一种能够稳定传代的脊髓胶质瘤组织块及其冻存和复苏方法技术

本发明专利技术提供了一种脊髓胶质瘤组织块，所述脊髓胶质瘤组织块的保藏编号为CGMCC No.23030，该脊髓胶质瘤组织块能够在动物体内稳定传代，维持亲代胶质瘤的遗传特征并反映人类患者群体的异质性和多样性，在药物开发和肿瘤学研究领域具有重要意义。瘤学研究领域具有重要意义。瘤学研究领域具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种能够稳定传代的脊髓胶质瘤组织块及其冻存和复苏方法


[0001]本申请涉及生物医学领域，具体地，涉及一种能够稳定传代的脊髓胶质瘤组织块及其冻存和复苏方法。

技术介绍

[0002]肿瘤（tumour）是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物（neogrowth），因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物（neoplasm）。研究发现，肿瘤细胞会出现不同于正常细胞的代谢变化，同时肿瘤细胞自身可通过糖酵解和氧化磷酸化（OXPHOS）之间的转换来适应代谢环境的改变。
[0003]脊髓胶质瘤是一种发生于椎管内髓内恶性肿瘤，与脑胶质瘤相比，其发病率较低，好发于青少年、有着独特的分子遗传特点。高级别脊髓胶质瘤从放化疗中获益有限，亟需依据脊髓星形细胞瘤自身特点来探索新的治疗方法。然而，脊髓胶质瘤尚没有可以开展基础实验研究的动物和细胞模型。建立可供研究脊髓胶质瘤生物学特征和治疗评估的动物脊髓胶质瘤模型显得尤为迫切。
[0004]因此，获得永生化、质量均一并且能够保留原肿瘤的生物学特性脊髓胶质瘤组织是实现临床治疗相关研究的基础和关键。

技术实现思路

[0005]本公开的目的在于提供一种能够稳定传代的脊髓胶质瘤组织块及其冻存和复苏方法，以解决现有技术中脊髓胶质瘤组织占比低、不易存活等导致不能对其充分探究等问题。
[0006]为了实现上述目的，本公开第一方面提供了一种分离的并且能够连续稳定传代培养的脊髓胶质瘤组织块，所述脊髓胶质瘤组织块的保藏编号为CGMCC No.23030。
[0007]根据本公开，其中，所述脊髓胶质瘤组织块能够在实验动物体内连续稳定地传代培养。
[0008]根据本公开，其中，所述实验动物为大鼠或小鼠，优选为NPG小鼠。
[0009]另一方面，本公开提供了上述脊髓胶质瘤组织块的冻存方法，该方法包括如下步骤：S1、利用磷酸盐缓冲液清洗待冻存的脊髓胶质瘤组织；S2、将清洗后的脊髓胶质瘤组织剪成组织块，并使用磷酸盐缓冲液再次冲洗所述组织块；S3、向冲洗后的组织块中加入预冷的冻存液，重悬所述组织块，然后分装至冻存管中；S4、将步骤S3获得的装有组织块的冻存管依次进行：3
‑
5℃冷藏3
‑
5h，15
‑
25℃冷藏5
‑
7h，零下70~零下90℃冷冻7
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9h，最后在液氮中冷冻保存。
[0010]根据本公开，其中，所述预冷的冻存液包括含8
‑
12体积%的二甲基亚砜的胎牛血清
冻存液。
[0011]根据本公开，其中，步骤S3中所述预冷的冻存液的体积为所述组织块体积的10
‑
20倍。
[0012]根据本公开，其中，所述组织块的长度为1
‑
3mm，截面积为1
‑
6mm2。
[0013]根据本公开，其中，步骤S3中所述预冷的冻存液包括含8
‑
12体积%的二甲基亚砜的胎牛血清冻存液。
[0014]另一方面，本公开提供了第一方面所述脊髓胶质瘤组织块的复苏方法，其中，该方法包括：将利用上述冻存方法冻存得到的所述脊髓胶质瘤组织从液氮中取出，放置在35
‑
38℃的水浴中解冻至融化，然后加入生理盐水混匀，再离心去掉上清液，得到复苏后的脊髓胶质瘤组织块。
[0015]另一方面，本公开提供了第一方面所述脊髓胶质瘤组织块在筛选治疗脊髓胶质瘤药物中的用途。
[0016]通过上述技术方案，本公开提供了一种脊髓胶质瘤组织块及其冻存和复苏方法，该脊髓胶质瘤组织块能够在动物体内稳定传代，维持亲代胶质瘤的遗传特征并反映人类患者群体的异质性和多样性，在药物开发和肿瘤学研究领域具有重要意义。
[0017]本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
[0018]附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：图1是脊髓胶质瘤组织块在小鼠体内成瘤图。
[0019]图2是连续传代的脊髓胶质瘤免疫组化测试图。
[0020]生物材料保藏信息本公开涉及到的生物保藏信息包括：分类命名为：人源细胞；保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；邮政编码：100101；地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期为2021
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09
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17；保藏编号为：CGMCC No.23030。
具体实施方式
[0021]以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
[0022]本公开第一方面提供了一种分离的并且能够连续稳定传代培养的脊髓胶质瘤组织块，所述脊髓胶质瘤组织块的保藏编号为CGMCC No.23030。
[0023]本公开提供的脊髓胶质瘤组织块，与脊髓胶质瘤手术中切除的肿瘤组织具有较高的相似程度，并且能够在实验动物体内连续稳定传代培养。
[0024]可选地，所述实验动物为大鼠或小鼠，优选为NPG小鼠，NPG小鼠为高度免疫缺陷小鼠。
[0025]另一方面，本公开提供了一种脊髓胶质瘤组织块的冻存方法，该方法包括如下步骤：S1、利用磷酸盐缓冲液清洗待冻存的脊髓胶质瘤组织；
S2、将清洗后的脊髓胶质瘤组织剪成组织块，并使用磷酸盐缓冲液再次冲洗所述组织块；S3、向冲洗后的组织块中加入预冷的冻存液，重悬所述组织块后，然后分装至冻存管中；S4、将步骤S3获得的装有组织块的冻存管依次进行：3
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5℃冷藏3
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5h，15
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25℃冷藏5
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7h，零下70~零下90℃冷冻7
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9h，最后在液氮中冷冻保存。
[0026]根据本公开，其中，步骤S3中所述预冷的冻存液包括含8
‑
12体积%的二甲基亚砜的胎牛血清冻存液；根据本公开，其中，步骤S3中所述预冷的冻存液的体积为所述脊髓胶质瘤组织块体积的10
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20倍；根据本公开，其中，所述组织块的长度为1
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3mm，截面积为1
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6mm2。
[0027]根据本公开，其中，步骤S3中所述预冷的冻存液包括含8
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12体积%的二甲基亚砜的胎牛血清冻存液。
[0028]另一方面，本公开提供了一种脊髓胶质瘤组织块的复苏方法，其中，该方法包括：将利用上述冻存方法冻存得到的所述脊髓胶质瘤组织块从液氮中取出，放置在35
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38℃的水浴中解冻至融化，然后加入生理盐水混匀，再离心去掉上清液，得到复苏后的所述肿瘤组织块。
[0029]另一方面，本公开提供了第一方面所述脊髓胶质瘤组织块在筛选治疗脊髓胶质瘤药物中的用途。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的并且能够连续稳定传代培养的脊髓胶质瘤组织块，其特征在于，所述脊髓胶质瘤组织块的保藏编号为CGMCC No.23030。2.根据权利要求1所述的脊髓胶质瘤组织块，其中，所述脊髓胶质瘤组织块能够在实验动物体内连续稳定地传代培养。3.根据权利要求2所述的脊髓胶质瘤组织块，其中，所述实验动物为大鼠或小鼠。4.权利要求1~3中任意一项所述脊髓胶质瘤组织块的冻存方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：S1、利用磷酸盐缓冲液清洗待冻存的脊髓胶质瘤组织；S2、将清洗后的脊髓胶质瘤组织剪成组织块，并使用磷酸盐缓冲液再次冲洗所述组织块；S3、向冲洗后的组织块中加入预冷的冻存液，重悬所述组织块，然后分装至冻存管中；S4、将步骤S3获得的装有组织块的冻存管依次进行：3
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5℃冷藏3
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5h，15
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25℃冷藏5
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7h，零下70~零下90℃冷...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴睿超，王永志，庞波，贾文清，安崧源，张耀武，
申请(专利权)人：北京市神经外科研究所，
类型：发明
国别省市：