【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD8结合剂及其用途
[0001]与相关申请的交叉参考本申请要求于2019年9月4日提交的美国临时申请No. 62/895,865的优先权，其内容整体引入本文作为参考。
[0002]在ASCII文本文件上的序列表的提交以下在ASCII文本文件上提交的内容整体引入本文作为参考：序列表的计算机可读形式（CRF）（文件名：146392049240SEQLIST.txt，记录的日期：2020年8月19日，大小：14 KB）。
[0003]本申请涉及基于抗
‑
CD8 VHH结构域的CD8结合剂和使用这种CD8结合剂用于体内对CD8
+ T
‑
细胞成像的方法。
技术介绍
[0004]肿瘤组织中免疫细胞的数目、类型和空间分布的表征可以提供有关癌症诊断、预后、疗法选择和对疗法的反应的关键信息。具体而言，CD8
+
细胞毒性淋巴细胞已一贯地被报道为在各种癌症中具有诊断和预后意义。目前检测CD8
+
细胞的方法需要从外周血或感兴趣的组织中分离细胞。这种取样方法容易出错，并且不提供反映体内CD8
+
细胞数目、定位和运动的动态信息。一种用于体内检测免疫细胞的示例性无损伤的方法是使用放射性标记的示踪物的正电子发射体层摄影术（PET）。然而，这种示踪物的使用受到放射性同位素半衰期和细胞分裂的限制，这导致体内探针稀释。因此，本领域仍然需要用于监控体内CD8
+
细胞的数量和时间分布的变化的方法和试剂。
技术实现思路
...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.CD8结合剂，其包含重链抗体的重链的可变结构域（VHH结构域），其中所述CD8结合剂以约1nM或更小的K
D
特异性结合人CD8。2.权利要求1的CD8结合剂，其中所述CD8结合剂以约0.002/s或更小的k
off
结合人CD8。3. 权利要求1或2的CD8结合剂，其中所述CD8结合剂以约1 nM或更小的K
D
结合食蟹猴CD8。4.权利要求1
‑
3中任一项的CD8结合剂，其中所述CD8结合剂以约0.004/s或更小的k
off
结合食蟹猴CD8。5. 权利要求1
‑
4中任一项的CD8结合剂，其中所述CD8结合剂不刺激或抑制CD8
+ T细胞的活化。6. 权利要求1
‑
5中任一项的CD8结合剂，其中所述CD8结合剂不诱导CD8
+ T细胞增殖。7. 权利要求1
‑
6中任一项的CD8结合剂，其中所述CD8结合剂不结合CD4
+ T细胞。8.权利要求1
‑
7中任一项的CD8结合剂，其中所述VHH结构域是家羊驼VHH。9.权利要求1
‑
8中任一项的CD8结合剂，其中所述VHH是人源化的。10. 权利要求1
‑
9中任一项的CD8结合剂，其中所述VHH结构域特异性结合包含Arg25、Lys42、Gln44、Val45、Leu46、Leu47、Ser48、Pro50、Thr51、Ser52、Gln75、Arg93、Leu94、Gly95、Asp96和Thr97的人CD8α表位，其中氨基酸编号根据SEQ ID NO: 13。11. 权利要求中10的CD8结合剂，其中所述VHH结构域包含包含SEQ ID NO: 6或7的氨基酸序列的互补性决定区（CDR）1；包含SEQ ID NO: 8或9的氨基酸序列的CDR2；以及包含SEQ ID NO: 10
‑
12中任一项的氨基酸序列的CDR3。12.权利要求中11的CD8结合剂，其中所述VHH结构域包含：（1）包含SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO: 8的氨基酸序列的CDR2和包含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列的CDR3；（2）包含SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO: 9的氨基酸序列的CDR2和包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的CDR3；（3）包含SEQ ID NO: 7的氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO: 9的氨基酸序列的CDR2和包含SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的CDR3；或（4）包含SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO: 9的氨基酸序列的CDR2和包含SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的CDR3。13. 权利要求中11的CD8结合剂，其中所述VHH结构域包含包含SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO: 9的氨基酸序列的CDR2和包含SEQ ID NO: 12的氨基酸序列的CDR3。14.权利要求1
‑
13中任一项的CD8结合剂，其中所述VHH结构域包含L49A，其中编号根据Kabat编号。15.权利要求1
‑
14中任一项的CD8结合剂，其中所述VHH结构域包含一个或多个氨基酸修饰，其选自V89T取代、T110Q取代、S112Q取代和A114添加，其中编号根据Kabat编号。16. 权利要求1
‑
15中任一项的CD8结合剂，其中所述VHH结构域包含SEQ ID NOs: 1
‑
4中任一项的氨基酸序列。17.权利要求1
‑
16中任一项的CD8结合剂，其中所述试剂不包含Fc区。18.分离的核酸，其编码权利要求1
‑
17中任一项的CD8结合剂。
19.表达载体，其包含权利要求18的核酸。20.包含权利要求18的核酸或权利要求19的表达载体的宿主细胞。21.权利要求20的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核细胞例如哺乳动物细胞（例如Expi293细胞）或原核细胞。22. 制备CD8结合剂的方法，所述方法包括：a）在其中产生试剂的条件下培养权利要求20或21的宿主细胞；和b）回收由宿主细胞产生的CD8结合剂。23.权利要求1
‑
17中任一项的CD8结合剂，其中所述VHH结构域与标记缀合。24.权利要求23的CD8结合剂，其中所述标记是荧光染料、放射性核素或酶。25.权利要求24的CD8结合剂，其中所述标记是放射性核素。26.权利要求25的CD8结合剂，其中所述放射性核素是
18
F、
89
Zr、
99m
Tc、
67
Ga、
68
Ga、
64
Cu、
52
Mn、
111
In或
124
I。27.权利要求23
‑
26中任一项的CD8结合剂，其中所述VHH结构域通过螯合部分与标记缀合。28.权利要求27的CD8结合剂，其中所述螯合部分通过赖氨酸残基与VHH结构域共价连接。29.权利要求27或28的CD8结合剂，其中所述标记与金属形成复合物，其中所述复合物被螯合部分螯合。30.权利要求29的CD8结合剂，其中所述标记是
18
F并且所述金属是铝。31.权利要求30的CD8结合剂，其中所述螯合部分是式（I）的化合物：。32. 检测主体中CD8
+
细胞的方法，所述方法包括：a）向所述主体施用权利要求23
‑
31中任一项的标记的CD8结合剂；和b）检测所述标记的CD8结合剂与所述主体中的CD8
+
细胞的结合，其中所述结合的检测表明存在CD8
+
细胞。33.权利要求32的方法，其中检测所述标记的CD8结合剂与所述主体中的CD8
+
细胞的结合包括对所述主体中的CD8
+
细胞进行成像。34.权利要求33的方法，其中对所述主体中的CD8
+
细胞进行成像包括对所述主体进行正电子发射体层摄影术（PET）扫描或正电子发射体层摄影术/计算机化断层显像（PET/CT）扫描。35. 权利要求32
‑
34中任一项的方法，其中所述CD8
+
细胞是CD8
+ T细胞或CD8
+
肿瘤细
胞。36.权利要求32
‑
35中任一项的方法，其中所述检测在施用后约1天或更短时间内进行。37.权利要求32
‑
36中任一项的方法，其中所述方法重复一次或多次。38.权利要求37的方法，其中所述方法在预先施用CD8结合剂后约1天后重复。39.权利要求37或38的方法，其中所述方法每年重复1至4次。40.权利要求37
‑
39中任一项的方法，其中所述方法重复不止1年。41. 权利要求32
‑
40中任一项的方法，其中所述方法具有约1 nM至约30 nM的灵敏度。42.权利要求32
‑
41中任一项的方法，其中所述主体是人或非人灵长类动物。43.权利要求42的方法，其中所述非人灵长类动物是食蟹猴或恒河猴。44.权利要求32
‑
43中任一项的方法，其中所述主体患有癌症。45.权利要求32
‑
43中任一项的方法，其中所述主体患有自身免疫性疾病或状况、移植体排斥或移植物抗宿主疾病。46. 预测患有癌症的主体对免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗的反应性的方法，所述方法包括：a）向所述主体施用权利要求23
‑
31中任一项的标记的CD8结合剂；和b）检测所述标记的CD8结合剂与所述主体中肿瘤组织中的CD8
+ T细胞的结合，其中所述结合的检测表明所述主体很可能对所述免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗有反应。47.权利要求46的方法，其进一步包括以下步骤：（c）向在其中已检测到结合的主体施用治疗有效量的免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗。48. 监控患有癌症的主体的疾病进展的方法，所述方法包括：a）向所述主体施用权利要求23
‑
31中任一项的标记的CD8结合剂，和b）在第一时间点和第二时间点检测所述标记的CD8结合剂与所述主体中肿瘤组织中CD8
+ T细胞的结合。49.权利要求48的方法，其进一步包括以下步骤：（c）向所述主体施用治疗有效量的免疫治疗剂、细胞治疗或癌...
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