卵巢癌类器官模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种卵巢癌类器官模型的构建方法及其应用，该方法首先获取卵巢癌标本，将取部分癌灶标本置于组织保存液中浸泡,将上述部分癌灶标本用组织冲洗液冲洗后，剪碎、刮碎得到匀浆状的组织碎片悬液；重悬过滤网，裂红得到裂红后的卵巢癌类器官球体；向卵巢癌类器官球体中加入水凝胶，得到混合液，将接种了细胞球的培养板或接种了细胞球的培养皿置于细胞培养箱中培养，直至水凝胶凝固；最后取出细胞培养板于无菌细胞台中，在孔板中加入对应的类器官培养基培养，得卵巢癌类器官模型，本发明专利技术使用水凝胶代替Matrigel胶，R

【技术实现步骤摘要】
卵巢癌类器官模型的构建方法及其应用


[0001]本专利技术涉及医学生物
，具体涉及一种卵巢癌类器官模型的构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]卵巢癌是目前妇科恶性肿瘤中肿瘤相关死亡的第二大病因，仅次于宫颈癌。由于早期症状不明显，起病隐匿，一经确诊，绝大多数病人已进入晚期。且卵巢癌缺乏有效的治疗手段，目前5年生存率低于50％。卵巢癌的标准治疗方案是减瘤术加放化疗，而PARP抑制剂作为卵巢癌的一线维持治疗方案，被批准用于同源重组修复基因缺失或者铂敏感复发的卵巢癌患者，但对于PARP抑制剂耐药，铂耐药复发等卵巢癌患者仍缺乏有效的治疗方案，因此新的有效治疗方案有待进一步研究，这其中，新的靶向药的开发对肿瘤的治疗至关重要。近年来，虽然针对肿瘤的新药层出不穷，但仅有20％最终进入临床，而临床试验的耗资巨大，所以研究者们迫切地需要提高临床试验地成功率。研究者发现限制临床试验的关键环节是靶向药的安全性和有效性的问题，为了减少临床试验的失败率，更具有代表性地临床前药物筛选模型急需挖掘。因此研究者们在不断地探索体外培养卵巢癌的方案。<br/>[0003]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种卵巢癌类器官模型的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：1)获取卵巢癌标本，将取部分癌灶标本置于组织保存液中浸泡，并置于冰上；其中，所述卵巢癌标本为卵巢癌癌灶或者皮下瘤的卵巢癌组织2)将步骤1)上述部分癌灶标本用组织冲洗液冲洗后，选取活性较好，形态呈恶性程度高的癌组织，然后对癌组织剪碎、刮碎；得到匀浆状的组织碎片悬液；3)将组织碎片悬液用组织冲洗液重悬后，过滤网，得到的卵巢癌类器官球体；4)向卵巢癌类器官球体中加入裂红液，颠倒摇匀，室温放置后离心，弃上清，得到裂红后的卵巢癌类器官球体；5)向裂红后的卵巢癌类器官球体中加入PBS重悬并离心，清洗一遍，得到大小适中且裂红后的卵巢癌类器官球体；6)向步骤5)中得到的卵巢癌类器官球体中加入水凝胶，置于冰上，得到混合液，待用；7)将步骤6)中的混合液种于细胞培养板或细胞培养皿内；8)将接种了细胞球的培养板或接种了细胞球的培养皿置于细胞培养箱中培养，直至水凝胶凝固；最后取出细胞培养板于无菌细胞台中，在孔板中加入对应的类器官培养基培养，即得卵巢癌类器官模型，其中，卵巢癌类器官模型为卵巢癌PDO类器官模型或者卵巢癌PDXO类器官模型。2.根据权利要求1所述卵巢癌类器官模型的构建方法，其特征在于：所述步骤1)中，组织保存液配方以高糖DMEM培养基为基础添加四季青，所述四季青的添加量为高糖DMEM培养基总体积的2
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3％。所述步骤2)中，组织冲洗液配方以高糖DMEM培养基为基础添加四季青和双抗，其中，所述四季青的添加量为高糖DMEM培养基总体积的2
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3％；所述双抗的添加量为高糖DMEM培养基总体积的0.1％，所述双抗由链霉素和青霉素组成且链霉素和青霉素重量比为1:3；所述步骤8)中，类器官培养基其配方如下：1％的Glutanmax、1％的HEPES、0.1％的PS、20ng/ml的L
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wnt3A、50ng/ml的R
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spondin、100ng/ml的Noggin、50ng/ml的EGF、10ng/ml的FGF10、10ng/ml的FGF2、10ng/ml的50
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B27、10mmol/ml的Nicotinamide、25mmol/ml的N
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Acegglytene、1umol/ml的ProstaglandinE2、10umolg/ml的SB02190、500nmol/ml的A8301、10umol/ml的Y27632和0.1％的万古霉素。3.根据权利要求1所述卵巢癌类器官模型的构建方法，其特征在于：所述步骤3)中，细胞球的直径为40～70μm。4.根据权利要求1所述卵巢癌类器官模型的构建方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙朝阳，陈刚，刘陈，黄雨涵，陆富年，秦天予，张莉，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属同济医院，
类型：发明
国别省市：