一种抗HLA-G异构体分子HLA-G5及HLA-G6的单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种抗HLA

【技术实现步骤摘要】
一种抗HLA
‑
G异构体分子HLA
‑
G5及HLA
‑
G6的单克隆抗体及其用途


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及抗HLA
‑
G异构体抗体(YWHG
‑
5)的以下方面：采用HLA
‑
G分子重链α3结构域及HLA
‑
G5/6分子特有的跨膜区氨基酸序列的抗原肽(EGLPEPLMLRWSKEGDGGIMS)为免疫原，制备抗HLA
‑
G异构体HLA
‑
G5及HLA
‑
G6 的抗体(YWHG
‑
5)；编码本专利技术所述YWHG
‑
5抗体的核酸分子及氨基酸序列，以及所述抗体(YWHG
‑
5)用于HLA
‑
G5及HLA
‑
G6免疫组化、免疫印迹及流式细胞术检测等用途。

技术介绍

[0002]人类白细胞抗原
‑
G(human leukocyte antigen
‑
G,HLA
‑
G)基因，全长6.0kb，位于人类第6号染色体短臂远侧6p21.3。在蛋白质翻译过程中，HLA
‑
G mRNA第 1外显子编码信号肽，第2、3和第4外显子分别编码细胞外区的α1、α2和α3 结构域，第5位外显子编码跨膜区；第6外显子编码仅含6个氨基酸残基的HLA
‑
G 分子胞内段；由于外显子6内含有终止密码子，第7外显子不被转录；第8外显子对应于HLA
‑
G基因的3
′
UTR。HLA
‑
G初始转录产物经选择性剪接，可产生7 种成熟mRNA，分别编码7种不同分子量的异构体分子(HLA
‑
G1、
‑
G2、
‑
G3、
‑
G4、
ꢀ‑
G5、
‑
G6及HLA
‑
G7)。其中HLA
‑
G1、HLA
‑
G2、HLA
‑
G3及HLA
‑
G4含有跨细胞膜区，为膜结合型异构体；HLA
‑
G5、HLA
‑
G6及HLA
‑
G7缺乏跨细胞膜结构，为可溶性异构体。HLA
‑
G1～
‑
G7异构体分子的分子量分别为39kD,31kD,22kD,30kD, 34kD,23kD及16kD。
[0003]HLA
‑
G1是由全长HLA
‑
G mRNA编码，由胞外区α1、α2及α3结构域，跨膜区及胞内结构域组成。HLA
‑
G2缺乏α2结构域，由胞外区α1及α3结构域，跨膜区及胞内结构域组成；HLA
‑
G3缺乏α2和α3结构域，由胞外区α1结构域，跨膜区及胞内结构域组成；HLA
‑
G4缺乏α3结构域，由胞外区α1及α2结构域，跨膜区及胞内结构域组成；HLA
‑
G5及HLA
‑
G6胞外区结构域分别与HLA
‑
G1及 HLA
‑
G2相同，但它们由含有内含子4的HLA
‑
G mRNA编码，因内含子4中含有终止密码子，所编码的蛋白分子缺乏由外显子5所编码的跨膜区，形成可溶性HLA
‑
G 分子。编码HLA
‑
G7的mRNA由于内含子2中含有终止密码子，胞外区仅含α1结构域及由内含子2所编码的2个氨基酸残基相连(图1)。
[0004]在正常生理情况下，HLA
‑
G分子仅表达在母胎界面的绒毛外滋养层细胞，维持妊娠过程中的母胎免疫耐受。病理情况下，HLA
‑
G分子能在肿瘤细胞及病毒感染等病理组织细胞中诱导性表达，与疾病的发生及进展密切相关。HLA
‑
G分子是体内一个重要的免疫致耐分子，也是一种重要的免疫检查点分子，其免疫抑制功能主要通过结合免疫抑制性受体免疫球蛋白样转录物
‑
2(immunoglobulin
‑
liketranscript
‑
2,ILT2/LILRB1/CD85j)、免疫球蛋白样转录物
‑
4 (ILT4/LILRB2/CD85d),传递抑制信号，诱导免疫耐受。具体作用机制有：
①
与表达在T细胞、NK细胞和B细胞上的ILT2结合，抑制T细胞和NK细胞免疫杀伤活性，及B细胞增殖和抗体分泌等功能。
②
与树突状细胞(DC)上的ILT2、 ILT4结合，抑制DC细胞的成熟和分化，诱导产生耐受性DC细胞。
③
与骨髓来源抑制性细胞(MDSC)和巨噬细胞(Mф)上的ILT2、ILT4结合，诱导促炎抗肿瘤的M1向免疫致耐性M2细胞分化等。因此，HLA
‑
G在肿瘤等疾
病的发生发展中起到重要作用。基于HLA
‑
G为靶点的肿瘤免疫治疗已在美国进入I期临床试验。
[0005]HLA
‑
G与受体ILT2、ILT4结合，具有分子结构特异性。受体ILT2、ILT4与 HLA
‑
G结合的位点HLA
‑
G胞外区α3结构域。ILT2仅结合HLA
‑
G/β2m复合物，而 ILT4不仅可以与HLA
‑
G/β2m结合，同时可以与不含β2m的游离HLA
‑
G分子结合。由于HLA
‑
G1、
‑
G2、
‑
G3、
‑
G4、
‑
G5、
‑
G6及HLA
‑
G7在表达机制及分子结构上存在差异，如HLA
‑
G3、
‑
G4、及HLA
‑
G7异构体胞外区不含α3结构域，不能与ILT2 和ILT4结合。不同HLA
‑
G异构体分子可在病理生理过程中发挥特定的免疫学效应。在不同病理状态下，尤其在肿瘤组织细胞中，HLA
‑
G异构体表达存在广泛的异质性，不同HLA
‑
G分子异构体的表达具有特定的临床意义。因此，分析特定 HLA
‑
G异构体分子表达及不同HLA
‑
G异构体分子表达谱，对于阐述特定HLA
‑
G异构体分子的生物学功能及其临床意义具有重要意义。
[0006]目前国内外用于HLA
‑
G免疫组化和免疫印迹的抗体主要有4H84，MEM
‑
G1， MEM
‑
G2，2A12及5A6G7。其中抗体4H84，其识本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗HLA
‑
G异构体分子HLA
‑
G5及HLA
‑
G6的单克隆抗体(YWHG
‑
5)，所述单克隆抗体(YWHG
‑
5)由保藏编号为CCTCC NO:202122的杂交瘤产生。2.一种抗HLA
‑
G异构体分子HLA
‑
G5及HLA
‑
G6单克隆抗体(YWHG
‑
5)，其特征在于，所述单克隆抗体(YWHG
‑
5)至少包括轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种，或/和重链高变区CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种；所述单克隆抗体(YWHG
‑
5)抗体轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.1所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述抗体轻链高变区CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.2所示的序列QSLLHSNGDTY或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.2所示的序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链高变区CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.3所示的序列NIS或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.3所示的序列具有同等功能的氨基酸序列，和所述轻链高变区CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.4所示的序列FQGSYVPYT或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.4所示的序列具有同等功能的氨基酸序列；所述单克隆抗体(YWHG
‑
5)抗体重链的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.5所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述抗体重链高变区CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.6所示的序列GFSLTSYG或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.6所示的序列具有同等功能的氨基酸序列，所述重链高变区CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.7所示的序列IWAGGNT或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.7所示序列具有同等功能的氨基酸序列，和所述重链高变区CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.8所示的序列ARDRAGTARFYYYALDN或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.8所示的序列具有同等功能的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的一种抗HLA
‑
G异构体分子HLA
‑
G5及HLA
‑
G6的单克隆抗体(YWHG
‑
5)，其特征在于，所述单克隆抗体(YWHG
‑
5)还包括轻链框架区(Fram...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜卫华，
申请(专利权)人：台州恩泽医疗中心集团，
类型：发明
国别省市：