Trolox在延缓间充质干细胞衰老中的应用制造技术

本发明专利技术提供了Trolox在延缓间充质干细胞衰老中的应用，属于干细胞培养技术领域。本发明专利技术中，Trolox在不改变间充质干细胞表面标记物的情况下，增加细胞的增殖率，抵抗细胞的衰老以及提高免疫调节因子PGE

【技术实现步骤摘要】
Trolox在延缓间充质干细胞衰老中的应用


[0001]本专利技术属于干细胞培养
，具体涉及Trolox在延缓间充质干细胞衰老中的应用。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)具有多向分化和自我更新能力且其免疫原性低，成为细胞治疗和再生医学领域的重要研究对象。人脐带间充质干细胞(human umbilical cordmesenchymal stem cells，hUC
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MSC) 取材方便，伦理限制低，来源丰富，成为重要的标本来源。MSCs在体外增殖活性较好，但经过有限的传代后，其会显示出衰老的迹象。这种在体外培养过程中产生衰老的特性使MSCs扩增数量受限，从而影响其在临床的应用。如何延缓间充质干细胞的衰老或者使衰老的MSCs再现年轻化状态而延长其利用价值成为再生医学的研究热点之一。
[0003]现有技术中，细胞抗衰老通常在培养过程中添加抗氧化剂来实现。抗氧化剂具有抗氧化活性，通过清除细胞中脂质过氧自由基，抑制多不饱和脂肪酸的过氧化作用来防止膜氧化损伤。然而，抗氧化剂对细胞种类具有选择性，并非任意种类的抗氧化剂对细胞都能发挥抗衰老作用。目前还没有关于间充质干细胞抗衰老的药物的报道。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种Trolox在延缓间充质干细胞衰老中的应用。
[0005]本专利技术提供了Trolox在延缓间充质干细胞衰老中的应用。
[0006]优选的，所述间充质干细胞抗衰老表现在提高间充质干细胞的增殖率和降低间充质干细胞中β
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半乳糖苷酶染色阳性比例。
[0007]优选的，以所述间充质干细胞的增殖率为检测指标时，间充质干细胞的传代次数低于10代。
[0008]优选的，以所述间充质干细胞中β
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半乳糖苷酶染色阳性比例为检测指标时，间充质干细胞的传代次数包括0～15代。
[0009]优选的，所述Trolox的工作浓度不低于2μmol/l。
[0010]本专利技术提供了Trolox在制备间充质干细胞培养或传代的抗衰老培养基中的应用。
[0011]优选的，所述培养基中Trolox的浓度不低于2μmol/l。
[0012]优选的，每次培养或传代间充质干细胞采用含Trolox的培养基。
[0013]本专利技术提供了Trolox在提高间充质干细胞的生物学功能中的应用。
[0014]优选的，所述提高间充质干细胞的生物学功能包括免疫调节功能和微小 RNA的表达；
[0015]优选的，所述间充质干细胞的传代次数不超过18次。
[0016]本专利技术提供了Trolox在延缓间充质干细胞衰老中的应用。本专利技术从众多具有抗氧
化功能的化合物中筛选得到Trolox，实验证明，Trolox应用于间充质干细胞的培养中，对传代不同代次的间充质干细胞均能提高细胞增殖特性，并且通过检测老化相关指标β
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半乳糖苷酶的活性，Trolox对间充质干细胞具有抗衰作用，为后续制备间充质干细胞的培养基或培养用药物提供了新思路。
[0017]同时，Trolox应用于间充质干细胞的培养时，不会影响间充质干细胞表面标记物的表达，保持间充质干细胞的原有生物学特性，对后续的细胞应用无不利影响。因此Trolox可以在不改变间充质干细胞表面标记物的情况下，增加细胞的增殖率，抵抗细胞的衰老，为其在临床上应用提供了较高的利用价值。
附图说明
[0018]图1为本专利技术实施例中MSC光镜下形态；
[0019]图2为本专利技术实施例中Trolox对P4代MSC增殖的影响；
[0020]图3为本专利技术实施例中Trolox对P12代MSC增殖的影响；
[0021]图4为本专利技术实施例中β
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半乳糖苷酶染色结果；
[0022]图5为本专利技术实施例中β
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gal染色统计分析结果；
[0023]图6为本专利技术实施例中流式细胞仪检测hUC
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MSC表面标记物检测结果，其中图6a为Blank组，图6b为control组，图6c为Trolox组；
[0024]图7为本专利技术实施例中MSC中PGE2的表达情况，图7a为P4代MSC，图7b为P12代MSC，图7c为不添加Trolox组统计结果，图7d为添加Trolox 组统计结果；
[0025]图8为本专利技术实施例中Trolox对MSC中microRNA17
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92表达影响结果，图8a为单次添加Trolox培养MSC后microRNA17
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92表达结果，图8b为持续(共8次)添加Trolox培养MSC后microRNA17
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92表达结果。
具体实施方式
[0026]本专利技术提供了Trolox在延缓间充质干细胞衰老中的应用。
[0027]在本专利技术中，为筛选能够提高间充质干细胞抗衰老的化合物，从抗氧化化合物库中选择了几十种抗氧化作用的化合物进行间充质干细胞培养，以细胞中PEG2表达水平为检测指标，选择PEG2表达量最高的化合物Trolox进行间充质干细胞的抗衰老实验验证，结果表明，Trolox具有良好的间充质干细胞抗衰老作用。在本专利技术实施例中，所述间充质干细胞抗衰老表现在提高间充质干细胞的增殖率和降低间充质干细胞中β
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半乳糖苷酶染色阳性比例。以所述间充质干细胞的增殖率为检测指标时，间充质干细胞的传代次数优选低于10代，更优选为0～8代，进一步优选为0～6代，最优选为0～4代。间充质干细胞的传代次数是影响Trolox促进间充质干细胞增殖的关键因素，当传代次数较多，例如12代以上时，Trolox促进间充质干细胞增殖的能力下降。以所述间充质干细胞中β
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半乳糖苷酶染色阳性比例为检测指标时，间充质干细胞的传代次数优选包括0～15代，更优选为2～12代，进一步优选为 5～10代。在本专利技术实施例中，分别对传代第5代和第12代的间充质干细胞进行β半乳糖苷酶染色，结果表明Trolox对间充质干细胞的抗衰作用。
[0028]在本专利技术中，Trolox的浓度也是影响间充质干细胞抗衰老作用的关键因素。所述Trolox的工作浓度优选不低于2μmol/l，更优选为3～100μmol/l。在本专利技术实施例中，所述
Trolox的工作浓度设置为5,10,20,50,100μmol/l,均具有提高细胞增殖率的作用。当低于2μmol/l时，Trolox的工作浓度为0.25， 0.5，1μmol/l时，不能显著提高细胞增殖率。
[0029]本专利技术对所述间充质干细胞的来源不受限制，采用本领域所熟知的间充质干细胞的来源即可，例如脐带来源的间充质干细胞、脐带血来源的间充质干细胞、骨髓来源的间充质干细胞、胎盘来源的间充质干细胞等。本专利技术实施例中，以脐带来源的间充质干细胞为例，说明Trolox在间充质干细胞抗衰老方面发挥的作本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Trolox在延缓间充质干细胞衰老中的应用。2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述间充质干细胞抗衰老表现在提高间充质干细胞的增殖率和降低间充质干细胞中β
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半乳糖苷酶染色阳性比例。3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，以所述间充质干细胞的增殖率为检测指标时，间充质干细胞的传代次数低于10代。4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，以所述间充质干细胞中β
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半乳糖苷酶染色阳性比例为检测指标时，间充质干细胞的传代次数包括0～15代。5.根据权利要求1～4任意一项所述应用，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙慧燕，王立生，张林，
申请(专利权)人：北京三有利康细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：