环状RNAcircTTC3过表达腺相关病毒载体、腺相关病毒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了环状RNAcircTTC3过表达腺相关病毒载体、腺相关病毒及其应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术利用AAV9病毒载体递送环状RNA

【技术实现步骤摘要】
环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体、腺相关病毒及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体、腺相关病毒及其应用。

技术介绍

[0002]急性心肌梗死是心血管疾病致死和致残的主要原因之一。对于急性心肌梗死病人，临床上常用的心肌缺血后再灌注治疗，在一定程度上降低了由于心肌梗死造成的急性期死亡，但是其本身所造成的心肌损害和对心室重构的不良促进作用严重影响了心梗患者的预后，这种过程与现象被称之为心肌缺血再灌注损伤。因此有效对抗心肌缺血再灌注损伤的研究一直受到广泛的关注。目前，心肌缺血再灌注损伤的防治常用的是外源性增加心肌氧和能量供应，减轻心脏负担和减少能量消耗，但是其疗效并不显著，临床上目前并未获得理想的心肌保护药物。
[0003]环状RNA是最近发现的一类不具有5
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端帽子和3
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端尾巴的闭合环状结构RNA，它大量存在于真核细胞胞质内。环状RNA具有很多重要的调控功能，在不同物种中具有保守性和组织特异性，且环状结构对核糖核酸外切酶不敏感，较线性RNA更稳定，这些特性使得环状RNA极具开发疾病新型诊断与治疗方法的巨大潜力，研究意义重大。现有技术公开了环状RNA Hectd1(circHectd1)和UCK2(circUCK2)可以作为脑缺血再灌注损伤的潜在治疗靶点(PMID:29938598,33230465)，环状RNA cWdr37可以作为视网膜缺血再灌注损伤的潜在治疗靶点(PMID:33771636)。
[0004]但是，目前仍缺乏环状RNA对于心肌缺血再灌注损伤的相关诊断、预防和治疗的报道。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体、腺相关病毒及其应用，本专利技术的环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体能够用于制备诊断心肌缺血再灌注损伤的诊断工具以及制备预防和/或治疗心肌缺血再灌注损伤的药物。
[0006]本专利技术提供了环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体，所述环状RNA circTTC3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]优选的，所述环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体包括原始载体和插入在所述原始载体上的circTTC3的编码基因；所述circTTC3的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0008]优选的，所述circTTC3的编码基因的表达调控原件包括CMV启动子。
[0009]本专利技术还提供了一种包装有上述方案所述环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体的腺相关病毒。
[0010]优选的，所述腺相关病毒由pAAV2/9、pDeltaF6和所述环状RNA circTTC3过表达腺
相关病毒载体包装而成。
[0011]本专利技术还提供了上述方案所述环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体或者所述的腺相关病毒在制备预防和/或治疗缺血再灌注损伤的药物中的应用。
[0012]优选的，所述缺血再灌注损伤包括心肌缺血再灌注损伤。
[0013]优选的，所述药物的剂型包括注射剂。
[0014]本专利技术还提供了检测环状RNA circTTC3表达量的试剂在制备诊断心肌缺血再灌注损伤的诊断工具中的应用。
[0015]优选的，所述检测环状RNA circTTC3表达量的试剂包括引物组和PCR检测用试剂；所述引物组包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述下游引物的核苷酸序列SEQ ID NO.4所示。
[0016]本专利技术提供了环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体，所述环状RNA circTTC3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本专利技术利用AAV9病毒载体递送环状RNA circTTC3_007(简称RNA circTTC3)，能够用于制备预防和/或治疗心肌缺血再灌注损伤(IRI)的药物。本专利技术基于AAV9病毒能够将转录出环状RNA
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circTTC3的基因序列递送至心脏组织中，并在心脏组织中稳定的高表达，上调circTTC3能产生心脏保护效应，有效减少心肌梗死面积，从而起到保护心肌梗死的作用。本专利技术通过在新生大鼠原代心肌细胞中过表达circTTC3，发现circTTC3可以显著性地促进新生大鼠原代心肌细胞的增殖和生长。并且，circTTC3还可以减少氧糖剥夺/复糖复氧模型(OGD/R)诱导的心肌细胞凋亡，此外，在小鼠心肌缺血再灌注手术前一周给予AAV9
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circTTC3病毒(在心脏组织过表达circTTC3)，可以显著减少缺血再灌注导致的心肌梗死面积。可见，本专利技术的环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体能够用于预防心肌缺血再灌注损伤。
附图说明
[0017]图1表示CircTTC3对小鼠心肌缺血/再灌注损伤具有保护效应；其中，A～C为TTC染色检测小鼠急性心肌缺血/再灌注手术后梗死面积，图中蓝色代表安全区域，白色是梗死区域；红色+白色代表缺血区域，结果表明circTTC3能够减少心肌梗死面积，n＝8:9；D为qPCR检测circTTC3在小鼠心脏组织的表达水平，结果表明注射AAV9
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circTTC3
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OE病毒的小鼠circTTC3表达显著增加，提示在小鼠心脏组织成功过表达circTTC3；*表示p<0.05，n＝5；EV代表空载，OE代表过表达；
[0018]图2表示CircTTC3能够在体外促进新生大鼠原代心肌细胞生长，其中，n＝4，***表示p<0.001，Hoechst为细胞核染料，带蓝色荧光，α
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actinin为α横纹肌辅肌动蛋白，带红色荧光，可显示整个心肌细胞的形态；
[0019]图3表示CircTTC3能够在体外促进大鼠原代心肌细胞增殖；其中，A和B表示Ki67染色表明circTTC3能够在体外促进新生大鼠原代心肌细胞增殖，n＝6；C和D表示EdU染色表明circTTC3能够在体外促进新生大鼠原代心肌细胞增殖，n＝6，*表示p<0.05，Hoechst为细胞核染料，带蓝色荧光；α
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actinin为α横纹肌辅肌动蛋白，带红色荧光，可显示整个心肌细胞的形态；Ki67和EdU均用于标记增殖的心肌细胞；
[0020]图4表示CircTTC3能够抵抗OGD/R(氧糖剥夺/复糖复氧模型)诱导的心肌细胞凋亡，其中，A和B表示Tunel染色表明circTTC3能够抵抗OGD/R诱导的心肌细胞凋亡；n＝4，**
表示p<0.01，***表示p<0.001，OGD/R代表经过氧糖剥夺/再恢复处理，Control为对照，未经氧糖剥夺/再恢复处理；
[0021]图5表示circTTC3在生理性心本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体，所述环状RNA circTTC3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体，其特征在于，所述环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体包括原始载体和插入在所述原始载体上的circTTC3的编码基因；所述circTTC3的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.根据权利要求2所述的环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体，其特征在于，所述circTTC3的编码基因的表达调控原件包括CMV启动子。4.一种包装有权利要求1～3任意一项所述环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体的腺相关病毒。5.根据权利要求4所述的腺相关病毒，其特征在于，所述腺相关病毒由pAAV2/9、pDe...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖俊杰，王丽君，陈奕文，吴心盈，杨子江，
申请(专利权)人：上海大学，
类型：发明
国别省市：