一种小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株G422

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术涉及一种细胞株，尤其涉及一种胶质母细胞瘤细胞株，具体涉及一种小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株及其应用。

技术介绍

[0002]胶质母细胞瘤(glioblastoma，GBM)是恶性程度最高的脑原发肿瘤，GBM的一个重要恶性病理特征是向周围扩散呈浸润性增长，与周围正常组织界限不清，手术难以完全切除
[1]。胶质瘤术后替莫唑胺(Temozolomide，TMZ)同步放化疗并联合6个月替莫唑胺辅助化疗(radiotherapy，RT)，是目前新诊断胶质母细胞瘤的标准治疗方案
[2]。经常规手术、放化疗综合治疗后，预后差，患者的中位生存期从12个月仅延长至约15个月，即治疗有效但很有限。因此，延长胶质瘤患者生存，是当前迫切的临床需要。很多治疗胶质瘤的药物已经做了临床前药效评价工作，但是还未见报道能完成临床转化的药物。其中的一个重要原因是临床前药效评价模型与患者体内胶质瘤的生物学治疗特点有很大差异，使得实验治疗结果难以与临床疗效匹配。因此，建立一种稳定且符合恶性胶质瘤生物学行为及临床常规治疗反应特征的临床前药效评价模型是开发新药的重要因素。即模型须符合胶质瘤呈高度侵袭性，组织学倾向原发性胶质母细胞瘤。
[0003]致癌物诱导的自发小鼠肿瘤的同种异体原位移植模型因为在遗传组成、异质性维持、免疫环境和血脑屏障等方面的优势，使其成为更为经济、临床相似度更高的临床前药物模型。GL261和CT
‑
2A是当前最常用的化学致癌物诱导小鼠胶质瘤模型，常用于胶质瘤的免疫治疗研究。其中，GL261原位脑肿瘤H&E染色显示肿瘤边缘界限清晰，未见浸润式生长
[3]，不符合胶质瘤高侵袭性的生物学行为特点。该细胞常通过体外培养扩增后再接种至小鼠颅内
[4,5]，因当前的培养技术通常会促进细胞的同质化，这不能更好的维持其异质性
[6]。经过免疫相关治疗，GL261原位荷瘤小鼠更易获得长期存活，且更易获得免疫记忆
[4,5]。GL261原位模型最主要的缺点在于其具备中等免疫原性，与临床GBM组织的免疫细胞浸润特征及PD
‑
1治疗无效不符
[7]。
[0004]CT
‑
2A模型较GL261模型具有更好的肿瘤异质性、侵袭性和治疗的抵抗性，但其免疫原性还不清楚，模型和荷瘤小鼠生存时间差异
[8]。Liu等人
[9]报道当CT
‑
2A细胞的颅内注射数量下降为5
×
104个时，荷瘤小鼠25日内全部死亡，中位生存期反而缩短至17.5日，显示较宽的生存时间范围，是一种不稳定的表现；Ramachandran等人
[10]报道，同样的颅内接种数量(5
×
104个)，CT
‑
2A荷瘤小鼠全部死亡时间却推迟至40日左右；Martikainen等人
[11]报道，同样的颅内接种数量(5
×
104个)，中位生存期为35日左右，接种14只小鼠中有2只出现长期存活的现象。以上数据显示，CT
‑
2A颅内接种的稳定性存在很大的波动性，存活时间窗过长。因此在CT
‑
2A模型中使用存活时间来判断药物疗效可能有很大的不确定性。

技术实现思路

[0005]鉴于上述现有技术及GL261和CT
‑
2A模型的应用之局限性和不足，本专利技术的任务是
提供一种小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株及其应用，并提供一种建立胶质母细胞瘤动物模型的方法。
[0006]实现本专利技术的技术方案是：本专利技术提供的小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株命名为：小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤G422
TN
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GBM，于2020年12月17日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：武汉市武昌区珞珈山武汉大学)，保藏编号为CCTCC NO:C2020267。
[0007]本专利技术经脑内纯化G422肿瘤细胞，使其侵袭性更高，纯化后的肿瘤细胞全基因组DNA测序，发现其基因型为：IDH1/2WTChromosome1/19IntactTERT
‑
promoterWTATRXMutantTrp53Mutant，符合人源三阴型(Triple Negative,TN)原发胶质母细胞瘤亚型分型标准，命名为小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株G422
TN
‑
GBM。
[0008]本专利技术提供的小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株之应用，包括a.筛选治疗胶质母细胞瘤的药物；b.建立胶质母细胞瘤动物模型；c.筛选胶质母细胞瘤相关生物标志物；d.研究胶质母细胞瘤发病机制。
[0009]本专利技术提供的建立胶质母细胞瘤动物模型的方法，包含将本专利技术提供的小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株注射到动物脑纹状体内的步骤，所述的动物为非人的哺乳动物，所述的动物可以为小鼠、大鼠、兔、狗、羊、猪或猴。
[0010]本专利技术用本专利技术提供的小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株G422
TN
‑
GBM建立了一种更加稳定可靠的小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤的动物模型，即小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤G422
TN
‑
GBM模型，使该种荷瘤小鼠存活时间稳定在14
‑
23天，中位生存期稳定在16
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19天，远优于现有的GL261和CT
‑
2A同类胶质瘤模型。G422
TN
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GBM的肿瘤组织免疫组化特征为：GFAP
+
Vimentin
+
CD3
‑
，早期即具有高侵袭性。相较于目前常用的GL261和CT
‑
2A模型，本专利技术建立的G422
TN
‑
GBM动物模型有以下优势：1、基因型和病理分子、特异免疫反应特征确定；2、体内传代更好地维系肿瘤异质性；3、脑内接种，提供血脑屏障以及肿瘤与脑基质相互作用的微环境，并在具有完善免疫系统的宿主中表现出非免疫原性；4、具备高侵袭性，呈浸润式生长，血管丰富；5、荷瘤小鼠生存期稳定且高度可复制；6、具备同临床GBM相似的治疗反应。
[0011]目前现有技术提供的胶质瘤模型，对单独放疗或替莫唑胺单药即能获得极佳的治疗效果，替莫唑胺同步放化疗很容易获得长期存活。这显然不符合GBM难治性的临床治疗反应特征。因此，在这种治疗反应特征的模型中，获得的单药或联合治疗很大程度上不能准确的反应其治疗的有效性。许多临床前研究在接种肿瘤的早期，甚至在刚接种就给予药物治疗，这掩盖临床大多数胶质瘤患者确诊即中晚期的事实，不能良好地反映临床GBM的病程和病理特征。到目前为止没有其它胶质瘤模型概括了难治性人胶质母细胞瘤的所有这些治疗特征，且鲜有不同时间点的给药干预用于胶质瘤临床前药物治疗模型，不能模拟胶质瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株G422
TN
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GBM，其特征在于，所述小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株G422
TN
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GBM的保藏编号为：CCTCC NO:C2020267。2.一种小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株G422
TN
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GBM，其特征在于具有以下分子特征：IDH1/2野生型，Chr1/19完整，TERT启动子突变阴性，并伴有ATRX突变和Trp53突变。3.权利要求1或2所述的小鼠三阴型原发胶质母细胞瘤细胞株G422
TN
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GBM在下述a至d各项中之一项之应用：a.筛选治疗胶质母细胞瘤的药物；b.建立胶质母细胞瘤动物模型；c.筛选胶质母细胞瘤相关生物标志物；d.研究胶质母细胞瘤发病机制。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，在b项中所述的胶质母细胞瘤动物模型为高侵袭三阴型胶质母细胞瘤动物模型。5.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓钎，刘锋，许晓红，余上斌，陈若乔，李春阳，尹松林，张婷婷，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
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