一种沼泽红假单胞菌快速培养方法和培养基技术

本发明专利技术涉及微生物培养技术领域，具体涉及一种沼泽红假单胞菌快速培养方法和培养基。本发明专利技术提供用于沼泽红假单胞菌有氧培养的培养基，其包括如下组分：有机氮源3.00～9.00g/L，铵盐0.88～1.76g/L，丁二酸钠5.40～10.80g/L，谷氨酸钠1.12～2.25g/L，硫酸镁0.20～0.60g/L。利用该培养基和有氧培养方法，沼泽红假单胞菌可进行快速增殖，具有较高的生长速率，可在短时间内获得较多的沼泽红假单胞菌菌体，获得的菌体经一步简单处理后，即可满足沼泽红假单胞菌厌氧发酵的需求，极大地简化了培养过程，缩短了培养周期。缩短了培养周期。

【技术实现步骤摘要】
一种沼泽红假单胞菌快速培养方法和培养基


[0001]本专利技术涉及微生物培养
，具体涉及一种沼泽红假单胞菌快速培养方法和培养基。

技术介绍

[0002]沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)是一种常见的兼性好氧细菌，属于红螺菌科，红假单胞菌属。在厌氧条件下，沼泽红假单胞菌能够利用光照供能，以有机物、硫化物、氨等作为氢供体进行繁殖；同时，该菌也能在有氧条件下利用有机物等进行快速繁殖。沼泽红假单胞菌广泛分布在自然界的土壤、水体等环境中，在具有多种代谢途径的同时，可以分泌多种有益物质，在农牧业、废水处理、水产养殖等方面具有广泛的应用前景。沼泽红假单胞菌可以作为动物养殖过程中的饲料添加剂使用。
[0003]目前，常见的沼泽红假单胞菌的人工培养多为厌氧光照培养过程，即使用透光的培养容器进行密闭培养，在厌氧条件下经过4～7天的培养周期，最终获得沼泽红假单胞菌培养液。上述培养方法对于培养容器和培养条件有严格的限制，并且生长速率、发酵速率受到厌氧培养影响较为缓慢，所需培养周期较长，获得的菌体量较低。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种沼泽红假单胞菌快速培养方法和培养基。
[0005]针对目前厌氧培养沼泽红假单胞菌存在的问题，本专利技术开发一种沼泽红假单胞菌快速培养方法及其使用的培养基。本专利技术采用有氧培养方法并首先优化了有氧培养使用的培养基以提高沼泽红假单胞菌的增殖速率，缩短培养周期。本专利技术在研发过程中尝试了多种碳源、氮源等营养物质及其不同的组合，发现很多培养基虽然能够保证较高的最终菌体量，但是，沼泽红假单胞菌的生长速率仍然较慢，需要较长的培养时间，同时也增加了杂菌污染的风险。经大量尝试本专利技术意外地发现，在培养基中添加特定配比的丁二酸钠和谷氨酸钠能够显著提高沼泽红假单胞菌在有氧条件下的生长速率，同时显著增加培养获得的最终菌体量。
[0006]具体地，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供用于沼泽红假单胞菌有氧培养的培养基，所述培养基包括如下组分：有机氮源3.00～9.00g/L，铵盐0.88～1.76g/L，丁二酸钠5.40～10.80g/L，谷氨酸钠1.12～2.25g/L，硫酸镁0.20～0.60g/L。
[0008]优选地，所述培养基中，丁二酸钠和谷氨酸钠的质量比为(4～6)：1。
[0009]沼泽红假单胞菌对于碳源和氮源等营养物质的代谢存在复杂的代谢途径和调控机制，本专利技术发现，将丁二酸钠和谷氨酸钠以上述配比添加，能够明显促进沼泽红假单胞菌在有氧条件下的生长，有利于在短时间有氧培养下获得较高的菌体量。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，有氧培养的培养基中，丁二酸钠和谷氨酸钠的质量比为(4～5)：1。
[0011]在添加上述配比的丁二酸和谷氨酸钠的基础上，有机氮源优选为酵母膏和蛋白胨。有机氮源与丁二酸钠和谷氨酸钠的总质量之比优选为1：(1～2)。更优选为1：(1.5～2)。
[0012]采用上述配比的酵母膏和蛋白胨与丁二酸钠和谷氨酸钠配合，能够更好地促进沼泽红假单胞菌在有氧条件下快速增殖。
[0013]优选地，所述培养基中，酵母膏的浓度为2.00～6.00g/L，蛋白胨的浓度为2.00～6.00g/L。
[0014]作为无机氮源，铵盐为选自硫酸铵、氯化铵中的一种或两种。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述铵盐为硫酸铵。
[0016]为更好地控制培养过程中的pH变化，以上所述的有氧培养的培养基还包括pH缓冲剂。
[0017]优选地，所述pH缓冲剂为浓度为1.00～3.00g/L的3
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(N
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吗啡啉)丙磺酸。
[0018]以上所述的有氧培养的培养基的pH为6.8～7.6。
[0019]作为本专利技术的优选方案，以上所述的有氧培养的培养基包括以下组分：酵母膏2.00～4.00g/L，蛋白胨2.00～4.00g/L，3
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(N
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吗啡啉)丙磺酸2.00～2.50g/L，丁二酸钠7.00～9.00g/L，硫酸铵1.00～1.50g/L，谷氨酸钠1.50～2.00g/L，硫酸镁0.30～0.50g/L，pH 6.8～7.2。
[0020]作为本专利技术的优选方案，以上所述的有氧培养的培养基以水为溶剂，由以下组分组成：酵母膏2.50～3.50g/L，蛋白胨2.50～3.50g/L，3
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(N
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吗啡啉)丙磺酸2.00～2.50g/L，丁二酸钠7.50～8.50g/L，硫酸铵1.00～1.50g/L，谷氨酸钠1.50～2.00g/L，硫酸镁0.30～0.50g/L，pH 6.8～7.2。
[0021]上述培养基的pH调节可采用浓度为30～50g/L的氢氧化钠进行调节。
[0022]上述培养基可采用121℃高压蒸汽灭菌，灭菌时间为15～20分钟。
[0023]在上述有氧培养基的基础上，本专利技术还提供一种用于沼泽红假单胞菌培养的试剂盒，所述试剂盒包括以上所述的用于沼泽红假单胞菌有氧培养的培养基以及用于沼泽红假单胞菌厌氧培养的培养基。
[0024]其中，所述用于沼泽红假单胞菌厌氧培养的培养基包括如下组分：酵母膏0.10～0.30g/L，磷酸二氢钾1.00～2.00g/L，磷酸氢二钾1.00～2.00g/L，七水合硫酸镁0.10～0.20g/L，二水合氯化钙0.01～0.10g/L，氯化钠0.1～1.0g/L，硫代硫酸钠0.10～0.20g/L，柠檬酸铁0.001～0.010g/L，对氨基苯甲酸0.001～0.010g/L，无机盐溶液1.00～2.00mL。
[0025]上述无机盐溶液包括如下组分：氯化锌68～72mg/L，四水合氯化锰95～105mg/L，硼酸58～62mg/L，六水合氯化钴190～210mg/L，二水合氯化铜18～22mg/L，六水合氯化镍18～22mg/L，二水合钼酸钠35～45mg/L。
[0026]以上所述的厌氧培养的培养基的pH为6.8～7.6。
[0027]上述厌氧培养的培养基能够与前述有氧培养的培养基较好地配合作用和衔接，将有氧培养获得的菌体收集后可直接转入厌氧培养基中进行厌氧培养。
[0028]作为本专利技术的优选方案，所述用于沼泽红假单胞菌厌氧培养的培养基包括如下组分：酵母膏0.15～0.25g/L，磷酸二氢钾1.50～2.00g/L，磷酸氢二钾1.50～2.00g/L，七水合硫酸镁0.15～0.20g/L，二水合氯化钙0.04～0.08g/L，氯化钠0.3～0.6g/L，硫代硫酸钠0.10～0.20g/L，柠檬酸铁0.003～0.006g/L，对氨基苯甲酸0.001～0.005g/L，无机盐溶液
1.00～1.50mL，pH 6.8～7.2。
[0029]上述无机盐溶液包括如下组分：氯化锌68～72mg/L，四水合氯化锰95～105mg/L，硼酸58～62mg/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于沼泽红假单胞菌有氧培养的培养基，其特征在于，所述培养基包括如下组分：有机氮源3.00～9.00g/L，铵盐0.88～1.76g/L，丁二酸钠5.40～10.80g/L，谷氨酸钠1.12～2.25g/L，硫酸镁0.20～0.60g/L。2.根据权利要求1所述的用于沼泽红假单胞菌有氧培养的培养基，其特征在于，所述培养基中，丁二酸钠和谷氨酸钠的质量比为(4～6)：1。3.根据权利要求1所述的用于沼泽红假单胞菌有氧培养的培养基，其特征在于，所述有机氮源为酵母膏和蛋白胨；优选地，所述培养基中，酵母膏的浓度为2.00～6.00g/L，蛋白胨的浓度为2.00～6.00g/L；和/或，所述铵盐为选自硫酸铵、氯化铵中的一种或两种。4.根据权利要求1～3任一项所述的用于沼泽红假单胞菌有氧培养的培养基，其特征在于，所述培养基还包括pH缓冲剂；优选地，所述pH缓冲剂为浓度为1.00～3.00g/L的3
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(N
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吗啡啉)丙磺酸；更优选地，所述培养基的pH为6.8～7.6。5.用于沼泽红假单胞菌培养的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～4任一项所述的用于沼泽红假单胞菌有氧培养的培养基以及用于沼泽红假单胞菌厌氧培养的培养基；优选地，所述用于沼泽红假单胞菌厌氧培养的培养基包括如下组分：酵母膏0.10～0.30g/L，磷酸二氢钾1.00～2.00g/L，磷酸氢二钾1.00～2.00g/L，七水合硫酸镁0.10～0.20g/L，二水合氯化钙0.01～0.10g/L，氯化钠0.1～1.0g/L，硫代硫酸钠0.10～0.20g/L，柠檬酸铁0.001～0.010g/L，对氨基苯甲酸0.001～0.010g/L，无机盐溶液1.00～2.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：宗夜晴，王世崇，雷林翰，方施皓，白悦琪，齐心怡，程萧璇，吴禹卿，薛子湉，廖梓涵，汪思宇，张登钤，张之瀚，钱秋晔，周卓楠，王崇毅，倪好，张梓玥，史泽渝，杨翔翔，金晏冰，
申请(专利权)人：北京蓝晶微生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：