一种原位检测分离酶裂解产物的方法技术

本发明专利技术提供了一种原位检测分离酶裂解产物的方法，包括使用抗REC8新表位单克隆抗体和/或抗RAD21新表位单克隆抗体，识别内聚蛋白水解后产生的新表位，再配合ChIP

【技术实现步骤摘要】
一种原位检测分离酶裂解产物的方法


[0001]本专利技术属于表观遗传学
，尤其涉及一种原位检测分离酶裂解产物的方法。

技术介绍

[0002]内聚蛋白复合物是一种多功能蛋白聚合物，在体细胞中既可在分裂间期组织基因表达，同时又在细胞有丝分裂周期的特定时间维持和释放姐妹染色单体内聚，发挥着关键作用。然而，在配子发育过程中，哺乳动物种系细胞中同时存在多种不同的内聚蛋白复合物，目前实验研究已经对至少两种内聚蛋白复合物进行了详细的特征研究：基于REC8和RAD21L的复合物(Biswas，2016)。虽然RAD21L在低等真核生物中不存在，但REC8是普遍存在的减数分裂内聚蛋白亚基，同时在减数分裂的染色体和染色单体分离中发挥关键作用。
[0003]减数分裂的基因表达程序和细胞调控极其复杂，涉及多个相互独立的调控因子。减数分裂内聚蛋白复合物REC8/SMC1B/SMC3/STAG3和RAD21L/SMC1B/SMC3/STAG3对于减数分裂的基因重组和染色体分离是必不可少的，而体细胞内聚蛋白复合物RAD21/SMC1A/SMC3/SA1orSA2在减数分裂中发挥的作用较小。在第一次减数分裂期间，分离酶对减数分裂内聚蛋白REC8的位点特异性剪切是真核生物产生配子的关键步骤，但目前，这一关键裂解步骤的染色体定位和动态分析只能基于较低等真核生物的下游遗传数据中大概推断。
[0004]内聚蛋白复合物是有丝分裂和减数分裂中染色体分离所必需的。减数分裂内聚蛋白亚基在癌症中经常以癌睾丸(CT)基因的形式表达，并与肿瘤的发生具有潜在的相关性。染色质内聚蛋白的移除依赖于分离酶的裂解，这一蛋白水解作用是人类生育的重要过程，也可能与某些癌症的发生初期具有相关性，非计划性的分裂和分裂阻滞都不利于物种的遗传内稳态。因此，准确研究出这一通路的作用机制及功能对于人类健康发展具有重要的意义。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种原位检测分离酶裂解产物的方法，其可以在原生未受干扰的细胞中绘制特定的染色质蛋白的裂解图谱。该方法以一种特异性单克隆抗体为中心，设计用于识别体内特定蛋白水解产生的多肽(例如新表位)的COOH末端，并结合ChIP
‑
seq分析，即可构建染色质蛋白的裂解图谱。既适用于非人类的灵长类动物，也适用于人类细胞，而且还可以被开发应用于其他物种。
[0006]为达此目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种原位检测分离酶裂解产物的方法，所述原位检测分离酶裂解产物的方法包括：
[0008]使用抗REC8新表位单克隆抗体和/或抗RAD21新表位单克隆抗体，识别内聚蛋白水解后产生的新表位，再配合ChIP
‑
seq分析，构建染色质蛋白裂解图谱，对分离酶裂解产物进行原位检测。
[0009]本专利技术中，所述原位检测分离酶裂解产物的方法通过使用可以分别识别两种内聚蛋白水解后产生的新表位的单克隆抗体，从而确定水解过程中具体的蛋白断裂位点，再结合ChIP
‑
seq分析等手段，构建了染色质蛋白裂解图谱，为相关的研究创造了条件。
[0010]优选地，所述的抗REC8新表位单克隆抗体识别REC8蛋白水解后产生的新表位；
[0011]所述抗REC8新表位单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID No.1所示的CDR3。
[0012]优选地，所述重链可变区包括SEQ ID No.2所示的CDR2。
[0013]优选地，所述重链可变区包括SEQ ID No.3所示的CDR1。
[0014]优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.4所示的CDR3。
[0015]优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.5所示的CDR2。
[0016]优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.6所示的CDR1。
[0017]优选地，所述重链可变区包括SEQ ID No.7所示的氨基酸序列。
[0018]优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.8所示的氨基酸序列。
[0019]优选地，所述抗REC8新表位单克隆抗体的重链包括SEQ ID No.9所示的氨基酸序列。
[0020]优选地，所述抗REC8新表位单克隆抗体的轻链包括SEQ ID No.10所示的氨基酸序列。
[0021]SEQ ID No.1：GVRQGAWFAY；
[0022]SEQ ID No.2：RNDPANGNSKYDPKFQG；
[0023]SEQ ID No.3：DTYMH；
[0024]SEQ ID No.4：FQGSHVFT；
[0025]SEQ ID No.5：KVSNRFS；
[0026]SEQ ID No.6：RSSQSIVHSNGNTYLE；
[0027]SEQ ID No.7：
[0028]EVQLQQSGAEVVKPGASVKLSCTASGFNIKDTYMHWVNQRPEQGLEWIGRNDPANGNSKYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCARGVRQGAWFAYWGQGTLVTVSA；
[0029]SEQ ID No.8：
[0030]DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVFTFGAGTKLELK；
[0031]SEQ ID No.9：
[0032]EVQLQQSGAEVVKPGASVKLSCTASGFNIKDTYMHWVNQRPEQGLEWIGRNDPANGNSKYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCARGVRQGAWFAYWGQGTLVTVSAATTTAPSVYPLVPGCSDTSGSSVTLGCLVKGYFPEPVTVKWNYGALSSGVRTVSSVLQSGFYSLSSLVTVPSSTWPSQTVICNVAHPASKTELIKRIEPRIPKPSTPPGSSCPPGNILGGPSVFIFPPKPKDALMISLTPKVTCVVVDVSEDDPDVHVSWFVDNKEVHTAWTQPREAQYNSTFRVVSALPIQHQDWMRGKEFKCKVNNKALPAPIERTISKPKGRAQTPQVYTIPPPREQMSKKKVSLTCLVTNFFSEAISVEWERNGELEQDYKNTPPILDSDGTYFLYSKLTVDTDSWLQGEIFTCSVVHEALHNHHTQKNLSRSPGK；
[0033]SEQ ID No.10：
[0034]DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFS
GSG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种原位检测分离酶裂解产物的方法，其特征在于，所述原位检测分离酶裂解产物的方法包括：使用抗REC8新表位单克隆抗体和/或抗RAD21新表位单克隆抗体，识别内聚蛋白水解后产生的新表位，再配合ChIP
‑
seq分析，构建染色质蛋白裂解图谱，对分离酶裂解产物进行原位检测。2.根据权利要求1所述的原位检测分离酶裂解产物的方法，其特征在于，所述的抗REC8新表位单克隆抗体识别REC8蛋白水解后产生的新表位；所述抗REC8新表位单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID No.1所示的CDR3；优选地，所述重链可变区包括SEQ ID No.2所示的CDR2；优选地，所述重链可变区包括SEQ ID No.3所示的CDR1；优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.4所示的CDR3；优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.5所示的CDR2；优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.6所示的CDR1；优选地，所述重链可变区包括SEQ ID No.7所示的氨基酸序列；优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.8所示的氨基酸序列；优选地，所述抗REC8新表位单克隆抗体的重链包括SEQ ID No.9所示的氨基酸序列；优选地，所述抗REC8新表位单克隆抗体的轻链包括SEQ ID No.10所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的原位检测分离酶裂解产物的方法，其特征在于，所述的抗RAD21新表位单克隆抗体识别RAD21蛋白水解后产生的新表位；所述抗RAD21新表位单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括SEQ ID No.11所示的CDR3；优选地，所述重链可变区包括SEQ ID No.12所示的CDR2；优选地，所述重链可变区包括SEQ ID No.13所示的CDR1；优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.14所示的CDR3；优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.15所示的CDR2；优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.16所示的CDR1；优选地，所述重链可变区包括SEQ ID No.17所示的氨基酸序列；优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID No.18所示的氨基酸序列；优选地，所述抗RAD21新表位单克隆抗体的重链包括SEQ ID No.19所示的氨基酸序列；优选地，所述抗RAD21新表位单克隆抗体的轻链包括SEQ ID No.20所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1～3任一项所述的原位检测分离酶裂解产物的方法，其特征在于，所述的染色质蛋白裂解图谱包括体细...

【专利技术属性】
技术研发人员：亚历山大，
申请(专利权)人：中国科学院广州生物医药与健康研究院，
类型：发明
国别省市：