制备口服剂型的方法技术

本发明专利技术涉及一种制备口服剂型的方法，所述方法包括以下步骤：使至少一种细胞穿透肽CPP反应，纯化CPP‑脂质缀合物，加工脂质批料以获得CPP修饰的脂质体，以及将脂质体冻干物掺入到口服剂型中。本发明专利技术还涉及口服剂型和用于治疗方法的口服剂型。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】制备口服剂型的方法本专利技术涉及制备口服剂型的方法、口服剂型和使用口服剂型的方法。口服剂型在本领域中是已知的。它们包含例如片剂、丸剂、胶囊、液体、凝胶、悬浮液、泡腾制剂、靶丸、口香糖、锭剂、颗粒剂、薄膜、喷雾剂和粉剂。口服药物剂型非常方便，并且提高疗法依从性。根据欧洲药典(Ph.Eur.)等规定，口服剂型必须具有一定均匀性的剂量单位。要求“一批口服剂型中的每个单位必须在标签要求的狭窄范围内具有活性物质含量(Ph.Eur.,2.9.40)。“活性物质含量”是指该物质以所需的量存在于剂量单位中，并且化学上未发生变化，例如未降解、未衍生化或未共价结合到其它分子上。为了实现剂量单位的这种均匀性，制备口服剂型的方法必须考虑可能影响最终剂量单位中活性物质的量和化学完整性的任何因素。随着制备口服剂型的方法的总体复杂性增加，确保最终产品中活性物质的均匀性将变得更困难。包含化学反应、反应性赋形剂的存在或使用具有反应性官能团的活性物质的制备口服剂型的方法将增加这种复杂性，并且使制造商更难以保证最终产品的均匀性和抑制化学副反应。口服剂型可以含有活性药物成分(API)。最相关和商业上最成功的API是肽和蛋白质，包含例如抗体和酶。这些API由形成肽链的多个氨基酸组成。许多氨基酸在其侧链中具有反应性官能团。例如，半胱氨酸具有硫醇基团，或赖氨酸在其侧链中携带氨基基团。其它氨基酸在其侧链中具有进一步的反应性官能团。由于肽和蛋白质API中侧链反应基团的多样性，可能会发生多种副反应。用这些种类的API制备口服剂型尤其困难，因为它们容易发生不想要的副反应，该不想要的副反应减少剂型中未改变的API的量并影响产品的均匀性。已经发生不想要的副反应的肽和蛋白质可能形成免疫原性产物，其可能导致受试者中潜在的致命过敏反应。在另一方面，肽和蛋白质需要复杂的剂型来确保口服生物利用度。对于具有显著分子大小的肽，诸如多肽和蛋白质，尤其如此。复杂的剂型需要复杂的生产方法，这再次使得很难排除不想要的副反应并确保它们的稳定性直到给药。这同样适用于具有相同特征(即反应基团和低固有生物利用度)的其它API。在复杂的方法中，很难以不发生相关副反应的方式控制中间阶段。因此，将优选的是具有使用不发生任何副反应或其它不想要的过程的中间体的方法。本专利技术的一个目的是提出一种制备口服剂型的方法，该方法克服了现有技术方法中提到的问题。另外的目的是提供具有优异均匀性的剂型。
技术实现思路
在一个方面中，本专利技术包含一种制备口服剂型的方法，包括以下步骤：a、使至少一种CPP(细胞穿透肽)与至少一种第一脂质反应以获得CPP-脂质缀合物，b、纯化CPP-脂质缀合物以获得纯化的CPP-脂质缀合物组合物，c、制备脂质批料，其至少包括c1、限定量的所述CPP-脂质缀合物，和c2、限定量的至少一种非CPP缀合的第二脂质，d、加工所述脂质批料以获得ζ电势大于2mV且小于10mV的CPP修饰的脂质体，e、冻干所述CPP修饰的脂质体以获得脂质体冻干物，f、将脂质体冻干物掺入到口服剂型中，其中相对于所述组合物中的CPP-脂质缀合物的总摩尔量，纯化的CPP-脂质缀合物中非缀合的第一脂质的量小于5mol％。本专利技术人发现，该方法允许生产口服剂型，该口服剂型在生产期间和在生产之后特别耐副反应，并且提供具有优异的均匀性和高再现性的产品。令人惊讶的是，通过该方法获得的口服剂型具有优异的产品均匀性。在另一方面，本专利技术包含一种口服剂型，特别是可通过本专利技术的工艺获得的口服剂型，其包括CPP修饰的脂质体，所述脂质体具有-与第一脂质缀合的至少一种CPP，-至少一种非CPP缀合的第二脂质，和-至少一种药物活性成分(API)，其中所述CPP修饰的脂质体具有在50nm至250nm范围内的Z-平均直径和正ζ电势，优选地在>2mV至<10mV的范围内。发现这些剂型具有优异的均匀性，特别是当使用肽和蛋白质作为活性物质时。除了API含量的均匀性之外，均匀性还通过脂质体ζ电势和大小的低批次间变化来确定。根据本专利技术，“肽”具有至少一个肽键，将至少两个氨基酸连接在一起。“多肽”至少具有八个氨基酸。“蛋白质”至少具有30个氨基酸。本专利技术对于作为API的“多肽”和“蛋白质”特别有用。术语“脂质体”是指由脂质双层组成的人工制备的囊泡。脂质体可以用于递送API，因为它们具有将部分水溶液包封在亲脂性双层膜内的独特性质。亲脂性化合物可以溶解在脂质双层中，并且通过这种方式脂质体可以携带亲脂性化合物和亲水性化合物。为了将分子递送至作用位点，脂质双层可以与其它双层诸如细胞膜融合，从而递送脂质体内容物。ζ电势可以通过本领域中已知的方法来测定。ζ电势可以在使用pH为7.4的50mM磷酸盐缓冲液将脂质体稀释至0.95mg/ml的脂质浓度后测定。来自MalvernTM(英国伍斯特郡莫尔文仪器有限公司(MalvernInstrumentsLtd.,Worcestershire,UnitedKingdom))的ZetasizerNanoZS自动模式的默认设置可以选择如下：测量数量＝3；运行持续时间＝10s；运行次数＝10；平衡时间＝60s；溶剂折射率1.330；聚苯乙烯比色皿折射率1.590；粘度＝0.8872mPas；温度＝25℃；介电常数＝78.5F/m；反向散射模式(173°)；自动电压选择；Smoluchowski方程。具体实施方式本专利技术中使用的CPP可以选自穿膜肽、TAT(转录的反式激活子)、MAP(模型两亲肽)、聚精氨酸(包含R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和R12)、pVEC、转运蛋白、MPG及其组合。本专利技术中使用的CPP可以是环化的或线性的、二聚化的或未二聚化的。CPP可能由以下序列组成，或包括以下序列。穿膜肽可以包含SEQIDNO:1；TAT可以包含SEQIDNO:2；MAP可以包含SEQIDNO:3；R9可以包含SEQIDNO:4；pVEC可以包含SEQIDNO:5；转运蛋白可以包含SEQIDNO:6；和/或MPG可以包含SEQIDNO:7。所列的CPP包含上述序列的功能性衍生物。功能性衍生物包含CPP，该CPP由上述序列或与其具有至少90％或至少95％序列同一性的序列组成或包括所述序列。任选地，所述功能性衍生物可以包含另外的氨基酸。在一个实施例中，本专利技术中使用的CPP是带正电荷的和/或环化的。环化的CPP具有比线性CPP更低反应性和更稳定的优点，这在本专利技术的概念内是有利的。环肽甚至可以在没有肠溶衣的情况下通过胃通道存活，因为它们比线性CPP对酶裂解更稳定。如本文所使用的，术语“环化的”不应被解释为仅涉及具有一个环系统的肽，即，本专利技术不限于单环肽。因此，本专利技术包含环肽，其中两个或更多个环系统彼此共价连接。此外，环肽还可以包括不属于环系统的一部分的氨基酸，即本专利技术包含支链环肽。优选地，环肽是单环肽，并且更优选地是无支链的单环肽。此外，CPP可以由L-氨基酸、D-氨基酸或其混合物组成，其中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备口服剂型的方法，包括以下步骤：/na、使至少一种CPP与至少一种第一脂质反应以获得CPP-脂质缀合物，/nb、纯化所述CPP-脂质缀合物以获得纯化的CPP-脂质缀合物组合物，/nc、制备脂质批料，所述脂质批料至少包括：/nc1、限定量的所述CPP-脂质缀合物，和/nc2、限定量的至少一种非CPP缀合的第二脂质，/nd、加工所述脂质批料以获得ζ电势大于2mV且小于10mV的CPP修饰的脂质体，/ne、冻干所述CPP修饰的脂质体以获得脂质体冻干物，/nf、将所述脂质体冻干物掺入到口服剂型中，/n其中相对于所述组合物中的CPP-脂质缀合物的总摩尔量，所述纯化的CPP-脂质缀合物中非缀合的第一脂质的量小于5mol％。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180928 EP 18197651.51.一种制备口服剂型的方法，包括以下步骤：
a、使至少一种CPP与至少一种第一脂质反应以获得CPP-脂质缀合物，
b、纯化所述CPP-脂质缀合物以获得纯化的CPP-脂质缀合物组合物，
c、制备脂质批料，所述脂质批料至少包括：
c1、限定量的所述CPP-脂质缀合物，和
c2、限定量的至少一种非CPP缀合的第二脂质，
d、加工所述脂质批料以获得ζ电势大于2mV且小于10mV的CPP修饰的脂质体，
e、冻干所述CPP修饰的脂质体以获得脂质体冻干物，
f、将所述脂质体冻干物掺入到口服剂型中，
其中相对于所述组合物中的CPP-脂质缀合物的总摩尔量，所述纯化的CPP-脂质缀合物中非缀合的第一脂质的量小于5mol％。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述CPP选自线性或环化的聚精氨酸、线性或环化的穿膜肽、线性或环化的TAT(转录的反式激活子)-肽、线性或环化的MAP(模型两亲肽)、线性或环化的pVEC、线性或环化的转运素以及线性或环化的MPG、其二聚体及其组合。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述第一脂质选自由类固醇(包含胆固醇及其衍生物)、脂肪酸、磷脂及其组合组成的群组。


4.根据前述权利要求中至少一个权利要求所述的方法，其中相对于所述脂质体中第一脂质和第二脂质的累积量，所述CPP修饰的脂质体中CPP的量不超过4mol％，优选地不超过2.5mol％。


5.根据前述权利要求中至少一个权利要求所述的方法，其中纯化所述CPP-脂质缀合物以获得纯化的CPP-脂质缀合物组合物包含以下步骤：
b1、将CPP-脂质缀合物与非缀合的第一脂质分离，和
b2、任选地将CPP-脂质缀合物与携带多于一种CPP的非缀合的CPP和/或缀合物分离。


6.根据前述权利要求中至少一个权利要求所述的方法，其中加工所述脂质批料以获得CPP修饰的...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·乌尔，M·绍特，WE·哈菲利，
申请(专利权)人：海德堡大学，
类型：发明
国别省市：德国;DE