一种抑制黄嘌呤氧化酶的沙棘提取物的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种抑制黄嘌呤氧化酶的沙棘提取物的制备方法及应用。属于化合物提取技术领域，步骤：1、制得沙棘乙醇提取物；2、产生Fr 1、Fr 2、Fr 3、Fr 4、Fr 5、Fr 6及Fr 7七个组分；3、制得化合物1；4、制得化合物2、3、4；5、制得化合物5、6、7；通过优化反应条件，最大程度的提取了沙棘中的有效成分，提取得到的沙棘提取物表现出优异的黄嘌呤氧化酶抑制活性，在抗高尿酸血症方面具有巨大潜力；所述沙棘中含有的抗黄嘌呤氧化酶具有显著的活性；对沙棘在药食两用植物进一步功能食品方面的应用提供了理论指导。导。导。

Preparation method and application of seabuckthorn Extract Inhibiting xanthine oxidase

【技术实现步骤摘要】
一种抑制黄嘌呤氧化酶的沙棘提取物的制备方法及应用


[0001]本专利技术属于化合物提取
，涉及一种抑制黄嘌呤氧化酶的沙棘提取物的制备方法及应用；具体涉及一种具有抑制黄嘌呤氧化酶活性的沙棘提取物及其制备方法、应用。

技术介绍

[0002]现有技术中，黄嘌呤氧化酶(XO)是存在于包括人类在内的各种脊椎动物中的胞质酶，属于钼黄酮蛋白家族，其广泛存在于肾脏、肺、心脏和血管内皮中。黄嘌呤氧化酶是包括人类在内的一些物种中控制尿酸产生的关键酶，控制着人体内嘌呤代谢中次黄嘌呤转化为黄嘌呤和黄嘌呤转化为尿酸的两部关键反应，并且其在肝脏和肠道中活性最好。黄嘌呤氧化酶的活性过度活跃，则会引发体内尿酸含量升高，从而导致高尿酸血症，痛风等疾病。
[0003]沙棘果(Hippophae Fructus，别名：达尔，沙枣)，属于胡颓子科沙棘属植物沙棘的成熟的种子，主要分布在华北、西北、西南等地。沙棘是中国一种传统中药，自古便被用于温养脾气，开胃消食，活血祛瘀；也能用于治疗止咳祛痰，胸痹心痛，跌打损伤，妇女月经不调等症状。在药理学研究方面，沙棘果具有降低胆固醇，治疗心绞痛、慢性气管炎、胃和十二指肠溃疡、消化不良等疾病，其外还具有防治冠状动脉粥样硬化性心脏病的作用。但是，沙棘果在抗高尿酸血症方面研究较少。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术提供了一种具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的沙棘提取物和7种天然化合物。
[0005]本专利技术还提供了一种上述沙棘果提取物的制备方法。
[0006]本专利技术还提供了一种上述沙棘果提取物的应用。
[0007]本专利技术的技术方案是：本专利技术所述的一种抑制黄嘌呤氧化酶的沙棘提取物的制备方法，所述沙棘提取物具有下述通式(I)的结构：
[0008][0009][0010]进一步的，其具体制备步骤如下：
[0011]步骤(1)、干燥沙棘果利用80％乙醇提取，抽滤，收集滤液，滤液减压浓缩，制得沙棘乙醇提取物；
[0012]在制得的沙棘乙醇提取物中加入5L纯净水进行溶解，再分别利用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，分别制得石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物及正丁醇萃取物；
[0013]步骤(2)、将乙酸乙酯萃取物使用硅胶柱进行分离，并使用二氯甲烷/甲醇体系梯度进行洗脱，从而产生七个组分，即：Fr 1、Fr 2、Fr 3、Fr 4、Fr 5、Fr 6及Fr 7；
[0014]步骤(3)、将组分中产生的Fr 5使用硅胶柱进行分离，并使用石油醚/乙酸乙酯体系梯度洗脱，从而获得八个组分，即Fr 5a、Fr 5b、Fr 5c、Fr 5d、Fr 5e、Fr 5f、Fr 5g及Fr 5h；
[0015]其中，在获得的八个组分中，Fr 5g先经过Sephadex LH
‑
20富集，后反相ODS粗分除杂，最后和半制备型HPLC纯化，从而得到化合物1；
[0016]步骤(4)、将组分中产生的Fr 6使用硅胶柱进行分离，并使用石油醚/乙酸乙酯体系梯度洗脱，从而得到七个组分，即Fr 6a、Fr 6b、Fr 6c、Fr 6d、Fr 6e、Fr 6f及Fr 6g；
[0017]其中，在获得的七个组分中，Fr 6c在THF/CH2Cl2混合体系中重结晶，从而得到化合物2；
[0018]Fr 6d经过Sephadex LH
‑
20富集除杂后，在THF/CH2Cl2混合体系重结晶，从而得到化合物3；
[0019]Fr 6e经过Sephadex LH
‑
20富集除杂后，用半制备型HPLC分离，从而得到化合物4；
[0020]步骤(5)、将组分中产生的Fr 7使用硅胶柱进行分离，并使用石油醚/乙酸乙酯体系梯度洗脱，从而获得七个组分，即：Fr 7a、Fr 7b、Fr 7c、Fr 7d、Fr 7e、Fr 7f、Fr 7g及Fr7h；
[0021]其中，在获得的七个组分中，Fr 7c硅胶柱进行分离，并使用二氯甲烷/甲醇体系等度洗脱，从而得到：Fr 7c.1和Fr 7c.2；
[0022]Fr 7c.1和Fr 7c.2再经过Sephadex LH
‑
20分离后，在二氯甲烷/甲醇体系中重结晶，从而分别得到化合物5和化合物6。
[0023]最后，将用试管接到的经过硅胶柱的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂静置，待溶剂挥发后，结晶得到化合物7。
[0024]进一步的，在步骤(1)中，所述沙棘乙醇提取物的具体提取过程为：将10kg沙棘在80℃下用3
×
20L的80％乙醇提取2h，提取液过滤后减压浓缩，从而得到无醇味的沙棘乙醇提取物。
[0025]进一步的，在步骤(2)中，所述硅胶柱为100
‑
200目；
[0026]在所述逐步洗脱中，CH2Cl2/MeOH的体积比为：100/1、80/1、50/1、20/1、10/、8/10、6/1、4/1、2和1/1。
[0027]进一步的，在步骤(3)中，所述分离Fr 5的硅胶柱所用硅胶为200
‑
300目；
[0028]所述石油醚/乙酸乙酯体系的体积比为：15/1
‑
2/1；
[0029]在所述Sephadex LH
‑
20中，流动相为MeOH/CH2Cl2＝1/1；
[0030]所述反相ODS梯度洗脱所用流动相为：MA/H2O，其体积比分别为：10/90、30/70、50/50、80/20；
[0031]所述化合物1的半制备型HPLC的条件为：λ＝210
‑
385nm，流速为2.5mL/min；流动相：MA:H2O(0.3％甲酸)＝63:37(v/v)；出峰时间为22.3min。
[0032]进一步的，在步骤(4)中，所述硅胶柱所用硅胶为200
‑
300目，流动相为体积比为：3/1
‑
1.5/1的石油醚/乙酸乙酯；
[0033]所述Sephadex LH
‑
20中，流动相为：MeOH；
[0034]所述化合物2重结晶的THF/CH2Cl2体系体积比为：1/42；
[0035]所述化合物3重结晶的THF/CH2Cl2体系体积比为：1/50；
[0036]所述化合物4的半制备HPLC的条件为：λ＝210
‑
385nm，流速为2.5mL/min，流动相为MA:H2O＝35:65,0.3％甲酸，出峰时间为23.0min。
[0037]进一步的，在步骤(5)中，所述分离Fr 7的硅胶柱所用硅胶为200
‑
300目，石油醚/乙酸乙酯体系的体积比为2/1
‑
1/4；
[0038]所述分离Fr 7c的硅胶柱所用硅胶为200
‑
300目，二氯甲烷/甲醇体系的体积比为：15/1；
[0039]所述Sephadex LH
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制黄嘌呤氧化酶的沙棘提取物的制备方法，其特征在于，所述沙棘提取物具有下述通式(I)的结构：2.根据权利要求1所述的一种抑制黄嘌呤氧化酶的沙棘提取物的制备方法，其特征在于：其具体制备步骤如下：步骤(1)、干燥沙棘果利用80％乙醇提取，抽滤，收集滤液，滤液减压浓缩，制得沙棘乙醇提取物；在制得的沙棘乙醇提取物中加入5L纯净水进行溶解，再分别利用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，分别制得石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物及正丁醇萃取物；步骤(2)、将乙酸乙酯萃取物使用硅胶柱进行分离，并使用二氯甲烷/甲醇体系梯度进行洗脱，从而产生七个组分，即：Fr 1、Fr 2、Fr 3、Fr 4、Fr 5、Fr 6及Fr 7；步骤(3)、将组分中产生的Fr 5使用硅胶柱进行分离，并使用石油醚/乙酸乙酯体系梯度洗脱，从而获得八个组分，即Fr 5a、Fr 5b、Fr 5c、Fr 5d、Fr 5e、Fr 5f、Fr 5g及Fr 5h；其中，在获得的八个组分中，Fr 5g先经过Sephadex LH
‑
20富集，后反相ODS粗分除杂，最后和半制备型HPLC纯化，从而得到化合物1；步骤(4)、将组分中产生的Fr 6使用硅胶柱进行分离，并使用石油醚/乙酸乙酯体系梯度洗脱，从而得到七个组分，即Fr 6a、Fr 6b、Fr 6c、Fr 6d、Fr 6e、Fr 6f及Fr 6g；其中，在获得的七个组分中，Fr 6c在THF/CH2Cl2混合体系中重结晶，从而得到化合物2；Fr 6d经过Sephadex LH
‑
20富集除杂后，在THF/CH2Cl2混合体系重结晶，从而得到化合物3；Fr 6e经过Sephadex LH
‑
20富集除杂后，用半制备型HPLC分离，从而得到化合物4；步骤(5)、将组分中产生的Fr 7使用硅胶柱进行分离，并使用石油醚/乙酸乙酯体系梯度洗脱，从而获得七个组分，即：Fr 7a、Fr 7b、Fr 7c、Fr 7d、Fr 7e、Fr 7f、Fr 7g及Fr7h；
其中，在获得的七个组分中，Fr 7c通过硅胶柱进行分离，并使用二氯甲烷/甲醇体系等度洗脱，得到：Fr 7c.1和Fr 7c.2；将Fr 7c.1和Fr 7c.2再经过Sephadex LH
‑
20分离后，在二氯甲烷/甲醇体系中重结晶，从而分别得到化合物5和化合物6；最后，将用试管接到的经过硅胶柱的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂静置，待溶剂挥发后，结晶得到化合物7。3.根据权利要求2所述的一种抑制黄嘌呤氧化酶的沙棘提取物的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述沙棘乙醇提取物的具体提取过程为：将10kg沙棘在80℃下用3
×
20L的80％乙醇提取2h，提取液过滤后减压浓缩，从而得到无醇味的沙棘乙醇提取物。4.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖志新，吕伸明，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：