本发明专利技术公开了一种基于猫过敏原Fel d1的卵黄抗体的制备方法，猫过敏原Fel d1的氨基酸序列如SEQ ID.NO.1所示，方法包括以下步骤：将猫过敏原Fel d1重组抗原与一次免疫佐剂混合得到混合物；将混合物颈部皮下注射给产蛋高峰期的蛋鸡，收集鸡蛋；鸡蛋的卵黄中富集有对猫过敏原Fel d1特异的卵黄抗体。将猫过敏原Fel d1，通过注射禽类，产生的的特异性抗体高效的富集在卵黄中，是一种非侵入性的方法，既减少和完善了动物的使用，又安全高效且经济实惠。又安全高效且经济实惠。又安全高效且经济实惠。
【技术实现步骤摘要】
基于猫过敏原Fel d1的卵黄抗体的制备方法
[0001]本专利技术涉及生物抗体
，具体涉及一种基于猫过敏原Fel d1的卵黄抗体的制备方法。
技术介绍
[0002]接触来自其他物种的蛋白质，无论是通过空气传播还是通过食物或注射，都会导致人类的免疫反应，这可能导致过敏化，可能会诱发鼻炎甚至是危及生命的哮喘性炎症疾病。空气中来自家猫的过敏原是全世界最常见和最有力的过敏原因之一，而猫的主要过敏原Fel d1与90％以上的猫过敏患者会产生免疫反应。Fel d1产于皮脂腺、唾液、泪腺和肛腺，存在于唾液、眼泪、皮肤和皮毛中，它通过空气中的头皮屑从猫流到环境中。目前对于猫过敏有如下解决办法：建议移除家庭内所有可能含有过敏原或受污染的物件，例如枕头、毛毯、地毯、地毯等，以避免接触过敏原；建议做好环境清洁和使用空气加湿器和HEPA过滤器，也有助于缓解症状；建议移除产生过敏原的猫。然而，主人和他们的猫之间的联系往往十分紧密，以至于他们更有可能接受过敏对他们的健康的威胁，而不是放弃他们的宠物。另一种解决猫过敏问题的方法是降低猫科动物自身的Fel d1，这一方法不涉及猫与其主人的分离。可以采取的办法之一是让猫主动免疫，目的是在动物体内诱导抗fel d1抗体，但宠物每年都要忍受注射疫苗的痛苦且生产猫Fel d1疫苗成本高，效果不稳定。
[0003]如果可以从猫粮中加入从鸡蛋中提取的抗Fel d1 IgY，可使猫唾液和皮毛中的Fel d1活性降低。且从蛋黄中获得抗体是一种非侵入性的方法，不需要采血；而哺乳动物抗体的产生还包括对动物造成痛苦和痛苦的程序，故卵黄抗体的应用既减少和完善了动物的使用，又安全高效且经济实惠，为解决猫过敏这一难题提供了新的思路。
技术实现思路
[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种基于猫过敏原Fel d1的卵黄抗体的制备方法。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供了一种基于猫过敏原Fel d1的卵黄抗体的制备方法，所述猫过敏原Fel d1的氨基酸序列如SEQ ID.NO.1所示，所述方法包括以下步骤：
[0006]S1、将猫过敏原Fel d1重组抗原与一次免疫佐剂混合得到混合物；
[0007]S2、将所述混合物颈部皮下注射给产蛋高峰期的蛋鸡，收集鸡蛋；鸡蛋的卵黄中富集有对猫过敏原Fel d1特异的卵黄抗体。
[0008]上述的制备方法，进一步的，所述一次免疫佐剂为弗氏完全佐剂；或，氢氧化铝、CpG
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ODN 和BSF
‑
1按照质量比为1～3:2～4:4～7混合的混合物。
[0009]上述的制备方法，进一步的，每次疫苗注射的Fel d1重组蛋白的量为100～300μg/只。
[0010]上述的制备方法，进一步的，所述猫过敏原Fel d1重组抗原与一次免疫佐剂按照体积比为1:1混合。
[0011]上述的制备方法，进一步的，所述制备方法还包括以下步骤：
[0012]S3、三周后进行加强免疫，加强免疫时，猫过敏原Fel d1重组抗原与加强免疫佐剂混合；
[0013]S4、之后每间隔两周，按照所述S3的方法进行加强免疫。
[0014]上述的制备方法，进一步的，所述一次免疫佐剂和加强免疫佐剂为以下A或B中的一种：
[0015]A：一次免疫佐剂为弗氏完全佐剂，加强免疫佐剂为弗氏不完全佐剂；
[0016]B：一次免疫佐剂为氢氧化铝、CpG
‑
ODN和BSF
‑
1按照质量比为1～3:2～4:4～7混合的混合物，加强免疫佐剂为氢氧化铝、CpG
‑
ODN和BSF
‑
1按照质量比为1～3:2～4:4～7混合的混合物。
[0017]上述的制备方法，进一步的，所述猫过敏原Fel d1重组抗原与一次免疫佐剂按照体积比为1:1混合；所述猫过敏原Fel d1重组抗原与加强免疫佐剂按照体积比为1:1混合。
[0018]上述的制备方法，进一步的，所述S1中，所述猫过敏原Fel d1重组抗原采用以下方法制备得到：
[0019]S1
‑
1、以SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列为上游引物，以SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列为下游引物进行PCR扩增获得PCR扩增产物；
[0020]S1
‑
2、将所述PCR扩增产物PET
‑
30a(+)连接构建重组质粒；
[0021]S1
‑
3、将所述重组质粒转化至Top10感受态细胞中获得转化子；
[0022]S1
‑
4、提取所述转化子中的蛋白即为猫过敏原Fel d1重组抗原。
[0023]上述的制备方法，进一步的，所述S1
‑
4具体包括以下步骤：
[0024](1)挑取所述转化子中的阳性单菌落至含卡那霉素的LB液体培养基中培养至OD值达到0.6～0.8，加入IPTG诱导；
[0025](2)离心收集沉淀，加入Buffer A进行超声、离心得到沉淀一；
[0026](3)沉淀一用Buffer B重悬，搅拌、离心得到沉淀二；
[0027](4)沉淀二再用Buffer C重悬，搅拌、离心得到沉淀三；
[0028](5)沉淀三再用2M尿素重悬，搅拌、离心得到沉淀四；
[0029](6)沉淀四用Buffer D重悬，搅拌、离心，留上清，即为蛋白提取液。
[0030]上述的制备方法，进一步的，所述Buffer A的成分包括：20mM Tris
‑
HCl，150mM NaCl；
[0031]所述BufferB的成分包括：20mM Tris
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HCl，0.3％Triten X
‑
100；
[0032]所述Buffer C的成分包括：20mM Tris
‑
HCl，1M NaCl；
[0033]所述Buffer D的成分包括：50mM Tris
‑
HCl，150mM NaCl，20％甘油，6M尿素。
[0034]上述的制备方法，进一步的，所述(1)中，所述诱导具体为：37℃下诱导4h；
[0035]所述(2)，所述超声、离心具体为：以超声功率为35％～45％超声50min，每超声5s，间隔5s；超声结束后10000r/min，4℃离心40min；
[0036]所述(3)，所述搅拌、离心具体为：4℃搅拌40min，以10000r/min转速4℃离心30min；
[0037]所述(4)，所述搅拌、离心具体为：4℃搅拌40min，以10000r/min转速4℃离心30min；
[0038]所述(5)，所述搅拌、离心具体为：4℃搅拌60min，以10000r/min转速4℃离心30min；
[0039]所述(6)，所述搅拌、离心具体为：4℃搅拌过夜，本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种基于猫过敏原Fel d1的卵黄抗体的制备方法，其特征在于，所述猫过敏原Fel d1的氨基酸序列如SEQ ID.NO.1所示，所述方法包括以下步骤：S1、将猫过敏原Fel d1重组抗原与一次免疫佐剂混合得到混合物；S2、将所述混合物颈部皮下注射给产蛋高峰期的蛋鸡，收集鸡蛋；鸡蛋的卵黄中富集有对猫过敏原Fel d1特异的卵黄抗体。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述一次免疫佐剂为弗氏完全佐剂；或，氢氧化铝、CpG
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ODN和BSF
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1按照质量比为1～3:2～4:4～7混合的混合物。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述猫过敏原Fel d1重组抗原与一次免疫佐剂按照体积比为1:1混合。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤：S3、三周后进行加强免疫，加强免疫时，猫过敏原Fel d1重组抗原与加强免疫佐剂混合；S4、之后每间隔两周，按照所述S3的方法进行加强免疫。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述一次免疫佐剂和加强免疫佐剂为以下A或B中的一种：A：一次免疫佐剂为弗氏完全佐剂，加强免疫佐剂为弗氏不完全佐剂；B：一次免疫佐剂为氢氧化铝、CpG
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ODN和BSF
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1按照质量比为1～3:2～4:4～7混合的混合物，加强免疫佐剂为氢氧化铝、CpG
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ODN和BSF
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1按照质量比为1～3:2～4:4～7混合的混合物。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述猫过敏原Fel d1重组抗原与一次免疫佐剂按照体积比为1:1混合；所述猫过敏原Fel d1重组抗原与加强免疫佐剂按照体积比为1:1混合。7.根据1至6中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述S1中，所述猫过敏原Fel d1重组抗原采用以下方法制备得到：S1
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1、以SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列为上游引物，以SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列为下游引物进行PCR扩增获得PCR扩增产物；S1
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2、将所述PCR扩增产物PET
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30a(+)...
【专利技术属性】
技术研发人员：马文强，石楠，杜源，
申请(专利权)人：南京麦西崴克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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