抗人LAG-3抗体及其用途制造技术

提供了结合人LAG

【技术实现步骤摘要】
抗人LAG
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3抗体及其用途
[0001]本申请是申请日为2019年2月27日、专利技术名称为“抗人LAG
‑
3单克隆抗体及其制备方法和用途”的中国专利技术专利申请No.201910146172.2的分案申请。
[0002]序列表
[0003]本申请包含序列表，并且其全部内容通过引用并入本文。


[0004]本申请一般而言涉及抗体。更具体地，本申请涉及结合人LAG
‑
3的完全人单克隆抗体、其制备方法及其用途。

技术介绍

[0005]淋巴细胞活化基因3(CD223)，也称为LAG
‑
3，是一种I型跨膜蛋白，其是免疫球蛋白超家族(IgSF)的成员。
[0006]LAG
‑
3是在活化的T细胞、NK细胞、B细胞和浆细胞样树突状细胞上表达的细胞表面分子，但其不在静息T细胞上表达。LAG
‑
3与CD4具有约20％的氨基酸序列同源性，但其以更高的亲和力结合MHC II类分子及独立于MHC
‑
II的LAG
‑
3的主要功能配体纤维蛋白样蛋白1(FGL1)类分子，从而提供对T细胞受体信号传导的负调节。
[0007]LAG
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3的体外阻断增强T细胞增殖和细胞因子产生，并且LAG
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3缺陷小鼠在由超抗原葡萄球菌肠毒素B、肽或仙台病毒感染诱导的T细胞应答的下调中存在缺陷。LAG
‑
3在活化的天然Treg(nTreg)和诱导的CD4
+
FoxP3
+
Treg(iTreg)细胞上表达，其中表达水平高于在活化的效应CD4
+
T细胞上观察到的表达水平。Treg细胞上LAG
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3的阻断消除Treg细胞的抑制子功能，而非Treg CD4
+
T细胞中LAG
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3的异位表达赋予抑制活性。基于LAG
‑
3对慢性感染和癌症中T细胞功能的免疫调节作用，LAG
‑
3特异性单克隆抗体的预测的作用机制是抑制肿瘤特异性效应T细胞的负调节。
[0008]目前在早期临床开发中只有三种潜在的拮抗剂抗体调节LAG
‑
3功能和抗肿瘤免疫应答以治疗晚期实体瘤。这些抗体描述于专利US 20110150892 A1、US 20170101472A1和WO 2015138920A1中，下文分别称为BMK1、BMK7和BMK5。如本文所述，BMK8是嵌合抗体BMK5的人源化形式。BMK1、BMK7和BMK8在本申请的上下文中用作基准抗体。因此，仍然需要具有改善的功效(例如高结合亲和力、低跨家族反应和良好的稳定性)的抗人LAG
‑
3抗体。在本申请中，专利技术人利用人源化大鼠产生了一系列针对LAG
‑
3的抗体和完全人抗体。本申请的抗体具有高结合亲和力，特异性结合人LAG
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3蛋白而没有跨家族反应，并且有效调节免疫应答。
[0009]专利技术概述
[0010]广义而言，本专利技术涉及提供具有改善功效的抗体的新型化合物、方法、组合物和制品。本专利技术提供的益处广泛地适用于抗体治疗和诊断领域，并且可以与能够与各种靶标反应的抗体联合使用。本专利技术提供了与人LAG
‑
3结合的抗体，优选完全人单克隆抗体。还提供了使用人源化大鼠产生杂交瘤的方法，编码抗LAG
‑
3抗体的核酸分子，用于表达抗LAG
‑
3抗体的表达载体和宿主细胞。本专利技术进一步提供了体外验证抗体功能的方法。本专利技术的抗体
提供了通过调节人免疫功能治疗多种疾病的有效药剂。
[0011]在一些方面，本专利技术包括分离的抗体或其抗原结合部分。
[0012]在一些实施方案中，分离的抗体或其抗原结合部分具有一种或多种以下性质：
[0013](a)以2
×
10
‑
10
M或更低的K
D
结合人LAG
‑
3；
[0014](b)抑制LAG
‑
3与主要组织相容性(MHC)II类分子的结合；
[0015](c)抑制LAG
‑
3与纤维蛋白样蛋白1(FGL1)配体分子的结合；
[0016](d)抑制LAG
‑
3与LSECtin和/或半乳糖凝集素
‑
3的结合；
[0017](e)结合人LAG
‑
3而不发生跨家族反应；或
[0018](f)与人CD4没有交叉反应性。
[0019]在一些实施方案中，分离的抗体或其抗原结合部分包含：
[0020]A)一个或多个重链CDR(CDRH)，其选自以下的至少一个：(i)与选自SEQ ID NO：1和7的序列之一所示的CDRH1具有至少90％序列同一性的CDRH1；(ii)与选自SEQ ID NO：2和8的序列之一所示的CDRH2具有至少90％序列同一性的CDRH2；和(iii)与选自SEQ ID NO：3和9的序列之一所示的CDRH3具有至少90％序列同一性的CDRH3；
[0021]B)一个或多个轻链CDR(CDRL)，其选自以下的至少一个：(i)与选自SEQ ID NO：4和10的序列之一所示的CDRL1具有至少90％序列同一性的CDRL1；(ii)与选自SEQ ID NO：5和11的序列之一所示的CDRL2具有至少90％序列同一性的CDRL2；和(iii)与选自SEQ ID NO：6和12的序列之一所示的CDRL3具有至少90％序列同一性的CDRL3；或
[0022]C)A)的一个或多个CDRH和B)的一个或多个CDRL。
[0023]在一些实施方案中，分离的抗体或其抗原结合部分包含：
[0024]A)一个或多个(如1、2或3个)重链CDR(CDRH)，其选自以下的至少一个：(i)选自SEQ ID NO：1和7的CDRH1或与该CDRH1的氨基酸序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异的CDRH1；(ii)选自SEQ ID NO：2和8的CDRH2或与该CDRH2的氨基酸序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异的CDRH2；和(iii)选自SEQ ID NO：3和9的CDRH3或与该CDRH3的氨基酸序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异的CDRH3；
[0025]B)一个或多个(如1、2或3个)轻链CDR(CDRL)，其选自以下的至少一个：(i)选自SEQ ID NO：4和10的CDRL1或与该CDRL1的氨基酸序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异的CDRL1；(ii)选自SEQ ID NO：5和11的CDRL2或与该CDRL2的氨基酸序列存在不超过2个氨基酸的氨基酸添加、缺失或取代的差异的CDRL2；和(iii)选本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述分离的抗体或其抗原结合部分包含：如SEQ ID NO：7所示的CDRH1，如SEQ ID NO：8所示的CDRH2，如SEQ ID NO：9所示的CDRH3，如SEQ ID NO：10所示的CDRL1，如SEQ ID NO：11所示的CDRL2，和如SEQ ID NO：12所示的CDRL3。2.权利要求1的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述分离的抗体或其抗原结合部分包含：(A)重链可变区：(i)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列；(ii)包含与SEQ ID NO：15具有至少85％、90％或95％同一性的氨基酸序列；或(iii)包含与SEQ ID NO：15相比在框架区中具有一个或多个氨基酸的添加、缺失和/或取代的氨基酸序列；和/或(B)轻链可变区：(i)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；(ii)包含与SEQ ID NO：16具有至少85％、90％或95％同一性的氨基酸序列；或(iii)包含与SEQ ID NO：16相比在框架区中具有一个或多个氨基酸的添加、缺失和/或取代的氨基酸序列。3.权利要求1的分离的抗体或其抗原结合部分，其具有一个或多个以下性质：(a)以2
×
10
‑
10
M或更低的K
D
结合人LAG
‑
3；(b)抑制LAG
‑
3与主要组织相容性(MHC)II类分子的结合；(c)抑制LAG
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3与纤维蛋白样蛋白1(FGL1)配体分子的结合；(d)抑制LAG
‑
3与LSECtin和/或半乳糖凝集素
‑
3的结合；(e)结合人LAG
‑
3而不发生跨家族反应；或(f)与人CD4没有交叉反应性。4.权利要求1
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3中任一项的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体是单克隆抗体，例如完全人单克隆抗体，例如由转基因哺乳动物产生的完全人单克隆抗体，所述转基因哺乳动物优选是转基因大鼠，更优选是具有重组免疫球蛋白基因座的转基因大鼠。5.一种分离...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑勇，吴琼，李竞，
申请(专利权)人：广州誉衡生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：