一种检测中东呼吸综合征病毒的MERS冻干管及其制备方法、冻干试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种检测中东呼吸综合征病毒的MERS冻干管及其制备方法、冻干试剂盒。一种检测中东呼吸综合征病毒的冻干试剂盒，所述试剂盒包括MERS冻干管、MERS阳性对照和阴性对照，所述MERS冻干管包括Taq酶、M

Mers freeze-drying tube for detecting Middle East respiratory syndrome virus, its preparation method and freeze-drying Kit

【技术实现步骤摘要】
一种检测中东呼吸综合征病毒的MERS冻干管及其制备方法、冻干试剂盒


[0001]本专利技术涉及中东呼吸综合征检测领域，具体涉及了一种检测中东呼吸综合征病毒的 MERS冻干管及其制备方法、冻干试剂盒。

技术介绍

[0002]中东呼吸综合征是冠状病毒引起的病毒性肺炎的一种呼吸道传染病。首先是2012年在沙特被发现的，它的症状类似于SARS，和最近流行的新型冠状病毒肺炎，由于它是在中东地区发生的，所以称之为MERS，MERS简称为MERS。症状和SARS还有新冠肺炎相似，主要都是发热、咽痛、乏力、咳嗽，严重的情况可以出现呼吸困难、呼吸窘迫，甚至可以引起呼吸衰竭，严重的可以危及生命，也可以引起多脏器的损害。相对于SARS流行强度要弱一些，但是也是近几年来比较著名的传染病，共同的特点都是冠状病毒的感染。
[0003]中东呼吸综合征冠状病毒(MERS
‑
CoV)属于冠状病毒科,β类冠状病毒的2c亚群，是一种具有包膜、基因组为线性非节段单股正链的RNA病毒。病毒粒子呈球形，直径为120
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160 nm。基因组全长约30kb。目前已经完成多株MERS
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CoV的全基因组序列测定，目前可通过测序、荧光定量PCR等方法进行检测，荧光定量PCR方法目前均采用液态反应体系试剂盒。
[0004]如中国专利技术专利CN109371174A公开的一种特异性检测样品中中东呼吸综合征冠状病毒的试剂盒，组分包括PCR反应液、酶混合液、阴性质控品和阳性质控品。其中PCR反应液主要含有相关的引物和探针、反应缓冲液、Mg
2+
和dNTP等，酶混合液主要含有逆转录酶和热启动Taq酶，阴性质控品为无RNase和DNase水，阳性质控品为含有中东呼吸综合征冠状病毒检测靶序列的RNA。PCR反应液中用于核酸扩增的引物为P1和P2，P1和P2为针对中东呼吸综合征冠状病毒基因组群特异性保守序列设计并经预实验筛选出的特异性引物；PCR 反应液中用于荧光信号监测的寡核苷酸探针为Probel，Probel为针对中东呼吸综合征冠状病毒基因组群特异性保守序列设计并经预实验筛选出的特异性探针，其中荧光报告基团X1为 FAM，荧光淬灭基团Y1为MGB。
[0005]又如中国专利技术专利CN105624335A公开了一种基因检测中东呼吸综合征冠状病毒的试剂盒，特别是涉及一种利用多重实时荧光聚合酶链式反应技术同时检测中东呼吸综合征冠状病毒UPE和N基因。试剂盒主要包括RT
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PCR反应液、引物探针混合液、RT
‑
PCR反应酶系、 DEPC H2O以及分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒。引物探针混合液由UPE和N基因特异性的正、反向引物，特异性的探针组成，其特征在于UPE基因特异性的正向和反向引物的序列分别是5
’‑
TTTCCACTGTTTTCGTGCC
‑3’
和5
’‑
GACCCATAGTAGCGCAGAG
‑3’
；UPE 基因特异性的探针的序列是5
’‑
CAGTTCCTCTTCACATAATCGCCCCGAG
‑3’
，探针的两端分别结合有荧光发生基团FAM和荧光淬灭基团BHQ1；N基因特异性的正向和反向引物的序列分别是5
’‑
GTGCTGTTTCCTTTGCCGATA
‑3’
和5
’‑
GGTAAGCCCAGTGTACCAAG
‑3’
；N基因特异性的探针的序列是5
’‑
ACAGTGTTATTTGGTGCAGCTCGTGGTT
‑3’
，探针的两端分别结合有荧光发生基团HEX和荧光淬灭基团BHQ1。
[0006]但是包括上述专利技术在内的现有用于检测中东呼吸综合征冠状病毒的试剂盒均是液体保存形式，使用时需要反复冻融，就会影响试剂性能，且需要
‑
20℃保存条件，运输需要干冰等保护措施。

技术实现思路

[0007]为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供了一种检测中东呼吸综合征病毒的 MERS冻干管及其制备方法、冻干试剂盒。本专利技术将采用酶、buffer、引物探针、dNTP、冻干保护剂等全预混成冻干反应体系形成冻干型试剂盒，可于4
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25℃稳定保存。如此，可以快速、高效、定性的检测样本中的中东呼吸综合症冠状病毒，而且全封闭反应，仅一次加样操作；本专利技术为冻干试剂盒，可实现常温保存和运输。
[0008]本专利技术所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：
[0009]第一方面，一种检测中东呼吸综合征病毒的冻干试剂盒，所述试剂盒包括MERS冻干管、 MERS阳性对照和阴性对照，所述MERS冻干管包括Taq酶、M
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MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、Buffer、引物探针混合物、dNTP、MgCl2和冻干保护剂；所述冻干保护剂包括3
‑
8％海藻糖、1
‑
5％甘露醇、0.1
‑
2％BSA、1
‑
3％乳糖、0.05
‑
0.2％tween80；
[0010]所述MERS阳性对照包括具有目标基因的质粒；
[0011]所述引物探针混合物包括有正向引物、反向引物和寡核苷酸探针，且正向引物、反向引物和寡核苷酸探针的序列分别为：
[0012]正向引物序列：TTAGAGACTCCCTGCCGCTGTA
[0013]反向引物序列：GAATCTTTCTTCGCAATGCCTATG
[0014]寡核苷酸探针序列：CTTCACAAGGGTTTGTGGTGGTCAAT。
[0015]在本专利技术中，进一步地，所述冻干保护剂为5％海藻糖、3％甘露醇、1％BSA、2％乳糖何 0.1％tween80。
[0016]在本专利技术中，进一步地，所述阴性对照为无菌TE溶液。
[0017]在本专利技术中，进一步地，所述寡核苷酸探针的3
’
端标记有荧光淬灭基团，5
’
端分别标记有不同的荧光报告基团。
[0018]在本专利技术中，进一步地，所述目标基因为orf1ab基因。
[0019]一种检测中东呼吸综合征病毒的MERS冻干管，所述MERS冻干管包括Taq酶、M
‑
MLV 逆转录酶、RNA酶抑制剂、Buffer、引物探针混合物、dNTP、MgCl2和冻干保护剂；所述冻干保护剂包括3
‑
8％海藻糖、1
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5％甘露醇、0.1
‑
2％BSA、1
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3％乳糖、0.05
‑
0.2％tween80。
[0020]一种检测中东呼吸综合征病毒的MERS冻干管的制备方法，其包括以下步骤：
[0021](1)配制冻干反应体系：Taq酶、M
‑
MLV逆转录本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测中东呼吸综合征病毒的冻干试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括MERS冻干管、MERS阳性对照和阴性对照，所述MERS冻干管包括Taq酶、M
‑
MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、Buffer、引物探针混合物、dNTP、MgCl2和冻干保护剂；所述冻干保护剂包括3
‑
8％海藻糖、1
‑
5％甘露醇、0.1
‑
2％BSA、1
‑
3％乳糖、0.05
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0.2％tween80；所述MERS阳性对照包括具有目标基因的质粒；所述引物探针混合物包括有正向引物、反向引物和寡核苷酸探针，且正向引物、反向引物和寡核苷酸探针的序列分别为：正向引物序列：TTAGAGACTCCCTGCCGCTGTA反向引物序列：GAATCTTTCTTCGCAATGCCTATG寡核苷酸探针序列：CTTCACAAGGGTTTGTGGTGGTCAAT。2.根据权利要求1所述的检测中东呼吸综合征病毒的冻干试剂盒，其特征在于，所述冻干保护剂为5％海藻糖、3％甘露醇、1％BSA、2％乳糖何0.1％tween80。3.根据权利要求1所述的检测中东呼吸综合征病毒的冻干试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为无菌TE溶液。4.根据权利要求1所述的检测中东呼吸综合征病毒的冻干试剂盒，其特征在于，所述寡核苷酸探针的3
’
端标记有荧光淬灭基团，5
’
端分别标记有不同的荧光报告基团。5.根据权利要求1所述的检测中东呼吸综合征病毒的冻干试剂盒，其特征在于，所述目标基因为orf1ab基因。6.一种检测中东呼吸综合征病毒的MERS冻干管，其特征在于，所述MERS冻干管包括Taq酶、M
‑
MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、Buffer、引物探针混合物、dNTP、MgCl2和冻干保护剂；所述冻干保护剂包括3
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8％海...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱海，
申请(专利权)人：苏州易科新创科学仪器有限公司，
类型：发明
国别省市：