一种原代肝癌细胞分离试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种原代肝癌细胞分离试剂盒，包括初次细胞分离液、二次细胞分离液、初次细胞培养液、二次细胞培养液，所述初次细胞分离液包含质量分数为8

【技术实现步骤摘要】
一种原代肝癌细胞分离试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物实验装置
，具体为一种原代肝癌细胞分离试剂盒。

技术介绍

[0002]肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用。肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏对来自体内和体外的许多非营养性物质如各种药物、毒物以及体内某些代谢产物，具有生物转化作用。通过新陈代谢将它们彻底分解或以原形排出体外。
[0003]肝原代细胞是肝脏行使其功能的主要细胞,执行着许多重要的功能,如毒物的分解、尿素的合成、制造血浆中除几种免疫球蛋白之外的所有血浆蛋白质等；也与肝脏的多种疾病如肝纤维化、肝癌等的发生具有密切关系，因此原代肝癌细胞的研究对于了解肝癌的病理规律具有重要意义。
[0004]在对原代肝癌细胞进行研究过程中，首先要对原代肝癌细胞进行分离纯化，以便获得纯净、有活性的原代肝癌细胞。获取原代肝癌细胞的唯一方法就是通过肝癌组织活检标本进行分离培养，然而肝癌组织活检标本中掺杂大量的正常组织、血液。从肝肿瘤组织中纯化出高纯度的原代肝癌细胞，目前主要采用的方法为显微切割术与密度梯度离心法，但上述两种方法都存在，效率较低和纯度不足的缺陷。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种原代肝癌细胞分离试剂盒，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]一种原代肝癌细胞分离试剂盒，包括初次细胞分离液、二次细胞分离液、初次细胞培养液、二次细胞培养液，所述初次细胞分离液包含质量分数为8
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9％的小牛血清、质量分数为0.015
‑
0.018％的DNA酶Ⅰ和Ⅱ型离解酶及0.6
‑
0.75mmol/L Mg2+，所述二次细胞分离液包含质量分数为10
‑
11％的小牛血清、质量分数为0.02
‑
0.023％的DNA酶Ⅰ和Ⅱ型离解酶及0.8
‑
0.85mmol/LMg2+，所述初次细胞培养液包括质量分数为15％
‑
20％的DMEM/F12培养基、12％
‑
15％肝细胞培养基HepatoZYME
‑
SFM、0.1％
‑
0.2％肝细胞生长因子、1％
‑
1.5％L
‑
抗坏血酸、8％
‑
9％的半固体软琼脂，所述二次细胞培养液包括质量分数为15％
‑
20％的DMEM/F12培养基、12％
‑
15％肝细胞培养基HepatoZYME
‑
SFM、0.1％
‑
0.2％肝细胞生长因子、1％
‑
1.5％L
‑
抗坏血酸。
[0008]进一步地，还包括初次细胞过滤器和二次细胞过滤器。
[0009]进一步地，所述初次细胞过滤器中的滤网为200
‑
220目。
[0010]进一步地，所述二次细胞过滤器的滤网170
‑
185目。
[0011]进一步地，所述初次细胞过滤器和二次细胞过滤器包括滤管，所述滤管的底部设
置有圆环形的支座，所述滤管的端口上螺纹连接有管盖，所述滤管的端口上卡接有配有下滤盖，所述初次细胞过滤器中下滤盖内的滤网为200
‑
220目，所述二次细胞过滤器中下滤盖内的滤网为170
‑
185目。
[0012]进一步地，所述二次细胞过滤器中的下滤盖上方还卡接有上滤盖，所述上滤盖中滤网为135
‑
150目。
[0013]进一步地，所述上滤盖和下滤盖包括上环座，所述上环座的底部设置有下环座，所述下环座内径大于上环座外径，所述上环座与下环座卡接配合，所述下环座内径大于滤管端口外径，所述下环座与滤管的端口卡接配合。
[0014]进一步地，所述上环座底部设置有锥形面，所述锥形面的底部设置有芯管，所述滤网连接在芯管中，所述芯管的圆周外壁上设置有一组导向筋，所述导向筋条与上环座或滤管端口卡接配合。
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0016]1、本专利技术通过在初次细胞培养液中加入适量的软琼脂，诱导肝癌肿瘤细胞附着并克隆，在通过体积差实现肝癌肿瘤细胞与正常肝细胞的分离，分离纯度高，成本低、效率高，本专利技术针对正常肝细胞和原代肝癌细胞的混合细胞与肝癌细胞克隆集落存在的密度差，设置了初次细胞分离液和二次细胞分离液，后者的密度更高以便配合肝癌细胞克隆集落的高密度特性；
[0017]2、本专利技术中细胞过滤器的滤盖可叠放，可实现多层滤网同时进行过滤，有效提升了过滤效率和效果，在进行单向过滤时可叠放相同目数的滤网用以提升过滤质量，在进行双向过滤时可叠放不同目数的滤网以便提升过滤效率，环座之间的卡接设置，稳定性高，且不会产生边缘溢流。
[0018]综上所述，本专利技术，有效解决了原代肝癌细胞分离纯度底，成本高、效率底的问题，同时配备了便捷的过滤器，进一步提升原代肝癌细胞分离的效率和质量，结构简洁，使用方便，值得推广。
附图说明
[0019]图1为一种原代肝癌细胞分离试剂盒中初次细胞过滤器和二次细胞过滤器的结构示意图；
[0020]图2为初次细胞过滤器和二次细胞过滤器中上滤盖和下滤盖上部的结构示意图；
[0021]图3为初次细胞过滤器和二次细胞过滤器中上滤盖和下滤盖底部的结构示意图。
[0022]图中：1
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滤管，2
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支座，3
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管盖，4
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下滤盖，5
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上滤盖，6
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下环座，7
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上环座，8
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锥形面，9
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芯管，10
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滤网，11
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导向筋条。
具体实施方式
[0023]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]实施例1：一种原代肝癌细胞分离试剂盒，包括初次细胞分离液、二次细胞分离液、
初次细胞培养液、二次细胞培养液，所述初次细胞分离液包含质量分数为8
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9％的小牛血清、质量分数为0.015
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0.018％的DNA酶Ⅰ和Ⅱ型离解酶及0.6
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0.75mmol/L Mg2+，所述二次细胞分离液包含质量分数为10
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11％的小牛血清、质量分数为0.02
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0.023％的DNA酶Ⅰ和Ⅱ型离解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种原代肝癌细胞分离试剂盒，包括初次细胞分离液、二次细胞分离液、初次细胞培养液、二次细胞培养液，其特征在于：所述初次细胞分离液包含质量分数为8
‑
9％的小牛血清、质量分数为0.015
‑
0.018％的DNA酶Ⅰ和Ⅱ型离解酶及0.6
‑
0.75mmol/L Mg2+，所述二次细胞分离液包含质量分数为10
‑
11％的小牛血清、质量分数为0.02
‑
0.023％的DNA酶Ⅰ和Ⅱ型离解酶及0.8
‑
0.85mmol/L Mg2+，所述初次细胞培养液包括质量分数为15％
‑
20％的DMEM/F12培养基、12％
‑
15％肝细胞培养基HepatoZYME
‑
SFM、0.1％
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0.2％肝细胞生长因子、1％
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1.5％L
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抗坏血酸、8％
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9％的半固体软琼脂，所述二次细胞培养液包括质量分数为15％
‑
20％的DMEM/F12培养基、12％
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15％肝细胞培养基HepatoZYME
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SFM、0.1％
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0.2％肝细胞生长因子、1％
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1.5％L
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抗坏血酸。2.根据权利要求1所述的一种原代肝癌细胞分离试剂盒，其特征在于：还包括初次细胞过滤器和二次细胞过滤器。3.根据权利要求2所述的一种原代肝癌细胞分离...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈彦光，林成招，
申请(专利权)人：上海研匠生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：