一株荧光假单胞菌及其在防治樱桃枝干病害中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株荧光假单胞菌及其在防治樱桃枝干病害中的应用。本发明专利技术自樱桃产区发病区域的健康植株根际土壤中筛选到对樱桃枝干病害有较强抑制效果的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)GH2

【技术实现步骤摘要】
一株荧光假单胞菌及其在防治樱桃枝干病害中的应用


[0001]本专利技术涉及一株荧光假单胞菌及其在防治樱桃枝干病害中的应用，属于微生物


技术介绍

[0002]樱桃枝干病害是樱桃生长期的一种常见病害，特别在幼苗移栽后及生长期的前三年发病严重。该病是由越橘间座壳(Diaporthe vaccinii)侵染引起，樱桃树一旦感染此病，常常导致樱桃产量的下降，影响种植效益；若发现不及时，随着病原菌不断积累，樱桃树近乎全部死亡，造成绝收。
[0003]针对该病，目前主要通过剪枯枝、清园等物理措施进行防范，但该方法不能有效清除病原物，特别是在枯枝附近的健康植株中往往已侵染该病菌，虽把枯枝剪掉，但病原物还可不断侵染，严重影响来年樱桃挂果。喷施化学农药虽然在一定程度上能够缓解枯枝病的发病状况，但对于渗透性较差的农药来说往往指标不治本。化学农药的大量使用还会带来一系列问题，如：引起越橘间座壳抗药性，使其防治难度加大，还会造成环境污染，并且樱桃农药残留严重威胁人类健康。生物防治由于具有防效高、专一性强、药效持久性好、环境友好，以及不易产生抗药性等优点，因而受到越来越多的青睐。但目前对于樱桃枝干病害生物防治报道少之又少。
[0004]荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)隶属于变形菌门、假单胞菌目、假单胞菌科的假单胞菌属的细菌，在植物病害生物防治中用途广泛。目前报道有用于防治黄连白绢病(CN202110929652.3)、烟草角斑病(CN200910088952.2)、烟草野火病(CN200810224386.9)、多种细菌性软腐病(CN201810449282.1)等，但是没有发现荧光假单胞菌用于防治樱桃枝干病害的报道。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本专利技术提供了一株荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)GH2
‑
1，该菌株及其发酵上清液对樱桃枝干病害菌均具拮抗效果，能够有效控制樱桃枝干病害的发生，可开发针对樱桃枝干病害的微生物农药，实现对樱桃枝干病害绿色、高效防治。
[0006]本专利技术首先自樱桃产区发病区域的健康植株根际土壤中分离，并经平板对峙培养法实验筛选到对樱桃枝干病害病原菌越橘间座壳(Diaporthe vaccinii)具有较强拮抗效果的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)GH2
‑
1，然后将该菌株于2017年09月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.14743。实验表明：菌株GH2
‑
1及其代谢产物均能有效抑制樱桃枝干病害菌生长，在樱桃枝干病害防治中具有广泛应用前景。
[0007]本专利技术还提供了上述荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)GH2
‑
1的生物制剂。
[0008]该生物制剂的制备方法包括：将荧光假单胞菌GH2
‑
1制备种子液后，将种子液接入
发酵培养基在25～30℃条件下发酵培养30～36h，得到发酵液，发酵液可以直接使用(液体制剂)，或者加入其他助剂，喷雾干燥制备成固体制剂，如可湿性粉剂等。
[0009]种子液培养基配方(质量比)：蛋白胨0.8～1.2％，牛肉粉0.2～0.4％，氯化钠0.4～0.6％，其余为水，调整pH7.3
±
0.1。优选种子液培养基配方(质量比)：蛋白胨1％，牛肉粉0.3％，氯化钠0.5％，其余为水，调整pH7.3
±
0.1。
[0010]发酵培养基配方(质量比)：蔗糖1.5～2.5％、可溶性淀粉1.5～2.5％、酵母浸粉1.0～2.0％、鱼蛋白胨0.3～0.5％、硫酸镁0.03～0.08％、磷酸二氢钾0.03～0.08％、碳酸钙0.5～0.8％，剩余为豆制品废水，pH调至7.0
‑
7.2。优选的，发酵培养基配方(质量比)：蔗糖2％、可溶性淀粉2％、酵母浸粉1.5％、鱼蛋白胨0.4％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.05％、碳酸钙0.6％，剩余为豆制品废水，pH调至7.0
‑
7.2。
[0011]本专利技术采用豆制品废水代替水作为发酵培养基，豆制品废水中含有丰富的蛋白质、糖类、矿物质、维生素等，可以提供营养物质，豆制品废水中蛋白质含量控制在16
‑
18％。
[0012]本专利技术还提供了荧光假单胞菌GH2
‑
1菌株、代谢物以及生物制剂在拮抗樱桃枝干病害病原菌越橘间座壳(Diaporthe vaccinii)，防治樱桃枝干病害方面的应用。
[0013]本专利技术的技术效果是：
[0014]1、防治樱桃枝干病害效果好
[0015]平板对峙实验表明：荧光假单胞菌GH2
‑
1菌株及其发酵上清液对樱桃枝干病原菌越橘间座壳(Diaporthe vaccinii)均具较强的拮抗效果，抑菌率分别为90.98％和87.45％；同时，该菌株液体制剂300倍稀释液田间对樱桃枝干病害防治效果为64.3％，能够有效控制樱桃枝干病害的发生。在樱桃枝干病害防治中具有广泛应用前景。
[0016]2、该菌株易于发酵生产，使用方式简单，适合大面积推广使用。
附图说明
[0017]图1为不同菌株对樱桃枝干病原菌越橘间座壳(Diaporthe vaccinii)的平板抑制效果；
[0018]图2为不同菌株对樱桃枝干病原菌越橘间座壳(Diaporthe vaccinii)的抑菌率比较；
[0019]图3为不同菌株发酵上清液对樱桃枝干病原菌越橘间座壳(Diaporthe vaccinii)的平板抑制效果；
[0020]图4为不同菌株发酵上清液对樱桃枝干病原菌越橘间座壳(Diaporthe vaccinii)的抑菌率比较；
[0021]图5为荧光假单胞菌GH2
‑
1单菌落形态。
具体实施方式
[0022]以下结合实施例来说明其效果。
[0023]实施例1：荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)菌株GH2
‑
1的分离与纯化
[0024]本专利技术的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)菌株GH2
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1是采用稀释涂布法从山东省潍坊市临朐县冶源镇樱桃产区发病区域的健康植株根际土壤中分离获得的，具体分离方法为：
[0025](1)土样采集
[0026]采用五点取样法采集樱桃枝干病害发病区域的健康樱桃根系，放入保鲜袋带回实验室；利用毛刷轻刷樱桃树根系，收集土壤即为根际土壤。
[0027](2)土壤悬液制备
[0028]准确称取1g根际土壤于盛有99mL无菌水的三角瓶中，三角瓶内含玻璃珠，置于28℃摇床中120～140rpm均匀震荡20～30min，然后置于55～60℃水浴锅中孵育25min，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)GH2
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1，所述菌株的保藏编号为CGMCC NO.14743。2.权利要求1所述的荧光假单胞菌GH2
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1菌株及其代谢产物在拮抗樱桃枝干病害病原菌越橘间座壳(Diaporthe vaccinii)中的应用。3.一种以权利要求1所述的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)GH2
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1为主要有效成分的生物制剂。4.权利要求3所述的生物防治制剂的制备方法，其特征是，所述制备方法包括：将荧光假单胞菌GH2
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1制备种子液后，将种子液接入发酵培养基在25～30℃条件下发酵培养30～36h，得到发酵液。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征是，所述种子液培养基，按质量比计，其成为及含量为：蛋白胨0....

【专利技术属性】
技术研发人员：张淑静，武海卫，马丙尧，刘幸红，王孟筱，孙超，王霞，高嘉，牛赡光，
申请(专利权)人：山东省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：