经修饰的白细胞介素-7融合蛋白的制剂制造技术

提供了一种包括经修饰的IL‑7蛋白的药物制剂。更具体而言，它包括(a)经修饰的IL‑7融合蛋白；(b)基础缓冲液，浓度为10～50mM；(c)糖，浓度为2.5～5w/v％；和(d)表面活性剂，浓度为0.05～6w/v％。经修饰的IL‑7融合蛋白的这样的药物制剂不显示聚集体形成，但是它在压力条件(如氧化或者搅拌)下，对蛋白质具有保护作用，由此可以被有效地用于治疗病人。

Preparation of modified interleukin -7 fusion protein

A pharmaceutical preparation comprising modified IL 7 protein is provided. More specifically, it includes (a) modified IL_7 fusion protein; (b) base buffer with a concentration of 10-50mM; (c) sugar with a concentration of 2.5-5w/v%; and (d) surfactant with a concentration of 0.05-6w/v%. Drug preparations such as the modified IL-7 fusion protein do not show aggregate formation, but it protects the protein under pressure conditions such as oxidation or stirring, which can be effectively used to treat patients.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的白细胞介素-7融合蛋白的制剂
本专利技术涉及一种包含经修饰的白细胞介素-7融合蛋白的药物组合物的制剂。
技术介绍
白细胞介素-7(IL-7)是一种刺激由T细胞和B细胞介导的免疫应答的细胞因子，具体地，它在适应性免疫系统中发挥重要作用。尽管IL-7主要由骨髓和胸腺中的基质细胞分泌，它也产生在角质形成细胞，树突细胞，肝细胞，神经和上皮细胞中(HeuflerCetal.,1993,J.Exp.Med.178(3):1109-14；KronckeRetal.,1996,Eur.J.Immunol.26(10):2541-4:SawaYetal.,2009,Immunity30(3):447-57；WatanabeMetal.,1995,J.Clin.Invest.95(6):2945-53)。通过影响T细胞和B细胞的存活和分化，以及通过刺激NK细胞(自然杀伤细胞)的活性等等，IL-7激活了免疫系统。并且具体地，它在B细胞的发育中发挥重要作用。通过刺激IL-2(一种细胞因子)和干扰素-γ的分泌，IL-7增强了在人体中的免疫应答。换而言之，IL-7是一种促进T细胞、B细胞和其它免疫细胞的存活和增殖的细胞因子，并且它是用于各种疾病(例如病毒感染、癌症和免疫系统损伤)的免疫治疗剂的优秀候选者。最近进行了一项临床研究，用来阐明IL-7对各种恶性肿瘤和人体免疫缺陷病毒感染的作用，其结果报道了IL-7对人类的免疫增强作用(FryTJetal.,2002,Blood99(11):3892-904；MueggeKetal.,1993,Science261(5117):93-5；RosenbergSAetal.,J.Immunother.29(3):313-9)。另外，据报道，IL-7有助于异基因干细胞移植后的免疫恢复(SnyderKM,2006,LeukLymphoma47(7).1222-8)，并且它还被用于治疗淋巴细胞减少症。相应地，IL-7识别免疫细胞，增强T细胞功能，并且与引发免疫抑制的物质相竞争，因此，它可以被用于治疗癌症或者慢性感染。然而，为了将诸如IL-7的蛋白质用于药物用途，需要根据蛋白质的结构和其在周围环境中的物理化学稳定性制备合适的制剂。另外，蛋白质的物理和化学的稳定性受到诸如药物制剂的制造、蛋白质的纯化和储存的外部因素的影响。一般而言，蛋白质在结构和热力学方面不稳定，因此，它容易形成聚集或者出现物理化学的降解。另外，因为Fc区的分子量大并且结构复杂，所以，当免疫球蛋白的Fc区被用作融合对象时，整体的融合蛋白的物理化学性质(如动力学性质、Zeta电位和压力稳定性等)会改变很大。具体地，对于经修饰的IL-7融合蛋白的稳定的制剂还知之甚少。因此，有必要优化蛋白质的制剂，以增加该蛋白质在药物用途方面的稳定性。
技术实现思路
技术问题因此，本专利技术人建立了一种合适的制剂，用于增加经修饰的IL-7融合蛋白在用于治疗各种疾病时的稳定性。本专利技术的目的在于提供一种具有增加的稳定性的包含经修饰的IL-7融合蛋白的药物制剂。问题的解决方案依据本专利技术的目的，提供了一种药物制剂，包括：(a)经修饰的IL-7融合蛋白；(b)基础缓冲液，浓度为10～50mM；(c)糖，浓度为2.5～5w/v％；和(d)表面活性剂，浓度为0.05～6w/v％。专利技术的有益效果根据本专利技术的经修饰的IL-7融合蛋白的药物制剂不显示聚集体形成，并且在压力条件(如氧化或者搅拌)下保持经修饰的IL-7融合蛋白的稳定性，而由此可以用于治疗病人。附图说明图1为根据本专利技术的经修饰的IL-7融合蛋白的结构示意图。图2为经修饰的IL-7融合蛋白在各种基础缓冲液条件下的差式扫描量热法(DSC)的结果。图3为经修饰的IL-7融合蛋白在各种基础缓冲液条件下的动态光散射(DLS)分析的结果。图4为经修饰的IL-7融合蛋白在各种赋形剂被加入组氨酸-醋酸盐缓冲液的条件下的DLS分析的结果。图5为经修饰的IL-7融合蛋白在各种赋形剂被加入柠檬酸钠缓冲液的条件下的DLS分析的结果。本专利技术的优选实施方式以下将对本专利技术进行详细地说明。本专利技术提供了一种药物制剂，包括：(a)经修饰的IL-7融合蛋白；(b)基础缓冲液，浓度为10～50mM；(c)糖，浓度为2.5～5w/v％；和(d)表面活性剂，浓度为0.05～6w/v％。如本文所用，术语“白细胞介素-7(IL-7)”是指在各种基质细胞、产生角蛋白的细胞、树突细胞、神经元、表皮细胞等中表达或者分泌的造血生长因子。IL-7可以通过结合受体促进免疫应答，并且它可以激活各种免疫细胞，例如T细胞，B细胞，免疫系统中的单核细胞。该IL-7是白细胞介素-7(IL-7)，或者是具有与IL-7类似的活性的多肽。本专利技术的IL-7包括了含有由SEQIDNO:1～6表示的氨基酸序列的多肽。另外，该IL-7融合蛋白的氨基酸序列可以与SEQIDNO:1～6的序列具有大致90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或者更多的序列同源性。IL-7可以是IL-7融合蛋白，或者是包括其片段的融合蛋白。另外，IL-7可以源自人类、大鼠、小鼠、猴子、奶牛或者绵羊。具体地，人源的IL-7可以具有由SEQIDNO:1(Genbank登录号：P13232)表示的氨基酸序列；源自大鼠的IL-7可以具有由SEQIDNO:2(Genbank登录号：P56478)表示的氨基酸序列；源自小鼠的IL-7可以具有由SEQIDNO:3(Genbank登录号：P10168)表示的氨基酸序列；源自猴子的IL-7可以具有由SEQIDNO:4(Genbank登录号：NP_001279008)表示的氨基酸序列；牛IL-7可以具有由SEQIDNO:5(Genbank登录号：P26895)表示的氨基酸序列；以及羊源性的IL-7可以具有由SEQIDNO:6(Genbank登录号：Q28540)表示的氨基酸序列。如本文所用，术语“经修饰的IL-7”是指一种分子，其中，在IL-7的端部具有包括了1～10个氨基酸的寡肽，由此而具有与野生型IL-7不同的序列。优选地，根据本专利技术的经修饰的IL-7具有如下的结构：A–IL-7；其中，所述A可以与该IL-7的N-端结合。编码所述A的核酸可以依次与IL-7基因同在DNA构建体上，它可以被表达为蛋白质。进一步地，所述A可以被单独地表达或者合成，并且随后通过化学键与IL-7结合。所述A包括1～10个氨基酸，具体地，包括2～8个氨基酸，更具体地，包括1～5个氨基酸，其中，所包括的氨基酸是选自包括蛋氨酸(M)、甘氨酸(G)、以及其组合的组。所述A的例子包括：M,G,MM,MG,GM,GG,MMM,GMM,MGM,MMG,GGM,GMG,MGG,GGG,MMMM(SEQIDNO:9),GMMM(SEQIDNO:10),MGMM(SEQIDNO:11),MMGM(SEQIDNO:12),MMMG(SEQIDNO:13),GGMM(SEQIDNO:14),MGGM(SEQIDNO:15),MMGG(SEQIDNO:16),GMGM(SEQIDNO:17),MGMG(SEQIDNO:18),GMMG(SEQIDNO:19),GGGM(SEQIDNO:20),本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种药物制剂，包括：(a)经修饰的IL‑7融合蛋白；(b)基础缓冲液，浓度为10～50mM；(c)糖，浓度为2.5～5w/v％；及(d)表面活性剂，浓度为0.05～6w/v％。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.06 KR 10-2015-01561241.一种药物制剂，包括：(a)经修饰的IL-7融合蛋白；(b)基础缓冲液，浓度为10～50mM；(c)糖，浓度为2.5～5w/v％；及(d)表面活性剂，浓度为0.05～6w/v％。2.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于，所述经修饰的IL-7融合蛋白包括包含了1～5个选自M和G的氨基酸的寡肽、IL-7和免疫球蛋白的Fc区。3.根据权利要求2所述的药物制剂，其特征在于，所述包含了1～5个选自M和G的氨基酸的寡肽选自以下组成的组：M,G,MM,MG,GM,GG,MMM,GMM,MGM,MMG,GGM,GMG,MGG,GGG,MMMM(SEQIDNO:9),GMMM(SEQIDNO:10),MGMM(SEQIDNO:11),MMGM(SEQIDNO:12),MMMG(SEQIDNO:13),GGMM(SEQIDNO:14),MGGM(SEQIDNO:15),MMGG(SEQIDNO:16),GMGM(SEQIDNO:17),MGMG(SEQIDNO:18),GMMG(SEQIDNO:19),GGGM(SEQIDNO:20),MGGG(SEQIDNO:21),GMGG(SEQIDNO:22),GGMG(SEQIDNO:23),GGGG(SEQIDNO:24),MMMMM(SEQIDNO:25),GMMMM(SEQIDNO:26),GGMMM(SEQIDNO:27),GGGMM(SEQIDNO:28),GGGGM(SEQIDNO:29),MGMMM(SEQIDNO:30),MGGMM(SEQIDNO:31),MGGGM(SEQIDNO:32),MGGGG(SEQIDNO:33),MMGMM(SEQIDNO:34),MMGGM(SEQIDNO:35),MMGGG(SEQIDNO:36),MMMGM(SEQIDNO:37),MMMGG(SEQIDNO:38),MMMMG(SEQIDNO:39),MGGGM(SEQIDNO:40),MGMGM(SEQIDNO:41),GMGMG(SEQIDNO:42),GMMMG(SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔东勋，殷畅容，郑圣勋，林埈热，
申请(专利权)人：格纳西尼有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国,KR