绿色荧光蛋白鲨源纳米抗体、制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种绿色荧光蛋白鲨源纳米抗体、制备方法及其应用。纳米抗体核苷酸序列如SEQ ID NO：1

【技术实现步骤摘要】
ID NO.7或SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.12所示。
[0009]所述鲨源纳米抗体在绿色荧光蛋白的亲和纯化、免疫学检测、细胞成像等领域的应用。
[0010]二、一种绿色荧光蛋白鲨源纳米抗体的制备方法，所述鲨源纳米抗体的制备方法按照以下步骤进行：
[0011]1)制备绿色荧光蛋白；
[0012]2)免疫条纹斑竹鲨；
[0013]3)构建噬菌体抗体文库；
[0014]4)筛选特异性纳米抗体；
[0015]5)抗体重组表达。
[0016]所述绿色荧光蛋白的制备是将绿色荧光蛋白的基因由原核或真核系统重组表达及纯化所得。
[0017]所述免疫条纹斑竹鲨具体为：
[0018]S1、将绿色荧光蛋白溶液与弗氏完全佐剂以体积比1:1混合，待乳化完全后，皮下注射入条纹斑竹鲨侧鳍，此为第一次免疫；
[0019]S2、此后，每间隔7～28天加强免疫，每次加强免疫是将绿色荧光蛋白溶液与弗氏不完全佐剂以体积比1:1混合，待乳化完全后，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种绿色荧光蛋白鲨源纳米抗体，其特征在于：所述鲨源纳米抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示。2.权利要求1所述的绿色荧光蛋白鲨源纳米抗体的应用，其特征在于：所述鲨源纳米抗体在绿色荧光蛋白的亲和纯化、免疫学检测、细胞成像等领域的应用。3.一种权利要求1或2所述绿色荧光蛋白鲨源纳米抗体的制备方法，其特征在于：所述鲨源纳米抗体的制备方法按照以下步骤进行：1)制备绿色荧光蛋白；2)免疫条纹斑竹鲨；3)构建噬菌体抗体文库；4)筛选特异性纳米抗体；5)抗体重组表达。4.根据权利要求3所述的绿色荧光蛋白鲨源纳米抗体的制备方法，其特征在于：所述免疫条纹斑竹鲨具体为：S1、将绿色荧光蛋白溶液与弗氏完全佐剂以体积比1:1混合，待乳化完全后，皮下注射入条纹斑竹鲨侧鳍，此为第一次免疫；S2、此后，每间隔7～28天加强免疫，每次加强免疫是将绿色荧光蛋白溶液与弗氏不完全佐剂以体积比1:1混合，待乳化完全后，皮下注射入条纹斑竹鲨侧鳍；S3、重复上述免疫次数共为4～6次，单次免疫剂量为每只条纹斑竹鲨25～50μg。5.根据权利要求3所述的绿色荧光蛋白鲨源纳米抗体的制备方法，其特征在于：所述构建噬菌体抗体文库具体为：3.1)末次免疫结束后3～14天，利用麻醉剂MS
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222喷洒条纹斑竹鲨的口鼻和鳃，使其麻醉，再经尾静脉采集条纹斑竹鲨的外周血，对外周血离心收集淋巴细胞溶液，从淋巴细胞溶液中提取总RNA并反转录为cDNA；3.2)以cDNA为模板，用高保真酶扩增获得VNAR片段；3.3)以pR2噬菌粒为模板，用高保真酶扩增pR2噬菌粒，利用内切酶酶切pR2噬菌粒；3.4)将VNAR片段与酶切之后的pR2噬菌粒通过无缝克隆连接，电转化感受态细菌，稀释涂布细菌，将细菌刮板冻存，即为噬菌体抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玉磊，解鑫鑫，曹敏杰，金腾川，谢仰杰，马欢，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：