乳腺癌类器官培养的培养基及培养方法技术

本发明专利技术公开了乳腺癌类器官培养的培养基及培养方法，培养基中含有重组人R

【技术实现步骤摘要】
乳腺癌类器官培养的培养基及培养方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及乳腺癌类器官培养的培养基，还涉及利用该培养基培养乳腺癌类器官的方法。

技术介绍

[0002]乳腺癌是女性肿瘤中发病率最高的一类恶性肿瘤，全世界约有12％的女性罹患此病。根据中国抗癌协会公布的统计数字，我国主要城市近十年乳腺癌的发病率增长高达37％，是增长速度最快的癌症之一。《2017中国肿瘤登记年报》显示，我国女性乳腺癌每年新增病例约21万，是全球平均增速的两倍。通常乳腺癌患者会进行手术、化疗、放疗或联合治疗等治疗手段，但仍然有30％
‑
40％的乳腺癌患者会发生转移，而且不同乳腺癌病人发生转移的时间差别巨大。乳腺癌是一种高度异质性的疾病，表现为肿瘤内和肿瘤间的异质性。根据雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)以及人表皮生长因子受体2(HER2)的表达情况，世界卫生组织根据遗传学、病理学和临床上的差异将乳腺肿瘤分为了20多种不同亚型。尽管人们对乳腺癌复杂性的认识在不断加深，但目前的治疗方法主要是基于乳腺癌的临床病理特征，标准治疗方法并不能适用于每个患者，因此从合理的靶向治疗到实现个体化治疗成为了科研人员的研究目标，从而需要一种更加接近于临床肿瘤状态的体外模型来进行深入研究。
[0003]类器官(Organoids)是在体外用3D培养技术培育而成的能够进行自我组装的，在结构和功能上都类似目标器官或组织的三维细胞复合体，其具有稳定的表型和遗传学特征，能部分模拟来源组织或器官的生理功能。每年年底，《自然方法》(Nature Methods)都会对过去一年中推动生物学发展的技术方法做出回顾与总结，由此评选出当年最受瞩目、影响力最大的技术。2017年，类器官(organoids)荣膺Nature Methods年度生命科学技术。类器官培养的突破性进展是2009年Clevers教授团队证实了成体小肠中存在干细胞，并可在体外通过“自器官化”发育成小肠类器官。此后，科研工作者们对不同组织、不同培养条件的类器官培养进行了大量探索。近年来类器官(Organoid)技术的发展为建立和分析病人样本提供了新的机会。患者来源的类器官能复制原始肿瘤的重要特性，使恶性细胞在类似于乳腺肿瘤三维生长的条件下得以繁殖，并且能够保持原始肿瘤的异质性。因此，类器官正在成为研究乳腺癌分子特征的新模型，可以用于大规模药物筛查，以发现与药物敏感性有关的遗传变化，在乳腺肿瘤精准医学研究中具有重要意义。
[0004]公开号为CN109837242A的中国专利公开了乳腺癌类器官的培养方法，但是该方法需要培养周期长，需要1～4周。因此，迫切需要一种新的培养技术，缩短培养周期，用于临床肿瘤病人的精准用药指导，以及药物研发的体外药物筛选。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种乳腺癌类器官培养的培养基，本专利技术的目的之二在于提供利用所述的培养基培养乳腺癌类器官的方法。
[0006]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]1、乳腺癌类器官培养的培养基，所述培养基的各组分如下：所述培养基的各组分如下：重组人R
‑
Spondin 3蛋白0.1
‑
1μg/ml，重组人Heregulinβ
‑
1蛋白1
‑
50nM，重组人KGF/FGF
‑
7因子1
‑
50ng/ml，重组人FGF
‑
10因子1
‑
50ng/ml，重组人EGF因子1
‑
50ng/ml，重组人Noggin蛋白1
‑
100ng/ml，A 83
‑
01 50
‑
500nM，Y
‑
27632 1
‑
5μM，SB 202190 0.5
‑
5μM，B27 1
×
，N
‑
乙酰基
‑
L
‑
半胱氨酸0.5
‑
5mM，烟酰胺1
‑
10mM，HEPES缓冲液0.2
‑
20mM，青霉素链霉素质量分数为0.1
‑
1％，谷氨酰胺补充剂1
‑
3mM，Advanced DMEM/F12。
[0008]2、利用所述的培养基培养乳腺癌类器官的方法，具体方法如下：将基质胶与乳腺癌原代细胞悬液混合，滴加至培养板中放置至凝固，然后在凝固的基质胶与细胞混合物上加乳腺癌培养基，置于37℃二氧化碳培养箱培养至少4天。
[0009]优选的，所述基质胶与乳腺癌原代细胞悬液的体积比为1：1。
[0010]优选的，所述乳腺癌原代细胞悬液细胞浓度为每毫升1
×
106个细胞。
[0011]优选的，所述乳腺癌原代细胞的制备方法如下：将乳腺癌组织加入DMEM，然后加入将乳腺癌组织酶解为单细胞的酶解液处理，再用PBS冲洗，并将组织剪碎，混匀，离心收集沉淀，加乳腺癌培养基重悬，用70微米过滤网将悬液过滤，收集滤液，获得乳腺癌原代细胞。
[0012]本专利技术中酶解液使用美天旎Tumor Dissociation Kit，试剂盒型号为Miltenyi Biotec，#130
‑
095
‑
929。
[0013]本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了乳腺癌类器官培养的培养基，该培养基配方合理培养基中加入的重组人Heregulinβ
‑
1蛋白是人EGF受体(HER)酪氨酸激酶3和4的配体，与乳腺发育以及肿瘤发生有关，将其添加到乳腺癌类器官培养基中，可以有效生成乳腺癌类器官，并且可以长期体外培养及传代。FGF7和FGF10可以诱导产生更大的类器官，并以更高的频率诱导类器官分支；N
‑
乙酰基
‑
L
‑
半胱氨酸、烟酰胺对于乳腺癌类器官的形成及长期体外培养是必须的；能够将乳腺癌原代细胞培养为乳腺癌类器官，并且缩短培养周期，培养的细胞可以用于乳腺癌的靶向药物的筛选，为临床乳腺癌病人的精准用药指导治疗。
附图说明
[0014]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：
[0015]图1为培养第1天细胞状态；
[0016]图2为培养第2天细胞状态；
[0017]图3为培养第3天细胞状态；
[0018]图4为培养第4天细胞状态；
[0019]图5为培养第6天细胞状态。
具体实施方式
[0020]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0021]本专利技术一下实施例中，在实验前将实验所需的所有试剂、离心管和枪头放置于4℃冰箱预冷。
[0022]实施例1、乳腺癌类器官本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.乳腺癌类器官培养的培养基，其特征在于，所述培养基的各组分如下：重组人R
‑
Spondin 3蛋白0.1
‑
1μg/ml，重组人Heregulinβ
‑
1蛋白1
‑
50nM，重组人KGF/FGF
‑
7因子1
‑
50ng/ml，重组人FGF
‑
10因子1
‑
50ng/ml，重组人EGF因子1
‑
50ng/ml，重组人Noggin蛋白1
‑
100ng/ml，A 83
‑
01 50
‑
500nM，Y
‑
27632 1
‑
5μM，SB 202190 0.5
‑
5μM，B27 1
×
，N
‑
乙酰基
‑
L
‑
半胱氨酸0.5

【专利技术属性】
技术研发人员：冯亮，
申请(专利权)人：四川药之助科技有限公司，
类型：发明
国别省市：