一种淋巴结来源淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种淋巴结来源淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞株，来源于人淋巴瘤细胞裸鼠移植瘤模型中的淋巴结微环境，其细胞名称为小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞HXLyAF

A lymphoma associated fibroblast tumor cell line derived from lymph nodes and its application

【技术实现步骤摘要】
一种淋巴结来源淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术属于生物医学
，具体的说，是一种淋巴结来源淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞株及其应用。

技术介绍

[0002]淋巴瘤是一组起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤，属于常见肿瘤之一，近年来发病率逐渐上升，主要表现为无痛性淋巴结肿大，肝脾肿大，全身各组织器官均可受累，伴发热、盗汗、消瘦、瘙痒等全身症状。根据瘤细胞分为霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma,简称HL）和非霍奇金淋巴瘤（non Hodgkin lymphoma ,简称NHL）两类。
[0003]肿瘤的发生、生长及转移与肿瘤细胞所处的内外环境有着密切关系，称为肿瘤微环境，它不仅包括肿瘤所在组织的结构、功能和代谢，亦与肿瘤细胞自身的（核和胞质）内在环境有关。肿瘤微环境与肿瘤细胞相互作用，影响肿瘤的发生、发展和转归。
[0004]癌相关成纤维细胞（cancer
‑
associated fibroblasts, CAFs）是构成实体肿瘤微环境的主要细胞成分，具有高度异质性、可塑性和多向分化潜能，通过重塑肿瘤微环境，在实体瘤的发生、发展、转移、化疗耐药及恶性转归中起着复杂而重要的作用。目前认为，CAFs的前体细胞主要有7种来源：骨髓间充质干细胞、组织中固有成纤维细胞、星形细胞、上皮细胞间质转化、内皮细胞间质转化、纤维细胞和其他细胞，如周细胞、平滑肌细胞、脂肪细胞和肿瘤干细胞等，因此，淋巴结微环境中有多种CAFs前体细胞。
[0005]由于不同来源的CAFs在肿瘤的进展中起不同的作用，因此构建不同来源的CAFs细胞有助于深入探索肿瘤病理。现有技术中，公开号为CN108795851A的专利技术专利公开了一种人唾液腺腺样囊性癌癌相关成纤维细胞系CAF
‑
SA的建立方法及其应用，为唾液腺腺样囊性癌研究及药物研发提供了良好的实验模型。但目前针对淋巴瘤，尤其是淋巴结来源的癌相关成纤维细胞仍未见研究和报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞HXLyAF
‑
KLN，是一株淋巴结来源小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞株，该细胞株为国内外首次建立的淋巴结来源淋巴瘤相关小鼠成纤维细胞肿瘤细胞株。为此，本专利技术还提供了该细胞株在构建小鼠成纤维细胞肿瘤动物模型、恶性淋巴结微环境模型、3D肿瘤培养体系和类器官体系模型、淋巴结微环境与淋巴瘤进展和耐药的关系模型中的应用。
[0007]本专利技术通过下述技术方案实现：一种淋巴结来源淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞株，来源于人淋巴瘤细胞裸鼠移植瘤模型中的淋巴结微环境，其细胞名称为小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞HXLyAF
‑
KLN，保藏编号为CCTCC NO：C2021107，保藏日期为2021年12月09日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保存单位地址为中国湖北省武汉市武汉大学。
[0008]所述淋巴结来源小鼠成纤维细胞肿瘤细胞株来源于人间变性大细胞淋巴瘤细胞
Karpas299裸鼠移植瘤模型，取自小鼠淋巴瘤细胞浸润淋巴结，是一株淋巴结来源淋巴瘤相关小鼠成纤维细胞肿瘤细胞株。该细胞株的原代细胞来源于人间变性大细胞淋巴瘤移植瘤模型小鼠；取肿大的淋巴结，剪碎成组织块，体外接种培养，去除悬浮细胞，获得贴壁生长细胞；细胞传代10代后，形态较前均一，以不规则多角形和纺锤形为主，核大，核仁清晰，胞浆有短粗突起，无接触抑制，可交叉重叠生长，细胞密集时成团聚集；在体外稳定无限传代，具高致瘤性；命名为小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞HXLyAF
‑
KLN。
[0009]本专利技术涉及的小鼠成纤维细胞肿瘤细胞株HXLyAF
‑
KLN具有以下生物学特性：经转录组测序分析，为小鼠来源细胞。
[0010]经western bloting和流式细胞检测结果显示：该细胞高表达α
‑
SMA，Vimentin，β
‑
catenin，HSP47，PDGFR
‑
α，PDGFR
‑
β，为成纤维细胞来源肿瘤。
[0011]HXLyAF
‑
KLN细胞在RPMI 1640完全培养基中贴壁生长，呈梭形或不规则多边形，体外培养生长良好，按1.5
×
105/55cm2密度接种，3~4天传代一次，已经体外连续培养超过10个月，传代超过60代，群体倍增超过170代，连续传代过程中细胞形态稳定、增殖动力学稳定、遗传学特征稳定，状态良好；经液氮或超低温冻存、复苏后性状不变，为一株永生化细胞株。
[0012]采用MTT和台盼蓝染色细胞计数法绘制HXLyAF
‑
KLN细胞的生长曲线，计算细胞倍增时间为25~31小时，增殖速率稳定，可见分裂相，分裂后细胞仍贴壁；证实细胞株具有增殖动力学稳定性。
[0013]采用PI染色法和染色体核型分析证实，HXLyAF
‑
KLN细胞为超6倍体细胞，具有细胞周期稳定性。
[0014]本专利技术还提供了小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞HXLyAF
‑
KLN在构建小鼠成纤维细胞肿瘤动物模型中的应用，在构建恶性淋巴结微环境模型中的应用，在构建3D肿瘤培养体系和类器官体系模型中的应用，在构建淋巴结微环境与淋巴瘤进展和耐药的关系模型中的应用。可获取淋巴瘤细胞所导致的成纤维细胞肿瘤化生的相关机制，并为探索靶向CAFs的淋巴瘤治疗新方法提供更多新的思路和研究方向。
[0015]本专利技术与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：（1）本专利技术为目前首次建立的淋巴结来源小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞HXLyAF
‑
KLN，该细胞株具有高致瘤性，可用于构建小鼠成纤维细胞肿瘤动物模型，恶性淋巴结微环境模型，3D肿瘤培养体系和类器官体系模型。
[0016]（2）本专利技术可将小鼠成纤维细胞肿瘤细胞株HXLyAF
‑
KLN应用于淋巴瘤微环境的研究中，构建淋巴结微环境与淋巴瘤进展和耐药的关系模型，获取淋巴瘤细胞导致成纤维细胞肿瘤化生的相关数据，获取淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤与淋巴瘤微环境的关系的相关数据，为其在治疗淋巴瘤过程中获取淋巴瘤化疗耐药等相关数据。
附图说明
[0017]图1为倒置相差显微镜下HXLyAF
‑
KLN细胞观察图（
×
200）。
[0018]图2 为透视电镜下HXLyAF
‑
KLN细胞超微结构图（
×
6000）。
[0019]图3为HXLyAF
‑
KLN细胞生长曲线图。
[0020]图4为HXLyAF
‑
KLN细胞周期图。
[0021]图5为Western blotting检测HXLyAF
‑
KLN细胞α
‑
SMA，Vi本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种淋巴结来源淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞株，其特征在于：来源于人淋巴瘤细胞裸鼠移植瘤模型中的淋巴结微环境，其细胞名称为小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞HXLyAF
‑
KLN，保藏编号为CCTCC NO：C2021107，保藏日期为2021年12月09日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心。2.将权利要求1所述小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞HXLyAF
‑
KLN在构建小鼠成纤维细胞肿瘤动物模型中的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾玲，徐郡，李圆圆，刘瀚旻，
申请(专利权)人：四川大学华西第二医院，
类型：发明
国别省市：