诺如病毒病毒样颗粒及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种诺如病毒病毒样颗粒及其用途，所述病毒样颗粒或其活性片段包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或由其组成。本发明专利技术还提供了包含所述诺如病毒病毒样颗粒的组合物或试剂盒以及所述诺如病毒病毒样颗粒的用途。使用本发明专利技术的单一抗原实现了覆盖多种价型的目的，可以降低药物组合物或疫苗制备的工艺难度，减少生产成本，具有广阔的市场前景。具有广阔的市场前景。

【技术实现步骤摘要】
诺如病毒病毒样颗粒及其用途


[0001]本专利技术属于生物制药领域，涉及一种诺如病毒病毒样颗粒。本专利技术还提供了所述诺如病毒病毒样颗粒的用途。

技术介绍

[0002]诺如病毒(Norovirus)是1972年美国学者Kapikian在诺瓦克镇的腹泻患者粪便中首次发现的并命名为诺瓦克病毒(Norwalk virus，NoV)，随后在第八届国际病毒命名委员会上将该病毒命名为诺如病毒，它是引起人感染性胃肠炎疫情暴发和婴幼儿急性腹泻的主要病原体之一。
[0003]诺如病毒为单股正链RNA病毒，属于杯状病毒科，直径约为26
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35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称，是从急性胃肠炎病人的粪便中分离的。诺如病毒基因组全长约7.7kb，包含3个开放阅读框(Open reading frames，ORFs)。ORF1编码非结构蛋白，包括RNA聚合酶(RNA
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dependent RNA polymerase，RdRp)；ORF2和ORF3分别编码主要(VP1)和次要(VP2)衣壳蛋白。依据基因序列的系统发生学，诺如病毒可分为6个基因群(genogroup，GI
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GVI)，每个基因群又分为多个基因型(genotype)。人类感染多由GI和GII基因群引起，其中又以GII群为主；据统计，超过75％的人类NoV急性胃肠炎由GII群感染导致。
[0004]近20年来，GII.4基因型在世界范围内的暴发疫情和散发病例中均处于优势流行地位，但型别多样性和流行株变异快是NoV的重要特征。在不同时期、不同地区，各基因型的检出率和流行情况存在较大的差异和变化。尤其是GII群中的GII.2、GII.3和GII.17等常见基因型不仅在GII.4以外的基因型中具有较高的检出率，近年来随着流行趋势的变化，还在局部地区引发了小规模流行。
[0005]诺如病毒这种基因型多样且快速变异的特性，且无理想的细胞培养系统和动物模型，一定程度上限制了抗诺如病毒药物的研发，至今仍缺乏有效的药物、疫苗以及预防措施。因此，开发有效的抗病毒药物和预防性疫苗是目前亟待解决的焦点问题。
[0006]现有研究资料显示，诺如病毒的GI基因群和GII基因群间不存在抗体交叉反应性和交叉阻断活性(韩子泊，张学峰，刘兆明等，中国生物制品学杂志，2019)。因此，当前对针对多种价型诺如病毒的疫苗的研究聚焦于多种人工合成的多肽。
[0007]基于此，当前对能针对多种价型诺如病毒的疫苗存在需求。

技术实现思路

[0008]因此，本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供一种针对多种价型的诺如病毒病毒样颗粒。本专利技术人对诺如病毒的各价型抗原间的交叉免疫进行了大量研究，出乎意料地发现了与GI.1具有较强的交叉免疫作用的GII.4价型诺如病毒病毒样颗粒，该价型的诺如病毒病毒样颗粒同时对GII.2、GII7和GII.12等具有交叉免疫作用。基于该发现，专利技术人提供了一种GII.4型诺如病毒病毒样颗粒(VLP)，还提供了该病毒样颗粒的用途。
[0009]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
[0010]一方面，本专利技术提供了一种诺如病毒病毒样颗粒或其活性片段，所述病毒样颗粒或其活性片段包含选自以下之一的氨基酸序列或由其组成：
[0011](1)SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；
[0012](2)与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列；
[0013](3)在SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列中的一处或多处具有氨基酸取代、缺失或插入的氨基酸序列；和
[0014](4)SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的第X位～第480位连续氨基酸，其中，X为2至39之间的整数；优选地，所述X为27、37或39。
[0015]另一方面，本专利技术提供了一种用于诱发动物对诺如病毒的免疫反应的组合物，其包含根据本专利技术所述的诺如病毒病毒样颗粒或其活性片段。
[0016]根据本专利技术所述的组合物，其中所述动物可以是哺乳动物，优选地是人。
[0017]根据本专利技术所述的组合物，其中所述诺如病毒可以选自GI.1、GII.2、GII.4、GII.7和GII.12型诺如病毒中的一种或多种。
[0018]优选地，根据本专利技术所述的组合物为用于预防和/或治疗诺如病毒感染的药物组合物，例如疫苗。
[0019]优选地，所述药物组合物还含有选自铝佐剂、TRL佐剂或皂苷佐剂的一种或多种佐剂。更优选地，所述铝佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝和硫酸铝中的一种或多种；进一步优选地，所述铝佐剂为氢氧化铝。更优选地，所述TRL佐剂为TRL9佐剂；进一步优选地，所述TRL9佐剂为CPG佐剂；更进一步优选地，所述CPG佐剂的核苷酸序列选自SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的一种。更优选地，所述述皂苷佐剂为QS21或Iscom佐剂。
[0020]根据本专利技术所述的组合物，其中所述诺如病毒感染可以为肠胃炎，优选为病毒性急性肠胃炎。
[0021]再一方面，本专利技术还提供了一种免疫试剂盒，其包含根据本专利技术所述的诺如病毒病毒样颗粒，或其活性片段或根据本专利技术所述的组合物。
[0022]优选地，所述试剂盒为用于检测诺如病毒的试剂盒。
[0023]再一方面，本专利技术还提供了根据本专利技术所述的诺如病毒病毒样颗粒或其活性片段、根据本专利技术所述的组合物或根据本专利技术所述的试剂盒在制备以下产品中的用途：
[0024](1)用于预防和/或治疗诺如病毒感染的药物；
[0025](2)用于诊断诺如病毒感染的试剂盒；或
[0026](3)用于研制诺如病毒抗体的免疫原。
[0027]根据本专利技术所述的用途，其中所述诺如病毒感染可以为肠胃炎，优选为病毒性急性肠胃炎。
[0028]本专利技术的专利技术人发现，包含本专利技术所述氨基酸序列的GII.4型诺如病毒的病毒样颗粒对GI.1、GII.2、GII.7和GII.12四种价型的诺如病毒均产生了交叉免疫反应，不仅实现了GII基因组对GI基因组的交叉免疫，而且对组内的其它价型也具有显著的免疫作用，达到了使用一种抗原预防多种价型诺如病毒感染的目的。使用本专利技术的单一抗原覆盖多种价型可以降低药物组合物或疫苗制备的工艺难度，减少生产成本，具有广阔的市场前景。
附图说明
[0029]以下，结合附图来详细说明本专利技术的实施方案，其中：
[0030]图1显示了本专利技术的GII.4型诺如病毒病毒样颗粒(VLP)对各价型诺如病毒的交叉免疫作用；
[0031]图2显示了其他序列的GII.4型诺如病毒病毒样颗粒(VLPs)对各价型诺如病毒的交叉免疫作用；
[0032]图3显示了本专利技术的GII.4型诺如病毒病毒样颗粒(VLPs)对具有交叉免疫作用的价型的诺如病毒的免疫强度。
[0033]定义：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诺如病毒病毒样颗粒或其活性片段，所述病毒样颗粒或其活性片段包含选自以下之一的氨基酸序列或由其组成：(1)SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；(2)与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的氨基酸序列；(3)在SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列中的一处或多处具有氨基酸取代、缺失或插入的氨基酸序列；和(4)SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的第X位～第480位连续氨基酸，其中，X为2至39之间的整数；优选地，所述X为27、37或39。2.一种用于诱发动物对诺如病毒的免疫反应的组合物，其包含如权利要求1所述的诺如病毒病毒样颗粒或其活性片段。3.如权利要求2所述的组合物，其中所述动物是哺乳动物，优选地是人。4.如权利要求2或3所述的组合物，其中所述诺如病毒选自GI.1、GII.2、GII.4、GII.7和GII.12型诺如病毒中的一种或多种。5.如权利要求2至4中任一项所述的组合物，其中所述组合物为用于预防和/或治疗诺如病毒感染的药物组合物，例如疫苗。6.如权利要求5所述的组合物，其中，所述药...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建强，葛君，王晓东，谭昌耀，任苏林，周童，顾月，王世伟，陈悦，黄红颖，王丹丹，陈晓晓，
申请(专利权)人：远大赛威信生命科学南京有限公司，
类型：发明
国别省市：