抗人血红蛋白的抗体及其应用和诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种抗人血红蛋白的抗体及其应用和诊断试剂盒，涉及抗体技术领域。本发明专利技术公开的抗人血红蛋白的抗体或其功能性片段具有重链互补决定区和轻链互补决定区。该抗体对人血红蛋白具有较好的结合特异性以及亲和力，能够用于检测样本例如粪便样本中的人血红蛋白，为人血红蛋白的检测和相关疾病的诊断提供了更多样的抗体选择。供了更多样的抗体选择。供了更多样的抗体选择。

【技术实现步骤摘要】
抗人血红蛋白的抗体及其应用和诊断试剂盒


[0001]本专利技术涉及抗体
，具体而言，涉及一种抗人血红蛋白的抗体及其应用和诊断试剂盒。

技术介绍

[0002]粪便中的血红蛋白(Hb，Hemoglobin)又叫大便潜血(FecalOccultBlood，FOB)，目前在临床被看作是直肠癌和结肠癌的肿瘤标志物之一。潜血是指消化道出血量在5ml/d以下，肉眼不见血色，显微镜下不见红细胞被破坏的出血。大便潜血试验是胃肠道出血常规诊断试验，对胃肠疾病的诊断意义重大，也是消化道肿瘤的重要筛查手段。
[0003]临床研究证实，粪便中带癌肿的微量出血是早期肠癌唯一可以查出的异常现象，因此，潜血实验成为人们不断深入研究的热点。过去一直沿用化学法来检测粪便潜血，近年研发了胶体金免疫层析法，血红蛋白单克隆抗体检测的免疫法与传统的化学法相比，灵敏度和特异性都有了很大的提高，且不受饮食或相关药物的影响，对早期肠癌的诊断和治疗发挥了重要的作用。
[0004]粪便潜血试验是消化道出血和肿瘤的主要诊断指标。目前临床上，粪便潜血试验常用的一类过筛试验方法，是利用血液的主要成份血红蛋白(Hb)中的亚铁血红素，具有类似过氧化物酶作用而设计的简易化学检查法。这类方法的氧化显色剂较多，如联苯胺、邻-甲苯胺、邻联甲苯胺、愈创木、还原酚酞、氨基吡啉、无色孔雀绿、四甲基联苯胺、二苯胺以及二甲基联苯胺等，因而方法众多。上述方法虽然简便易行，但特异性较低、干扰因素较多。动物血、肉、肝脏及富含叶绿素食物、铁剂、维生素C和中药等均可引起假阳性。
>[0005]而基于免疫学原理的胶体金免疫层析法相较上述方法有明显的优势，诊断快，不受动物血等物质的干扰特异性更好，操作简单，不需要特殊设备，主要的原料为针对FOB的特异性单克隆抗体。在基于免疫学原理检测抗原或抗体的技术上，由于抗原与抗体的比例不合适会导致出现HOOK效应。出现HOOK效应时本领域技术人员可以根据需要调整抗原与抗体的比例即可。
[0006]但目前针对人血红蛋白的单克隆抗体少，灵敏度、亲和力以及特异性也都存在缺陷。
[0007]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种抗人血红蛋白的抗体及其应用和检测试剂盒。该抗体对人血红蛋白具有较好的结合特异性以及亲和力，能够用于检测样本例如粪便样本中的人血红蛋白，为人血红蛋白的检测和以人血红蛋白为标志物的相关疾病的诊断或辅助诊断提供了更多样的抗体选择。
[0009]本专利技术是这样实现的：
[0010]一方面，本专利技术提供一种抗人血红蛋白的抗体或其功能性片段，所述抗体或其功
能性片段具有如下互补决定区：
[0011]CDR-VH1：G-X1-S-X2-T-S-X3-Y-S-W-H；其中：X1是F或Y；X2是L、V或I；X3是N或D；
[0012]CDR-VH2：Y-X1-H-Y-S-G-S-X2-X3-Y-N-P-S-X4-K-S；其中：X1是I或L；X2是S或T；X3是S或T；X4是L或I；
[0013]CDR-VH3：A-X1-T-Y-Y-X2-F-Y-A；其中：X1是Q、R或K；X2是A或G；
[0014]CDR-VL1：A-S-X1-S-X2-D-S-Y-G-N-S-F-X3-H；其中：X1是Q或E；X2是I、V或L；X3是I、V或L；
[0015]CDR-VL2：X1-A-S-N-X2-A-S；其中：X1是I、V或L；X2是I、V或L；
[0016]CDR-VL3：Q-Q-N-X1-E-X2-P-Y；其中：X1是Q、N或H；X2是D或N。
[0017]具有上述的互补决定区结构的抗体或其功能性片段，其能够特异性结合人血红蛋白，对人血红蛋白具有较高的亲和力，用于检测人血红蛋白，具有较好的灵敏度和特异性。该抗体可用于诊断或辅助诊断以人血红蛋白为标志物的相关肿瘤，例如用于检测FOB，对肠癌进行辅助诊断。本专利技术为人血红蛋白的检测和以人血红蛋白为标志物的相关疾病的诊断或辅助诊断提供更多的抗体选择。
[0018]在可选的实施方式中，CDR-VH1中，X1是Y；CDR-VH2中，X1是I；CDR-VH3中，X2是G；CDR-VL1中，X1是E；CDR-VL3中，X2是D。
[0019]在各互补决定区中，当CDR-VH1中，X1是Y；CDR-VH2中，X1是I；CDR-VH3中，X2是G；CDR-VL1中，X1是E；CDR-VL3中，X2是D时，该抗体对人血红蛋白的亲和力有进一步提高。
[0020]在一些实施方式中，CDR-VH1中，X2是L。
[0021]在一些实施方式中，CDR-VH1中，X2是V。
[0022]在一些实施方式中，CDR-VH1中，X2是I。
[0023]在一些实施方式中，CDR-VH1中，X3是N。
[0024]在一些实施方式中，CDR-VH1中，X3是D。
[0025]在一些实施方式中，CDR-VH2中，X2是S。
[0026]在一些实施方式中，CDR-VH2中，X2是T。
[0027]在一些实施方式中，CDR-VH2中，X3是S。
[0028]在一些实施方式中，CDR-VH2中，X3是T。
[0029]在一些实施方式中，CDR-VH2中，X4是L。
[0030]在一些实施方式中，CDR-VH2中，X4是I。
[0031]在一些实施方式中，CDR-VH3中，X1是Q。
[0032]在一些实施方式中，CDR-VH3中，X1是R。
[0033]在一些实施方式中，CDR-VH3中，X1是K。
[0034]在一些实施方式中，CDR-VL1中，X2是I。
[0035]在一些实施方式中，CDR-VL1中，X2是V。
[0036]在一些实施方式中，CDR-VL1中，X2是L。
[0037]在一些实施方式中，CDR-VL1中，X3是I。
[0038]在一些实施方式中，CDR-VL1中，X3是V。
[0039]在一些实施方式中，CDR-VL1中，X3是L。
[0040]在一些实施方式中，CDR-VL2中，X1是I。
[0041]在一些实施方式中，CDR-VL2中，X1是V。
[0042]在一些实施方式中，CDR-VL2中，X1是L。
[0043]在一些实施方式中，CDR-VL2中，X2是I。
[0044]在一些实施方式中，CDR-VL2中，X2是V。
[0045]在一些实施方式中，CDR-VL2中，X2是L。
[0046]在一些实施方式中，CDR-VL3中，X1是Q。
[0047]在一些实施方式中，CDR-VL3中，X1是N。
[0048]在一些实施方式中，CDR-VL3中，X1是H。
[0049]在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段的各互补决定区选自如下突变组合1-51中的任意一种：
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人血红蛋白的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段具有如下互补决定区：CDR-VH1：G-X1-S-X2-T-S-X3-Y-S-W-H；其中：X1是F或Y；X2是L、V或I；X3是N或D；CDR-VH2：Y-X1-H-Y-S-G-S-X2-X3-Y-N-P-S-X4-K-S；其中：X1是I或L；X2是S或T；X3是S或T；X4是L或I；CDR-VH3：A-X1-T-Y-Y-X2-F-Y-A；其中：X1是Q、R或K；X2是A或G；CDR-VL1：A-S-X1-S-X2-D-S-Y-G-N-S-F-X3-H；其中：X1是Q或E；X2是I、V或L；X3是I、V或L；CDR-VL2：X1-A-S-N-X2-A-S；其中：X1是I、V或L；X2是I、V或L；CDR-VL3：Q-Q-N-X1-E-X2-P-Y；其中：X1是Q、N或H；X2是D或N。2.根据权利要求1所述的抗人血红蛋白的抗体或其功能性片段，其特征在于，CDR-VH1中，X1是Y；CDR-VH2中，X1是I；CDR-VH3中，X2是G；CDR-VL1中，X1是E；CDR-VL3中，X2是D；优选的，CDR-VH1中，X2是L；优选的，CDR-VH1中，X2是V；优选的，CDR-VH1中，X2是I；优选的，CDR-VH1中，X3是N；优选的，CDR-VH1中，X3是D；优选的，CDR-VH2中，X2是S；优选的，CDR-VH2中，X2是T；优选的，CDR-VH2中，X3是S；优选的，CDR-VH2中，X3是T；优选的，CDR-VH2中，X4是L；优选的，CDR-VH2中，X4是I；优选的，CDR-VH3中，X1是Q；优选的，CDR-VH3中，X1是R；优选的，CDR-VH3中，X1是K；优选的，CDR-VL1中，X2是I；优选的，CDR-VL1中，X2是V；优选的，CDR-VL1中，X2是L；优选的，CDR-VL1中，X3是I；优选的，CDR-VL1中，X3是V；优选的，CDR-VL1中，X3是L；优选的，CDR-VL2中，X1是I；优选的，CDR-VL2中，X1是V；优选的，CDR-VL2中，X1是L；
优选的，CDR-VL2中，X2是I；优选的，CDR-VL2中，X2是V；优选的，CDR-VL2中，X2是L；优选的，CDR-VL3中，X1是Q；优选的，CDR-VL3中，X1是N；优选的，CDR-VL3中，X1是H；优选的，所述抗体或其功能性片段的各互补决定区选自如下突变组合1-51中的任意一种：
3.根据权利要求2所述的抗人血红蛋白的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段与人血红蛋白以K
D
≤1
×
10-9
mol/L的亲和力结合；优选的，K
D
≤8
×
10-11
mol/L。4.根据权利要求1所述的抗人血红蛋白的抗体或其功能性片段，其特征在于，CDR-VH1中，X1是F；CDR-VH2中，X1是L；CDR-VH3中，X2是A；CDR-VL1中，X1是Q；CDR-VL3中，X2是N；优选的，所述抗体或其功能性片段的各互补决定区选自如下突变组合52-58中的任意一种：5.根据权利要求1-4任一项所述的抗人血红蛋白的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体包括序列依次如SEQ ID NO:1-4所示的轻链骨架区FR1-L、FR2-L、FR3-L及FR4-L，和/或，序列依次如SEQ ID NO:5-8所示的重链骨架区FR1-H、FR2-H、FR3-H及FR4-H；
优选的，所述抗体还包含恒定区；优选的，所述恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE和IgD中的任意一者的恒定区；优选的，所述恒定区的种属来源为绵羊、山羊、牛、马、乳牛、猪、大鼠、狗、猫、兔、骆...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔鹏，何志强，孟媛，钟冬梅，姜瑢瑢，何雯雯，范凌云，
申请(专利权)人：东莞市朋志生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：