用于治疗关节炎疾病的修饰的AAV衣壳蛋白制造技术

本发明专利技术涉及用于基因疗法的重组腺相关病毒(rAAV)病毒体，其中所述rAAV病毒体包含新型衣壳蛋白。特别地，本发明专利技术涉及此类病毒体在基因疗法中用于治疗关节炎疾病，例如像类风湿性关节炎或其症状的用途，优选地通过关节内施用。用。用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗关节炎疾病的修饰的AAV衣壳蛋白


[0001]本专利技术涉及基于重组腺相关病毒(rAAV)的基因疗法领域，特别涉及突变衣壳rAAV在治疗或预防关节炎疾病中的用途。

技术介绍

[0002]重组腺相关病毒(rAAV)载体已经证明对于人体内递送基因具有优异的安全性和功效特征。因此，rAAV载体已经广泛用于体内基因疗法，并且在临床前模型以及临床试验中显示出安全性和有效性。rAAV载体已成功用于一系列疾病的许多基因疗法临床试验，所述疾病包括B型血友病、A型血友病、囊性纤维化、α1抗胰蛋白酶缺乏症、脊髓性肌萎缩症(SMA)、帕金森病、杜氏肌营养不良症和Leber先天性黑蒙(Selot等人,Current Pharmaceutical Biotechnology,2013,14,1072
‑
1082)。阿利泼金(Alipogene tiparvovec，uniQure)已在欧洲作为治疗脂蛋白脂酶缺乏症(LPLD)的基因疗法获得上市许可。随后，用于治疗皮肤癌的基于疱疹病毒的Talimogene laherparepvec(T
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Vec,Amgen)和用于治疗ADA
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SCID的基于体外干细胞逆转录病毒的基因疗法Strimvelis(GSK)，获得了基因疗法药物批准。
[0003]基于rAAV载体的基因疗法也已经应用于类风湿性关节炎(RA)，其是影响约1％的人口的慢性炎性疾病。RA的病理学遍及滑膜关节。关节的局部性质使得体内基因疗法非常有吸引力。已经应用了提供旨在使RA中的平衡向抗炎状态转变的抗炎蛋白的疗法。
[0004]许多工作集中于开发具有所需特性的AAV衣壳蛋白。此类特性可包括更高的转导效率、组织/器官嗜性、不需要的组织/器官的脱靶、或避免预先存在的中和抗体。
[0005]然而，本领域仍然需要进一步改进rAAV基因疗法载体。具体地，需要改进rAAV基因疗法载体在关节炎疾病中的使用，更准确地，需要改进将遗传物质递送至所靶向的组织(诸如滑膜关节或滑膜关节内的特定细胞类型，优选递送至成纤维细胞样滑膜细胞(FLS))的效率。

技术实现思路

[0006]在一些方面，本专利技术涉及以下编号的实施方案：
[0007]实施方案1.一种重组腺相关病毒(rAAV)病毒体，其包含修饰的衣壳蛋白和与编码目的基因产物的核苷酸序列可操作地连接的启动子，其中所述rAAV病毒体用于治疗或预防关节炎疾病或用于治疗或预防与关节炎疾病相关联的症状，其中所述修饰的衣壳蛋白在所述蛋白的C末端部分包含氨基酸序列Z，其残基暴露在所述衣壳蛋白的表面上，优选地其中所述目的产物是免疫抑制剂。
[0008]实施方案2.根据实施方案1所述使用的rAAV病毒体，其中所述氨基酸序列Z：
[0009]a.包含式I的氨基酸残基序列或由其组成：
[0010]y
–
G
–
Q
–
x
–
G
–
(x)3
–
R
–
(x)3
–
y
–
A
–
Q
–
A
–
A
[0011]其中x表示单个氨基酸残基并且其中y表示0、1或2个氨基酸残基；和
[0012]b.存在于对应于距野生型AAV衣壳蛋白C末端的位置100
‑
200，优选120
‑
180，更优选130
‑
170，更优选140
‑
160的氨基酸残基的位置。
[0013]实施方案3.根据实施方案1或2使用的rAAV病毒体，其中所述目的基因产物是IL
‑
6抑制剂。
[0014]实施方案4.根据实施方案1或2使用的rAAV病毒体，其中所述目的基因产物是TNFα抑制剂。
[0015]实施方案5.根据实施方案1或2使用的rAAV病毒体，其中所述目的基因产物是IL
‑
1抑制剂。
[0016]实施方案6.根据实施方案3所述使用的rAAV病毒体，其中所述IL
‑
6抑制剂选自由IL
‑
6受体拮抗剂、人源化抗IL
‑
6单克隆抗体、嵌合抗IL
‑
6单克隆抗体、人源化兔抗IL
‑
6单克隆抗体和可溶性IL
‑
6受体组成的组，优选地其中至少一种
[0017]i)所述IL
‑
6受体拮抗剂是托珠单抗(tocilizumab)和赛诺菲单抗(sarilumab)中的至少一种；
[0018]ii)所述人源化抗IL
‑
6单克隆抗体是奥洛组单抗(olokizumab)和西鲁库单抗(sirukumab)中的至少一种；
[0019]iii)所述嵌合抗IL
‑
6单克隆抗体是司妥昔单抗(siltucimab)；并且
[0020]iv)所述人源化兔抗IL
‑
6单克隆抗体是克拉扎珠单抗(clazakizumab)。
[0021]实施方案7.根据实施方案4所述使用的rAAV病毒体，其中所述TNFα抑制剂选自由依那西普(etanercept)、英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)、赛妥珠单抗聚乙二醇(certilizumab pegol)和戈利木单抗(golimumab)组成的组，优选地其中所述TNFα抑制剂是依那西普。
[0022]实施方案8.根据实施方案5所述使用的rAAV病毒体，其中所述IL
‑
1抑制剂选自由以下组成的组：
[0023]i)IL
‑
1受体拮抗剂，优选人IL
‑
1受体拮抗剂，优选人IL
‑
1受体拮抗剂阿那白滞素(anakinra)；
[0024]ii)抗IL
‑
1单克隆抗体，优选人抗IL
‑
1单克隆抗体，优选人IL
‑
1单克隆抗体卡那奴单抗(canakinumab)或吉伏组单抗(gevokizumab)
[0025]iii)人二聚抗IL
‑
1融合蛋白，优选人二聚抗IL
‑
1融合蛋白利纳西普(rilonacept)；以及
[0026]iv)人双可变结构域抗IL
‑
1免疫球蛋白，优选人双可变结构域抗IL
‑
1免疫球蛋白鲁吉珠单抗(lutikizumab)。
[0027]实施方案9.根据前述实施方案中任一项所述使用的rAAV病毒体，其中所述启动子是组成型启动子或诱导型启动子，优选所述启动子是NFκB应答型启动子，优选NFκB应答型CMV启动子，优选NFKB应答型最小CMV启动子。
[0028]实施方案10.根据前述实施方案中任一项所述使用的rAAV病本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组腺相关病毒(rAAV)病毒体，其包含修饰的衣壳蛋白和与编码目的基因产物的核苷酸序列可操作地连接的启动子，其中所述rAAV病毒体用于治疗或预防关节炎疾病或用于治疗或预防与关节炎疾病相关联的症状，其中所述修饰的衣壳蛋白在所述蛋白的C末端部分包含氨基酸序列Z，其残基暴露在所述衣壳蛋白的表面上，优选地其中所述目的产物是免疫抑制剂。2.根据权利要求1所述使用的rAAV病毒体，其中所述氨基酸序列Z:a.包含式I的氨基酸残基序列或由其组成：y
–
G
–
Q
–
x
–
G
–
(x)3–
R
–
(x)3–
y
–
A
–
Q
–
A
–
A其中x表示单个氨基酸残基并且其中y表示0、1或2个氨基酸残基；和b.存在于对应于距野生型AAV衣壳蛋白C末端的位置100
‑
200，优选120
‑
180，更优选130
‑
170，更优选140
‑
160的氨基酸残基的位置。3.根据权利要求1或2所述使用的rAAV病毒体，其中所述目的基因产物是IL
‑
6抑制剂。4.根据权利要求1或2所述使用的rAAV病毒体，其中所述目的基因产物是TNFα抑制剂。5.根据权利要求1或2所述使用的rAAV病毒体，其中所述目的基因产物是IL
‑
1抑制剂。6.根据权利要求3所述使用的rAAV病毒体，其中所述IL
‑
6抑制剂选自由IL
‑
6受体拮抗剂、人源化抗IL
‑
6单克隆抗体、嵌合抗IL
‑
6单克隆抗体、人源化兔抗IL
‑
6单克隆抗体和可溶性IL
‑
6受体组成的组，优选地其中至少一种i)所述IL
‑
6受体拮抗剂是托珠单抗和赛诺菲单抗中的至少一种；ii)所述人源化抗IL
‑
6单克隆抗体是奥洛组单抗和西鲁库单抗中的至少一种；iii)所述嵌合抗IL
‑
6单克隆抗体是司妥昔单抗；并且iv)所述人源化兔抗IL
‑
6单克隆抗体是克拉扎珠单抗。7.根据权利要求4所述使用的rAAV病毒体，其中所述TNFα抑制剂选自由依那西普、英夫利昔单抗、阿达木单抗、赛妥珠单抗聚乙二醇和戈利木单抗组成的组，优选地其中所述TNFα抑制剂是依那西普。8.根据权利要求5所述使用的rAAV病毒体，其中所述IL
‑
1抑制剂选自由以下组成的组：i)IL
‑
1受体拮抗剂，优选人IL
‑
1受体拮抗剂，优选人IL
‑
1受体拮抗剂阿那白滞素；ii)抗IL
‑
1单克隆抗体，优选人抗IL
‑
1单克隆抗体，优选人IL
‑
1单克隆抗体卡那奴单抗或吉伏组单抗iii)人二聚抗IL
‑
1融合蛋白，优选人二聚抗IL
‑
1融合蛋白利纳西普；以及iv)人双可变结构域抗IL
‑
1免疫球蛋白，优选人双可变结构域抗IL
‑
1免疫球蛋白鲁吉珠单抗。9.根据前述权利要求中任一项所述使用的rAAV病毒体，其中所述启动子是组成型启动子或诱导型启动子，优选所述启动子是NFκB应答型启动子，优选NFκB应答型CMV启动子，优选NFκB应答型最小CMV启动子。10.根据前述权利要求中任一项所述使用的rAAV病毒体，其中所述序列Z包含在所述修饰的衣壳蛋白中由式II表示的位置处：EEEIxxxxPVATExxGxxxxNxQy
‑
Z
‑
(x)
n
LPGMVWQxRDVYLQGPIWAKIPHTDGa.其中Z、x和y如权利要求2中所定...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：海德堡大学，
类型：发明
国别省市：