【技术实现步骤摘要】
多重核酸合成的组合物和方法
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2013年3月15日提交的美国临时专利申请第61/792,245号的权益和优先权,其通过引用全文纳入本文。
[0003]关于序列表
[0004]本说明书包括所附序列表,其包括创建于2014年3月13日,名为"127662
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014001_ST25.txt"、大小为2.628字节的文件,其内容通过引用全文纳入本文。
专利
[0005]本专利技术的方法和组合物涉及核酸组装,并且具体地涉及高保真、多重核酸组装反应。
[0006]背景
[0007]重组和合成核酸在研究、工业、农业和医学中有许多应用。可以使用重组和合成核酸来表达和获得大量的多肽,包含酶、抗体、生长因子、受体和其它可用于多种医学、工业或农业目的的多肽。也可以使用重组和合成核酸来产生遗传修饰的生物体,包含修饰的细菌、酵母、哺乳动物、植物和其它生物体。遗传修饰的生物体可以用于研究(例如,疾病的动物模型、理解生物过程的工具等)、工业(例如,作为蛋白表达的宿主生物体、用于产生工业产物的生物反应器、环境补救的工具、分离或修饰具有工业应用的天然化合物等)、农业(例如,具有增加的产率或增加的对疾病或环境压力的抗性的经修饰作物)和用于其它应用。重组和合成核酸也可以用作治疗组合物(例如,用于修饰基因表达、用于基因治疗等)或用作诊断工具(例如,病症的探针等)。
[0008]已经开发了多种技术用于修饰存在的核酸(例如,天然存在的核酸)来产生重组核酸。例如,可 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种生成具有多个突出端的多个双链寡核苷酸的方法,所述方法包括:a)熔解第一多个钝末端双链寡核苷酸和第二多个钝末端双链寡核苷酸,以形成多个单链寡核苷酸;和b)使所述多个单链寡核苷酸重新退火,以形成具有多个突出端的多个双链寡核苷酸,其中所述多个突出端设计为彼此之间相对相互正交。2.如权利要求1所述的方法,其中所述第一和第二多个钝末端双链寡核苷酸在熔解前进行错误校正或错误减少。3.如权利要求1所述的方法,其中所述第一多个钝末端双链寡核苷酸连接至支持物。4.如权利要求3所述的方法,其中所述支持物是固体。5.如权利要求3所述的方法,其中所述支持物是珠。6.如权利要求3所述的方法,其中所述支持物是茎环多核苷酸。7.如权利要求3所述的方法,其中所述多个钝末端双链寡核苷酸中的各寡核苷酸固定至相同支持物。8.如权利要求3所述的方法,其中所述多个钝末端双链寡核苷酸中的各寡核苷酸固定至不同支持物。9.如权利要求1所述的方法,其中所述第二多个钝末端双链寡核苷酸连接至支持物。10.如权利要求9所述的方法,其中所述支持物是固体。11.如权利要求9所述的方法,其中所述支持物是珠或芯片。12.如权利要求9所述的方法,其中所述支持物是茎环多核苷酸。13.如权利要求9所述的方法,其中所述多个钝末端双链寡核苷酸中的各寡核苷酸固定至相同支持物。14.如权利要求9所述的方法,其中所述多个钝末端双链寡核苷酸中的各寡核苷酸固定至不同支持物。15.如权利要求2所述的方法,其中所述第一和第二多个钝末端双链寡核苷酸在熔解前采用错配结合蛋白进行错误校正或错误减少。16.如权利要求1所述的方法,其中所述第一和第二多个钝末端双链寡核苷酸在同一反应体积中。17.如权利要求1所述的方法,其中第一多个钝末端双链寡核苷酸在第一反应体积中,且第二多个钝末端双链寡核苷酸在第二反应体积中。18.如权利要求17所述的方法,其还包括将第一和第二反应体积合并。19.如权利要求1所述的方法,其中,所述第一多个钝末端双链寡核苷酸通过扩增支持物上结合的第一多个单链、结合支持物的模板寡核苷酸来产生。20.如权利要求1所述的方法,其中,所述第二多个钝末端双链寡核苷酸通过扩增固体支持物上结合的第二多个单链、结合支持物的模板寡核苷酸来产生。21.如权利要求19或20所述的方法,其中,所述多个单链、结合支持物的模板寡核苷酸中的各寡核苷酸包含5
’
或3
’
,或5
’
和3
’
扩增序列,其中所述扩增序列包含引物结合位点。22.如权利要求21所述的方法,其中,所述扩增序列包含限制性酶识别位点。23.如权利要求22所述的方法,其中,所述位点是IIs型限制性酶位点。24.如权利要求22或23所述的方法,其还包括利用限制性酶来切割扩增序列,所述限制
性酶识别所述限制性酶识别位点。25.如前述权利要求中任一项所述的方法,其中,第一多个突出端与第二多个粘性末端双链寡核苷酸的第二多个突出端互补,其中所述第二多个突出端被设计为彼此之间相互正交。26.一种产生多个粘性末端双链寡核苷酸的方法,包括:a)熔解第一多个钝末端双链寡核苷酸和第二多个钝末端双链寡核苷酸,以形成第一多个单链寡核苷酸;b)使第一多个单链寡核苷酸重新退火,以形成具有第一多个突出端的第一多个粘性末端双...
【专利技术属性】
技术研发人员:J,
申请(专利权)人:GEN九股份有限公司,
类型:发明
国别省市:
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