一种同期放化疗后人结直肠癌细胞及其构建方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种同期放化疗后人结直肠癌细胞HCT116CRR及其构建方法和应用，制备得到了能够体外培养生长稳定、能稳定传代，能在裸鼠体内成瘤且保持其生物学特性的同期放化疗后人结直肠癌细胞株，可以方便的建立体外的同期放化疗抵抗人结直肠癌动物模型，可应用于制备、筛选、评价抗人结直肠癌药物。评价抗人结直肠癌药物。评价抗人结直肠癌药物。

【技术实现步骤摘要】
一种同期放化疗后人结直肠癌细胞及其构建方法及应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种同期放化疗后人结直肠癌细胞HCT116CRR及其构建方法及应用。

技术介绍

[0002]结肠直肠癌（carcinoma of colon and rectum）胃肠道中常见的恶性肿瘤，早期症状不明显，随着癌肿的增大而表现排便习惯改变、便血、腹泻、腹泻与便秘交替、局部腹痛等症状，晚期则表现贫血、体重减轻等全身症状。其发病率和病死率在消化系统恶性肿瘤中仅次于胃癌、食管癌和原发性肝癌。
[0003]放、化疗是大肠癌特别是直肠癌综合治疗的重要手段，在同期放化疗应用日趋广泛的同时，放化疗抵抗的问题也日趋凸显，现有研究多从放疗抵抗或化疗耐药单方面探讨肿瘤细胞对治疗产生耐受的机制，而肿瘤细胞对同期放化疗产生耐受有不同于对单独放疗或化疗产生抵抗的特殊原因。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于，提供一种同期放化疗后人结直肠癌细胞HCT116CRR及其构建方法及应用。
[0005]本专利技术的具体技术方案为：一种同期放化疗后人结直肠癌细胞，命名为人结直肠癌细胞HCT116CRR，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：C2021299。
[0006]该人结直肠癌细胞HCT116CRR的保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏单位的地址位于中国 武汉 武汉大学，保藏日期为2021年10月27日，该人肝结直肠癌细胞HCT116CRR被命名为人结直肠癌细胞HCT116CRR。
[0007]本专利技术所述的人结直肠癌细胞HCT116CRR的构建方法，包括如下步骤：1）选取人结直肠癌细胞HCT
‑
116体外培养；2）待细胞生长至约80% 融合时将其暴露于10μmol/L的5
‑
Fu中，同时在室温下给予4Gy的6Mv X
‑
ray照射；3）暴露于5
‑
Fu中培养24小时，更换新鲜培养液，待残余细胞恢复生长；4）重复步骤2）和步骤3）的操作9次，得到人结直肠癌细胞HTC116CRR。
[0008]本专利技术所述的人结直肠癌细胞HCT116CRR在mRNA研究方面的应用。
[0009]本专利技术所述的人结直肠癌细胞HCT116CRR在制备体外同期放化疗抵抗结直肠癌细胞模型方面的应用。
[0010]本专利技术所述的人结直肠癌细胞HCT116CRR在建立体外的同期放化疗抵抗人结直肠癌动物模型中的应用。
[0011]本专利技术所述的人结直肠癌细胞HCT116CRR在制备、筛选、评价抗人结直肠癌药物的应用。
[0012]本专利技术的有益效果为：本专利技术提供了一种同期放化疗后人结直肠癌细胞HCT116CRR及其构建方法和应用，制备得到了能够体外培养生长稳定、能稳定传代，能在裸鼠体内成瘤且保持其生物学特性的同期放化疗后人结直肠癌细胞株，可以方便的建立体外的同期放化疗抵抗人结直肠癌动物模型，可应用于制备、筛选、评价抗人结直肠癌药物。
附图说明
[0013]图1经10次同期放化疗诱导后，HCT116CRR细胞株形态学变化；图2 Colongenic survival assay结果；图3多靶单击模型拟合细胞存活曲线；图4细胞悬液接种法建立一代移植瘤；图5瘤组织接种法建立二代移植瘤；图6 HCT116CRR细胞皮下移植瘤生长的情况；图7经脾注射构建肝转移模型观察比较HCT116CRR和HCT116细胞的肝转移能力；图8 经尾静脉注射构建肺转移模型观察比较HCT116CRR和HCT116细胞的肺转移能力。
具体实施方式
[0014]下面结合实施例对本专利技术做进一步详细的说明。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件、实验室手册或按照制造厂商所建议的条件。
[0015]实施例1人结直肠癌细胞HCT116CRR的构建方法：1）选取人结直肠癌细胞HCT
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116体外培养；2）待细胞生长至约80% 融合时将其暴露于10μmol/L的5
‑
Fu中，同时在室温下给予4Gy的6Mv X
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ray照射；3）暴露于5
‑
Fu中培养24小时，更换新鲜培养液，待残余细胞恢复生长；4）重复步骤2）和步骤3）的操作9次，得到人结直肠癌细胞HTC116CRR。
[0016]本实施例中采用的人结直肠癌细胞HCT
‑
116购自中科院昆明动物所细胞库，保存于液氮。
[0017]对人结直肠癌细胞HTC116CRR进行同期放化疗抵抗性的鉴定1.1采用Colongenic survival assay法对同期放化疗后得到的人结直肠癌细胞HTC116CRR进行同期放化疗抵抗性的鉴定放化疗后的HCT116CRR细胞株与其母细胞株分别给予在室温下给予0、2、4、6、8、10Gy 6MV X线照射，同时给予10μmol/L 5
‑
Fu处理。照射后，HCT116CRR细胞株与其母细胞株按不同照射剂量：0、2、4、6、8、10Gy，分别接种200、600、800、2000、6000、20000个细胞于6孔板。继续培养14天，甲醇固定，1% 结晶紫染色，显微镜下计数各孔细胞数大于50个的克隆数;以如下公式计算存活分数：克隆率（planting efficiency，PE）:克隆率=对照组每孔克隆数/每孔细胞种植数
×
100%
以PE做为校正系数计算存活分数（surviving fraction，SF）:SF=实验组每孔克隆数/（每孔细胞种植数
×
克隆率）以多靶单击数学模型拟合细胞存活曲线计算出照射组和实验组的准域剂量（Dq）、平均致死剂量(Do)、2Gy 照射的存活分数(SF2)值。上述实验重复3 次。
[0018]实验结果经10次同期放化疗诱导后，HCT116CRR细胞株具有明显的形态学变化（附图1）。Colongenic survival assay结果显示HCT116野生型细胞株克隆形成数明显少于HCT116CRR细胞（图2），多靶单击模型拟合细胞存活曲线（图3），实验组Dq、D0、SF2 明显低于照射组（表1）。
[0019]图1中：A：将常规培养的HCT116细胞暴露于10μmol/L的5
‑
Fu中，同时在室温下给予4Gy的6Mv X线照射，照射完成后继续将细胞暴露于5
‑
Fu中培养至第24小时（从开始暴露于5Fu中开始计算），可见大量肿瘤细胞发生凋亡，漂浮于培养液中。B：更换新鲜培养液，继续培养残余肿瘤细胞。C：待残余肿瘤细胞恢复生长后，再用相同方法处理细胞9次。D，J：将残癌细胞传代培养，得到放化疗后的HCT116细胞株（F）。未进行放化疗处理的HCT116细胞为母细胞株(E)。
[0020]表12.动物实验2.1 实验动物饲养饲养于云南省肿瘤研究所实验动物中心，保持恒温(25
±
2℃)、恒湿(45...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同期放化疗后人结直肠癌细胞，其特征在于，命名为人结直肠癌细胞HCT116CRR，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：C2021299。2.一种如权利要求1所述的同期放化疗后人结直肠癌细胞的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：1）选取人结直肠癌细胞HCT
‑
116体外培养；2）待细胞生长至约80% 融合时将其暴露于10μmol/L的5
‑
Fu中，同时在室温下给予4Gy的6Mv X
‑
ray照射；3）暴露于5
...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋永新，刘珊，沈红梅，付凤莲，王红，刘艳艳，安倩，刘馨元，朱德志，李梅，范雪梅，栾利昆，姚佩君，杨红英，吴起杰，彭灼辉，钏志睿，
申请(专利权)人：云南省肿瘤医院昆明医科大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：