乙嘧酚半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用技术

本发明专利技术属于免疫分析技术领域，具体涉及乙嘧酚半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用。本发明专利技术提供的乙嘧酚半抗原，具有式I所示结构，式I中的R1为能够与载体蛋白直接偶联的活性基团。本发明专利技术提供的乙嘧酚半抗原在保留乙嘧酚基本结构的基础上，以乙嘧酚原有的

【技术实现步骤摘要】
乙嘧酚半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用


[0001]本专利技术属于免疫分析
，具体涉及乙嘧酚半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用。

技术介绍

[0002]乙嘧酚英文名称为prometryn，化学名称为：5
‑
丁基
‑2‑
乙基氨基
‑4‑
羟基
‑6‑
甲基嘧啶，CAS登记号为：23947
‑
60
‑
6，分子式为：C
11
H
19
N3O，分子量为：209.3，中文别名为：乙嘧醇、不霉定、乙氨哒酮、胺嘧啶、5
‑
丁基
‑2‑
乙氨基
‑4‑
羟基
‑6‑
甲基嘧啶、乙菌定或乙嘧酚。
[0003]乙嘧酚对草莓、西瓜、黄瓜、葡萄等许多作物白粉病的实际防效、对作物的安全性高于其他进口或国产同类产品。但不合理的乙嘧酚施药方式与施药剂量会造成环境污染与农药残留问题，残留的乙嘧酚可以通过富集作用在食物链中不断传递、迁移，从而对农产品的质量与安全、生态环境造成不良的影响，进而危害人类健康。因此，需对乙嘧酚的残留水平进行监测。
[0004]目前已经建立了许多检测环境样品、食品和农产品中乙嘧酚残留的方法。仪器分析方法具有足够的准确性和高度的敏感性，如液相色谱法(LC)、LC
‑
串联质谱法(LC
‑
MS/MS)、气相色谱法(GC)和GC
‑
串联质谱法(GC
‑
MS/MS)均是常用的检测方法。然而，这些仪器分析方法通常需要训练有素的人员、昂贵的仪器、复杂的样品预处理和耗时的分析过程，不适合用于现场对乙嘧酚的残留检测。
[0005]免疫分析方法由于其对抗原和抗体的特异性识别作用，具有快速、简便、实时、易于进行现场检测、样品前处理简单、灵敏度高、选择性强、适合于高通量分析等优点，而且能大幅度降低检测成本。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种乙嘧酚半抗原、完全抗原、抗体制备方法及应用，本专利技术提供的乙嘧酚半抗原偶联后能够充分突出乙嘧酚抗原决定簇，制备得到的乙嘧酚完全抗原具有免疫原性，可特异性识别乙嘧酚，从而得到的抗乙嘧酚抗体特异性好，灵敏度高，进而可以用于乙嘧酚的免疫分析方法的研发。
[0007]本专利技术提供了一种乙嘧酚半抗原，具有式I所示结构：
[0008][0009]所述式I中的R1为能够与载体蛋白直接偶联的活性基团。
[0010]优选的，所述R1包括
‑
(CH2)
n
‑
COOH、
‑
(CH2)
n
‑
NH2、
‑
(CH2)
n
‑
OH、
‑
(CH2)
n
‑
COOR2、
n为0～3的整数，m为0～4的整数，所述
‑
(CH2)
n
‑
COOR2中的R2包括
[0011]优选的，所述乙嘧酚半抗原具有式I
‑
1或式I
‑
2所示结构：
[0012][0013]本专利技术提供了上述技术方案所述的乙嘧酚半抗原的制备方法，包括以下步骤：
[0014]将式II所示结构的化合物结构中的R3基团通过化学反应替换为R1基团，得到所述式I所示结构的乙嘧酚半抗原；
[0015][0016]所述式II中的R3为
‑
CH3或
‑
COO
‑
CH2‑
CH3。
[0017]优选的，所述式I
‑
1所示结构的乙嘧酚半抗原的制备方法包括以下步骤：
[0018]将式5所示结构的化合物、无机强碱溶解于有机溶剂和水的混合溶液中进行水解反应，得到式I
‑
1所示结构的乙嘧酚半抗原；
[0019][0020]本专利技术提供一种乙嘧酚完全抗原，由上述技术方案所述乙嘧酚半抗原或上述技术方案所述的制备方法制备得到的乙嘧酚半抗原与载体蛋白偶联得到。
[0021]本专利技术提供了一种乙嘧酚抗体，将上述技术方案所述乙嘧酚完全抗原乳化后免疫宿主动物得到。
[0022]本专利技术提供了上述技术方案所述乙嘧酚抗体的制备方法，包括以下步骤：
[0023]将上述技术方案所述乙嘧酚完全抗原乳化后免疫宿主动物；
[0024]乙嘧酚多克隆抗体的制备方法为：将免疫宿主动物加强免疫后，采集免疫动物血液后分离，得到所述乙嘧酚多克隆抗体；
[0025]乙嘧酚单克隆抗体的制备方法为：提取免疫的宿主动物的脾细胞，将所述脾细胞与SP2/0瘤细胞融合，筛选能够分泌乙嘧酚抗体的单克隆杂交瘤细胞株，基于所述单克隆杂交瘤细胞株制备所述乙嘧酚单克隆抗体；
[0026]乙嘧酚纳米抗体的制备方法为：提取免疫的宿主动物血液中的B淋巴细胞转录的mRNA，反转录为cDNA，以所述cDNA为底物PCR扩增获取多样化纳米抗体基因片段，将所述多样化纳米抗体基因片段构建噬菌体或酵母抗体表达库，经筛选得到乙嘧酚纳米抗体。
[0027]本专利技术提供一种检测乙嘧酚的试剂或试剂盒，含有上述技术方案所述乙嘧酚抗体或者上述技术方案所述制备方法制备得到的乙嘧酚抗体。
[0028]本专利技术提供上述技术方案所述乙嘧酚抗体或者上述技术方案所述制备方法制备得到的乙嘧酚抗体或者上述技术方案所述的试剂或试剂盒在检测乙嘧酚中的应用。
[0029]本专利技术提供一种乙嘧酚半抗原，具有式I所示结构：
[0030][0031]所述式I中的R1为能够与载体蛋白直接偶联的活性基团。
[0032]本专利技术提供的乙嘧酚半抗原在保留乙嘧酚基本结构的基础上，以乙嘧酚原有的
‑
CH2‑
CH2‑
CH2‑
CH2‑
结构作为连接臂的全部或部分连接结构，在
‑
CH2‑
CH2‑
CH2‑
CH2‑
结构上远离乙嘧酚的特征结构的位点上引入能够与载体蛋白直接偶联的活性基团R1，不仅有效避免外接连接臂带来的非特异性结合，而且引入的活性基团偶联载体蛋白后能够充分暴露乙嘧酚本体分子的特征结构，制备得到的乙嘧酚完全抗原具有免疫原性，将乙嘧酚完全抗原免疫宿主动物后，制备的抗乙嘧酚血清或抗乙嘧酚抗体可以用于建立乙嘧酚免疫学检测方法或检测试剂，具有广阔应用前景。
[0033]本专利技术提供一种乙嘧酚完全抗原，由上述技术方案所述乙嘧酚半抗原或上述技术方案所述的制备方法制备得到的乙嘧酚半抗原与载体蛋白偶联得到。本专利技术提供的乙嘧酚完全抗原进行免疫得到的抗乙嘧酚血清或抗乙嘧酚抗体，能够高效识别并特异性结合乙嘧酚，能够为乙嘧酚的免疫应用提供技术基础。
[0034]本专利技术提供一种乙嘧酚抗体，将上述技术方案所述乙嘧酚完全抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乙嘧酚半抗原，具有式I所示结构：所述式I中的R1为能够与载体蛋白直接偶联的活性基团。2.根据权利要求1所述的乙嘧酚半抗原，其特征在于，所述R1包括
‑
(CH2)
n
‑
COOH、
‑
(CH2)
n
‑
NH2、
‑
(CH2)
n
‑
OH、
‑
(CH2)
n
‑
COOR2、、n为0～3的整数，m为0～4的整数，所述
‑
(CH2)
n
‑
COOR2或中的R2包括3.根据权利要求1或2所述的乙嘧酚半抗原，其特征在于，所述乙嘧酚半抗原具有式I
‑
1或式I
‑
2所示结构：4.权利要求1～3任意一项所述的乙嘧酚半抗原的制备方法，包括以下步骤：将式II所示结构的化合物结构中的R3基团通过化学反应替换为R1基团，得到所述式I所示结构的乙嘧酚半抗原；
所述式II中的R3为
‑
CH3或
‑
COO
‑
CH2‑
CH3。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述式I
‑
1所示结构的乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：金茂俊，类兴梅，许灵媛，赵静，王静，曹振，金芬，佘永新，郑鹭飞，邵华，王珊珊，王淼，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：