一种鹿茸干细胞的培养方法技术

本发明专利技术涉及鹿茸干细胞培养技术领域，尤其涉及一种鹿茸干细胞的培养方法，包括培养材料的准备、消化酶法原代培养、胰蛋白酶法传代培养和细胞的纯化。本发明专利技术通过进行消化酶原代培养和胰蛋白酶传代培养，采用浓度为0.25％的胰蛋白酶作为细胞消化液，控制培养基的pH值为7.2至7.4，温度保持在37℃，为鹿茸干细胞提供最佳生长环境，并且使消化液的作用力达到最强，有利于提高鹿茸干细胞的培养效率和生长速度；血清中含有促细胞贴壁的成分，有助于鹿茸干细胞细胞贴壁生长；本试验中的培养液和PBS缓冲液分别加有青霉素和链霉素，能有效地抑制细菌生长而不影响细胞的正常生长，且较安全；本试验中使用CO2/NaHCO3缓冲液系统来维持一定的pH值。定的pH值。定的pH值。

【技术实现步骤摘要】
一种鹿茸干细胞的培养方法


[0001]本专利技术涉及鹿茸干细胞培养
，尤其涉及一种鹿茸干细胞的培养方法。

技术介绍

[0002]鹿茸是鹿科动物的副性征，作为鹿的一个器官，具有周期性脱落、然后完全再生的特点。在快速生长期每天可生长1.0至3.0cm，细胞分化的速度至少相当于癌细胞的30倍。对鹿茸再生机理的研究表明，鹿茸的再生不是反向分化的结果，而是建立在干细胞基础上的反应。
[0003]公开号为CN201810045324.5的专利技术公开了一种鹿茸干细胞的制备方法、鹿茸干细胞及其应用，该方法包括1.鹿茸间充质组织取材；2.鹿茸间充质干细胞原代培养；3.鹿茸间充质干细胞的纯化。纯化后鹿茸间充质干细胞具有更强的成骨，成软骨及成脂分化潜能；纯化后鹿茸间充质干细胞制备的条件培养液具有更强、批次间更稳定的皮肤损伤治疗效果。
[0004]但是，上述现有技术存在以下缺陷：鹿茸干细胞体外的成功培养是对鹿茸研究的基础和前提，上述技术方案通过对鹿茸组织的单次取材，实现了鹿茸干细胞体外原代培养，并不能实现鹿茸干细胞的传代培养以及批量生产，不利于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鹿茸干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、培养材料的准备：准备DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、4
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羟乙基哌嗪乙磺酸、胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、透明质酸酶和谷氨酰胺原材料；利用浓度为10％的胎牛血清和DMEM培养基制备细胞培养基础液；利用浓度为0.08％的胰蛋白酶制备细胞消化液；细胞培养基础液和细胞消化液均采用孔径为0.45μm和0.22μm的滤膜过滤；S2、消化酶法原代培养：在无菌间内剪碎鹿茸取样组织，用添加有青霉素和链霉素的PBS缓冲液清洗取样组织1至2次，青霉素和链霉素在PBS缓冲液的质量浓度为100μg/ml，然后加入30至50倍体积的透明质酸酶和胶原酶Ⅰ混合液，对取样组织进行消化，随后再用胶原酶Ⅱ消化；在消化过程中注意观察消化液的混浊情况以及细胞的游离情况；当细胞部分游离时，对样品进行5分钟800r/min的离心；最后将收集到的细胞及组织小块用无血清的细胞培养基础液清洗1次，并接种到细胞培养液中；放入37℃、CO2含量为5％、最大饱和湿度的培养箱中培养，等待细胞长满汇合；S3、胰蛋白酶法传代培养：待原代细胞生长到80％～90％汇合时，进行细胞传代培养；先用添加有青霉素和链霉素的PBS缓冲液清洗1至2次，或用胰蛋白酶洗1次，再用细胞消化液消化，待细胞变圆、脱壁时收集消化下来的细胞于离心管内，对细胞进行5分钟800r/min的离心，倒掉消化液，再以1
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105个/ml的密度，将细胞接种到新的细胞培养基础液中，用吸管吹打使细胞悬浮均匀，将培养皿放入37℃、CO2含量为5％、最大饱和湿度的培养箱中培养；此后，细胞每隔4至6天传一代；S4、细胞的纯化：首次传代、第2次和第3次传代时调节消化时间，从而纯化鹿茸干细胞；将混杂生长的培养物用常规消化法作用5～8min，用手轻轻拍打培养瓶壁，此时鹿茸干细胞绝大部分可悬浮，将样品加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈丽晶，
申请(专利权)人：玺瑞生命科学深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：