(18): 13552
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13557，2000)，但它在体内具有短半衰期以及极低的活性，这是其作为治疗剂使用的障碍。为了克服在体内的这种低稳定性，尝试将IL
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10表达为与IgA的Fc结构域连接的融合蛋白(Westerhof等人，PLOS ONE 7(10): e46460，2012)。但是，融合蛋白显示IL
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10活性的有限恢复。

技术实现思路

[0006]技术问题本专利技术是为了解决包括上述问题的各种问题，并且本专利技术的目的是提供更有效且体内稳定性和安全性得到增强的新的IL
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10变体蛋白。然而，本专利技术的范围并不限于此。
[0007]专利技术概述在本专利技术的一个方面，提供了单体IL
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10变体蛋白，其中长度为6至12 a.a.的间隔肽插入在基于人白介素10 (IL
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10)的成熟形式的第116个氨基酸天冬酰胺和第117个氨基酸赖氨酸之间。
[0008]在本专利技术的另一个方面，提供了包含单体IL
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10变体蛋白的融合蛋白，在所述单体IL
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10变体蛋白中，长度为6至12 a.a.的间隔肽插入在基于人白介素10 (IL
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10)的成熟形式的第116个氨基酸天冬酰胺和第117个氨基酸赖氨酸之间。
[0009]在本专利技术的另一个方面，提供了编码单体IL
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10变体蛋白或融合蛋白的多核苷酸。
[0010]在本专利技术的另一个方面，提供了包含多核苷酸的重组载体。
[0011]在本专利技术的另一个方面，提供了用于免疫抑制的药物组合物，其包含单体IL
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10变体蛋白或融合蛋白作为活性成分。
[0012]在本专利技术的另一个方面，提供了用于治疗免疫相关疾病的药物组合物，其包含单体IL
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10变体蛋白或融合蛋白作为活性成分。
[0013]在本专利技术的另一个方面，提供了用于治疗患有自身免疫性疾病的受试者的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的单体IL
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10变体蛋白或融合蛋白。
[0014]专利技术效果根据本专利技术的一个实施方案的单体IL
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10变体蛋白可以用作新的免疫抑制剂和/或治疗剂，其用于治疗自身免疫性疾病，抑制作为IL
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10蛋白的双重作用之一的免疫活化，改善生产效率，以及维持其在与其它生理活性蛋白的融合蛋白形式中的活性。
附图说明
[0015]图1是说明IL
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10二聚体(左)、IL
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10二聚体的单体(中)；以及根据本专利技术的一个实施方案，通过插入间隔肽而具有稳定的单体结构的IL
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10单体(右)的三维结构的结构图解。
[0016]图2A是显示通过将二聚体IL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1. 一种单体IL
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10变体蛋白，其中长度为6至12 a.a.的间隔肽插入在基于人白介素10 (IL
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10)的成熟形式的第116个氨基酸天冬酰胺和第117个氨基酸赖氨酸之间。2. 根据权利要求1的单体IL
‑
10变体蛋白，其中所述蛋白由通过SEQ ID NO: 1或39表示的氨基酸序列组成。3. 一种包含单体IL
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10变体蛋白的融合蛋白，在所述单体IL
‑
10变体蛋白中，长度为6至12 a.a.的间隔肽插入在基于人白介素10 (IL
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10)的成熟形式的第116个氨基酸天冬酰胺和第117个氨基酸赖氨酸之间。4. 根据权利要求3的融合蛋白，其中所述单体IL
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10变体蛋白由通过SEQ ID NO: 1或39表示的氨基酸序列组成。5.根据权利要求3的融合蛋白，其进一步包括发挥不同功能的一种或多种融合配偶体蛋白。6.根据权利要求5的融合蛋白，其中所述融合配偶体蛋白是与靶蛋白特异性结合的抗体、抗体的抗原结合片段、与靶蛋白特异性结合的抗体模拟物、抗体Fc区、或抗体Fc区受体、抗体Fc区受体的细胞外结构域、二聚化结构域、细胞因子或免疫调节肽。7. 根据权利要求6的融合蛋白，其中所述抗体Fc区由SEQ ID NO: 6至9中的任何一种氨基酸序列组成。8. 根据权利要求6的融合蛋白，其中所述抗体Fc区受体是IgE Fc受体的α亚基或α亚基的细胞外结构域。9. 根据权利要求6的融合蛋白，其中所述抗体的抗原结合片段是Fab、F(ab')
2 、Fab'、scFv、双链抗体、三链抗体、sdAb (单结构域抗体)、V
NAR 或V
H
H。10.根据权利要求6的融合蛋白，其中所述抗体模拟物是亲和体、affilin、affimer、affitin、alphabody、anticalin、avimer、DARPin、Fyn...

【专利技术属性】
技术研发人员：辛恩朱，南银珠，
申请(专利权)人：格纳西尼有限公司，
类型：发明
国别省市：