1,3-二咖啡酰奎宁酸在用于制备治疗肝癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了1,3

【技术实现步骤摘要】
1，3
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二咖啡酰奎宁酸在用于制备治疗肝癌的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及药物治疗领域，更为具体的，本专利技术涉及1，3
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二咖啡酰奎宁酸用于制备治疗肝癌的药物的用途。

技术介绍

[0002]p53基因是一种分子量为43.7KDa的蛋白质，但因蛋白条带出现在Marker所示53KDa处，命名为P53。因为蛋白中含有大量的脯氨酸，电泳速度被拖慢。p53基因的失活对肿瘤形成起重要作用。mdm2突变与P53突变不共存，p53是一个重要的抗癌基因，其野生型使癌细胞凋亡，从而防止癌变；还具有帮助细胞基因修复缺陷的功能。p53的突变型会提高癌变。
[0003]p53基因表达产物P53蛋白由393个氨基酸残基构成，在体内以四聚体的形式存在，半衰期为20
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30分钟。正常情况下，细胞中P53蛋白的含量很低，因其半衰期短，所以很难检测出来，但在生长增殖的细胞中，可升高5
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100倍以上。野生型P53蛋白在维持细胞正常生长、抑制恶性增殖种起着重要作用，因而被冠上“基因卫士”的称号。p53基因时刻监控着细胞染色体DNA的完整性，一旦细胞染色体DNA遭到损害，P53蛋白与基因的DNA的相应结合部位结合，起特殊转录因子的作用，活化p21基因转录，使细胞停滞于G1期；抑制解链酶的活性；并与复制因子A相互作用，参与DNA的复制与修复。如果修复失败，P53蛋白即启动程序性死亡(凋亡)过程诱导细胞自杀，阻止有癌变倾向的突变细胞的生成，从而防止细胞恶变。当p53基因发生突变后，由于空间构象影响到转录活化功能及P53蛋白的磷酸化过程，这不仅失去野生型p53抑制肿瘤增殖的作用，而且突变本身又使该基因具备癌基因的功能。突变的P53蛋白与野生型的P53蛋白相结合，形成的这种寡居蛋白不能结合DNA，使得一些癌变基因转录失控导致肿瘤发生。p53介导的细胞信号转导途径在调节细胞正常生命活动中起重要作用，它与细胞内其它信号转导通路间的联系十分复杂，其中p53参与调控的基因已超过160种因此，Levine等学者提出了p53基因网络的概念：他们认为不能孤立地观察各个基因的生物学功能，而应该将它们组合起来看待。p53蛋白主要分布于细胞核浆，能与DNA特异结合，其活性受磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化等翻译后修饰调控。正常p53的生物功能好似“基因组卫士(guardian of the genome)”，在G1期检查DNA损伤点，监视基因组的完整性。如有损伤，p53蛋白阻止DNA复制，以提供足够的时间使损伤DNA修复；如果修复失败，p53蛋白则引发细胞凋亡；如果p53基因的两个拷贝都发生了突变，对细胞的增殖失去控制，导致细胞癌变。
[0004]洋蓟素(1，3
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二咖啡酰奎宁酸，CAS号：30964
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13
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7，分子式：C
25
H
24
O
12
，分子量：516.45)，又称朝蓟素，洋蓟酸，英文名：1，3
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Dicaffeoylquinic acid。存在于菊科植物洋蓟(Cynara scolymus L.)、森林千里光(Senecio nemorensis L.)全草中，临床主要用于治疗由肝功能不足引起的各种疾病。能增强胆汁降低脂肪，肝脏解毒，预防脂肪肝；能有效抑制LDL胆固醇氧化，降低胆固醇。目前尚无关于洋蓟素对p53通路的生理调节活性的研究报道。
CCK
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8试剂，空白组中加入100μl含10％CCK
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8试剂的培养基，37℃避光孵育1h后，检测各孔吸光度值(A450)。细胞活力(％)＝(实验组吸光度值
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空白组吸光度值)/(对照组吸光度值
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空白组吸光度值)
×
100％；空白组是指不添加药物的细胞组。
[0022]实验结果如下表1所示：
[0023]表1 1，3
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O
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二咖啡酰奎宁酸浓度对HepG2和L
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02细胞活力的影响
[0024][0025]注：相对于空白组，*为P＜0.05；**为P＜0.01。
[0026]实验结果显示，1，3
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O
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二咖啡酰奎宁酸对正常肝细胞无明显细胞毒性，而对HepG2肝癌细胞活力具有明显的抑制作用。
[0027]实施例2 1，3
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O
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二咖啡酰奎宁酸对p53信号通路的调节作用
[0028]取对数生长期的HepG2细胞系分为对照组(1，3
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O
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二咖啡酰奎宁酸浓度为0uM)、50uM组(1，3
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O
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二咖啡酰奎宁酸浓度为50uM)、25uM组(1，3
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O
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二咖啡酰奎宁酸浓度为25uM)、5uM组(1，3
‑
O
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二咖啡酰奎宁酸浓度为5uM)，经相应处理24h后，取新的酶标板一块，用多通道移液器对各组细胞上清取样分析，每孔取样20ul，添加底物天然腔肠荧光素150ug/ml，进行Nano
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luciference体外生物发光检测。具体检测步骤如下：
[0029]1.Nano
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luciference体外生物发光检测检测：
[0030](1)天然腔肠荧光素(Coelenterazine，Catalog Number：CZ10，CAS Number：55779
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48
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1，生产商：goldbio)分子式：C26H21N3O3分子量：423.48g/mol，纯度：95％保存：
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15摄氏度避光，保存在
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80摄氏度冰箱中。用前取出水浴化冻，将其配制成100mM的储存液(200x，浓度30mg/ml)。混匀后立即使用。
[0031](2)用预热好的组织培养基(细胞系培养在添加有青霉素(100unit/mL)、链霉素(100μg/mL)和10％胎牛血清(FBS)的相应细胞培养基中)1∶200稀释储存液，配制为荧光素工作液(终浓度150μg/mL)。
[0032](3)去除培养细胞的培养基直至无残留；
[0033](4)图像分析前立即向细胞内添加1
×
荧光素工作液，然后使用小动物成像仪(PE公司，型号：IVIS Lumina III)进行图像分析(或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号)，设备常数为：
[0034]luminescent
[0035]Exposure time：Auto
[0036]Binning：2
[0037]F/stop：1
[0038]Camera temp：
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90
[0039]Stag本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种1，3
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二咖啡酰奎宁酸在制备促进p53基因表达的药物中的应用。2.一种1，3
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二咖啡酰奎宁酸在制备治疗肝癌的药物中的应用。3.一种治疗肝癌的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的活性成分为1，3
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二咖啡酰奎宁酸。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：王玮，邢春艳，
申请(专利权)人：北京济全生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：